Смертельное давление: Врач назвал незаметное смертельное осложнение после COVID-19

Содержание

Смертельное оружие

Неограниченное звуковое давление. Или SPL. Наверняка эти слова или аббревиатуру слышали и читали многие из тех, кто делает свои первые шаги в автозвуке. Скорее всего, кто-то сопоставляет SPL с чем-то очень громким, с большими сабвуферными динамиками, выставленными напоказ, и с прыгающими по крыше автомобиля пивными банками на автозвуковых шоу. Но дальше этого — непонятные цифры, которым, как дети, радуются серьезные взрослые люди, и звон в ушах. Попробуем разобраться более детально.

Большая советская энциклопедия гласит, что звуковым является давление, возникающее при прохождении звуковой волны в газообразной либо жидкой среде. Распространяясь, звуковая волна образует разрежения и сгущения, которые создают иные значения давления по отношению к среднему значению давления в среде. Та же Большая советская энциклопедия, книга, более чем далекая от car audio, говорит, что звуковое давление — основная количественная характеристика звука.

Существуют различные единицы измерения звукового давления: ньютон на квадратный метр, бар, но ближе всех для фанатов автозвука, конечно же, последняя из характеристик, приведенных все той же великой, но совершенно далекой от автозвука книге: отношение величины звукового давления к пороговому значению, выраженное в децибелах.

Если вспомнить историю car audio, автозвуковые соревнования начинались как раз с того, что молодые люди выкручивали громкость на полную катушку и «перекрикивали» друг друга. Потом количество (кстати, так и не измеренное) перешло в качество, но желающие помериться громкостью, конечно же, остались. Так постепенно и произошло разделение соревнований на качество звука и звуковое давление (SPL).

Можно ли понять результаты, отображаемые на измерительных приборах и в протоколах? Можно, и для этого не обязательно обладать какими-либо специальными знаниями в области радиоэлектроники. Для начала нужно запомнить одну простую, хоть и не совсем понятную вещь: с увеличением числового значения на 3 децибела звуковое давление растет вдвое! Это значит, что прирост, допустим, с трех до шести означает — вдвое, но при этом и, скажем, со 100 до 103 также означает — вдвое. Последнее важно понять, потому что иначе совершенно неясно, почему на тех же автозвуковых соревнованиях борются за каждый децибел, в то время как цифры составляют трехзначные значения.

Итак, начинаем приравнивать цифры к более понятным явлениям. Например, при нулевом звуковом давлении — полной тишине — человек слышит собственное дыхание и биение сердца. А уровень SPL в 10 децибел — это шепот, шелест листьев или тиканье часов. Хорошо слышный, но негромкий разговор в офисе или другом помещении — это уже порядка 40 децибел, а тихая улица без автомобилей — это уже 50. Переходим к менее комфортным показателям: шумная улица, громкие разговоры на близком расстоянии или работающий в нескольких метрах пылесос — это уже порядка 70 децибел. Еще плюс пять — это уровень шума в железнодорожном вагоне на полном ходу или крик. Если кто-то привык просыпаться под аккомпанемент старого механического будильника — значит, ему несложно понять, что такое звуковое давление порядка 80 децибел.

А что же такое сотня децибел? Это крайне шумно, если говорить об ощущениях, и соответствует примерно громкому автомобильному сигналу, прослушиваемому на расстоянии в несколько метров или уровню шума в кузнечном цеху. Но покорителей автозвуковых SPL-ных децибел не интересуют столь скромные цифры. И даже значение в 120 децибел, соответствующее раскату грома (кто хоть раз был в эпицентре грозы, а не в нескольких километрах — поймет) — даже такое значение им не интересно. Хотя именно здесь для многих наступает болевой порог. Но не для фанатов SPL, для которых самое интересное начинается где-то после 140 децибел — значения звукового давления, при котором вполне возможна контузия. И… вряд ли возможно призовое место в классах выше новичков.

Настоящая борьба разворачивается вокруг значения в полторы сотни децибел. И пусть в реальности это означает возможный разрыв барабанной перепонки, баротравмы и почти гарантированную контузию — в мире SPL здесь только начинается самое интересное. При этом некоторые владельцы автомобилей-монстров предпочитают во время замеров оставаться внутри авто, хотя и понимают возможные последствия.

А как же мировой рекорд? Он уже давно «зашкалил» за отметку 180 децибел. По сути, это уже смертельная доза звука для человека, и вряд ли претенденты на подобные рекорды рискнут остаться в салоне автомобиля. Зрителям везет гораздо больше: «рекордные» значения SPL отлично ощущаются всем организмом, но за пределами автомобиля уже не представляют никакой опасности.

Смертельное восхождение: что могло произойти на Эльбрусе на самом деле?

Что произошло на Эльбрусе

23 сентября на вершину Эльбруса вышла группа альпинистов из 16 участников и четырех профессионалов: лидеров Ильи Чуйкова и Антона Никифорова, а также их помощников Таулана Кипкеева и Игоря Данькова. В компании оказались два жителя Новороссийска. На плато вершины группа поднялась около 10:00 утра. Однако там выяснилось, что одной из участниц стало плохо. Гиды приняли решение спустить ее на Седловину.

Пока оставшаяся группа продолжала восхождение, Игорь Даньков стал спускать девушку. На этот момент погода не предвещала ничего плохого. Но профессионалы знают, как непредсказуем Эльбрус…

Буквально через десять минут давление резко упало, сильный ветер подул снизу вверх и начался небывалый шторм. Из-за плотной снежной стены видимость была не более полуметра.

Участница восхождения умерла на руках гида через час после спуска.

Даньков ждал группу на Седловине до 15:00. Он пытался связаться со спасателями в штурмовом лагере, рассказывает пресс-служба туристической компании. Игорь решился спускаться самостоятельно и сообщить о произошедшем координатору, который оперативно связался с дежурным МЧС.

В это время оставшиеся три гида на горе разделили туристов на «быстрых» и «медленных», чтобы избежать массового замерзания и начали спуск. Один из участников сломал ногу, поэтому движение вниз еще больше замедлилось.

От переохлаждения на тропе замерзли насмерть два человека. Именно их одними из первых найдут спасатели. Еще двое альпинистов по пути потеряли сознание. Их транспортировали до станции Гарабаши 3900 м, но в сознание они больше не пришли.

Из 20 человек выжили только 15. Гиды и несколько человек оказались с обморожением разной степени тяжести в больнице Нальчика. А вот часть группы отказались от медицинской помощи, они были отправлены в гостиницу. У одного гида обморожение рук, ему могут ампутировать пальцы. Ещё двое почти ослепли.

Екатерина Резникова и Виталий Антипов из Новороссийска находятся в республиканской больнице КБР, их состояние стабильное.

Виталий находится в отделении торакальной хирургии, Екатерина в терапии. У обоих состояние стабильное, общее переохлаждение и обморожение, динамика положительная,
— рассказали в пресс-службе медучреждения.

Видео: 07.mchs.gov.ru

Для обычных людей, видящих горы только по телевизору в каком-нибудь «Эвересте», много непонятного в этой трагедии. Поэтому «Краснодарские известия» решили обратиться к профессионалу – президенту краснодарского клуба альпинистов «Стремление» Олегу Афанасьеву, чтобы попытаться выяснить, что же произошло на Эльбрусе.

Почему гиды повели группу в метель?

Первый вопрос, который возникает – знали ли альпинисты о том, какая погода их ждет на горе.

Олег Афанасьев сразу предупреждает нас, что может только предполагать, ведь подробности произошедшего еще предстоит выяснить.

Президент краснодарского клуба не раз покорял Эльбрус, и далеко не всегда вершина встречала людей с радостью. В этом году он отправился на гору с севера (по историческому пути первовосходителей). Отважные ребята дошли до 4400 метров, но погода резко испортилась.

Я понимаю, что надо поворачивать вниз: во-первых, мы до вершины не дойдем, во-вторых, начинаем рисковать людьми. Повернули обратно, пересидели ночь и на следующий день спокойно поднялись. Такие ситуации происходят всегда, гидам приходится постоянно принимать решение — идти дальше или нет. Это их работа и их ответственность, вплоть до уголовной,
— говорит Олег Афанасьев.

Прогнозы метеоявлений с каждым годом все точнее, но иногда они могут не сбываться, рассказывает альпинист. Все дело в высоте горы – чем выше, тем переменчивей погода.

На Эльбрусе погода может испортиться очень резко. Но насколько я понимаю, прогноз уже был не очень хорошим. Мы не знаем всех подробностей, почему гиды приняли решение подниматься, может у них была другая информация, сейчас пока не понятно,
— отмечает Олег.

О непредсказуемости Эльбруса знают все профессионалы: можно начать подъем под ослепляющим солнцем, а буквально через 15 минут попасть в снежную бурю.

Чем выше в горы, тем меньше атмосферное давление держит воздух, воздушные массы перемещаются очень быстро, поэтому и погода резко меняется. Поэтому гиды могут быть и не виноваты в том, что попали в такой шторм,
— отмечает Олег.

Наш звонок застал Афанасьева в работе: он как раз поднимался вместе с группой на Казбек, и у подножья лил дождь, а наверху шел снег.

Что могло произойти с девушкой, которая умерла не от обморожения?

Девушка, которая почувствовала недомогание еще до метели, скончалась через час после спуска. Что же случилось с погибшей, которая так быстро умерла?

Олег Афанасьев говорит, что такие смерти крайне редки на Эльбрусе, ведь девушка не замерзла, как остальные.

Восхождение на гору длится один день, но программа занимает неделю, а то и девять дней. Это делается для того чтобы люди прошли акклиматизацию. Недостаток кислорода – опасная штука, он может быть катализатором для хронических заболеваний. А может быть, у нее оторвался тромб, или было больное сердце, либо она была после операции. Высота провоцирует болезни, а ведь участница подходила к самой вершине,
— делится альпинист.

Почему одни погибли от холода, а другие выжили и даже оказались от медпомощи?

Еще одна странность для непосвященного человека: почему одни получили серьезное обморожение, а другие участники восхождения дошли невредимыми, и им не понадобилась помощь медиков?

Здесь, по словам президента краснодарского клуба альпинистов, имеет большое значение куча нюансов: возраст, пол, вес, выносливость, одежда.

Это сборная группа, и параметры у людей разные. Кто-то мог устать больше остальных, а кто-то – не прошел акклиматизацию,
— предполагает Олег.

Природа бушевала не на шутку. Ветер, по рассказам, был около 90 км/час. При таких порывах температура может быть – 10 градусов, а ощущаться как все – 40.

Люди стали умирать из-за погоды, плюс недостаток кислорода, и конечности замерзают сразу. Наверное, надо было поворачивать назад раньше,
— рассуждает Афанасьев.

Мы нашли человека, который не понаслышке знает, как работают те самые гиды из туристической компании. Краснодарец Алексей Гусак «заразился» этим увлечением как раз после своего первого похода.

Я обращался в эту организацию, когда впервые решил подняться в горы. Скажу сразу, что выбирал лучших из лучших. Некоторых ребят из гидов знаю лично. Плюс у компании в том, что они дают большое время на акклиматизацию. Некоторые организации уменьшают количество дней, чтобы тур был дешевле, а здесь нет,
— поделился с «Краснодарскими известиями» Алексей Гусак.

Но есть еще одна особенность, которая могла сыграть с туристической компанией, отправившей альпинистов в этот поход, злую шутку. Дело в том, что здесь дают возможность подняться на вершину абсолютно всем желающим.

В других компаниях бывает такое, что после акклиматизации некоторым говорят: ты не готов, ты будешь тянуть группу назад. Здесь же наоборот: к восхождению допускаются все,
— рассказывает Гусак.

Вполне вероятно, что такая «разношерстность» компании, которая поднималась на Эльбрус 23 сентября, обернулась против них. Кто-то мог не пройти акклиматизацию, другие были физически или морально подготовлены меньше всех.

Но, несмотря на эту трагедию, я бы поднялся с этими ребятами еще раз. Я уверен в их профессионализме,
— говорит Алексей Гусак.

Что нужно делать, чтобы не стать жертвой горы?

Сейчас, после трагедии, мы можем только строить догадки о том, как все случилось на самом деле, какое решение оказалось роковым в этот день. Но Олег Афанасьев дает главную и единственную рекомендацию для туристов, которые идут в горы.

Гид должен командовать, а группа слушаться, потому что они не способны принимать решение, неподготовленные люди. Гид командир – сказал, и все повернули обратно. Участники восхождения подписывают договор, где главное условие – на горе есть только один начальник,
— уточняет альпинист.

Ulysse Nardin Diver X Skeleton Limited Edition из 175 экземпляров|DEKA.ua

Связи Ulysse Nardin с морем столь же глубоки, как и сам океан. Швейцарский Дом был пионером инноваций в часовом производстве с 1846 года, когда бренд укрепил свою репутацию в области производства несравненно точных морских хронометров, надежных навигационных инструментов, позволяющих морякам рассчитывать долготу в море. Теперь Ulysse Nardin подтверждает свой статус часового мастера, которому суждено править океанами, с появлением модели Diver X Skeleton.

В 2019 году Ulysse Nardin спустил на воду яхты Diver X Cape Horn, Nemo Point и Antarctica, отмечая храбрость одиночных кругосветных моряков Vendée Globe. Теперь, чтобы отпраздновать 175-летие компании, Ulysse Nardin продвигает дизайн своего Diver X еще дальше, сняв циферблат и обнажив механизм часов.

В результате захватывающего слияния двух миров Diver и Executive Skeleton Ulysse Nardin добавляет новый дизайн – Diver X Skeleton – эксклюзивную серию скелетонизированных часов для дайвинга, ограниченную 175 экземплярами, каждый из которых имеет индивидуальный номер. Эта ультрасовременная эволюция Diver X сохраняет свою спортивную привлекательность, делая при этом радикальный шаг к прозрачности. Как и все модели Ulysse Nardin Divers, Diver X Skeleton спроектирован таким образом, чтобы выдерживать потенциально смертельное давление на глубине – их водонепроницаемость 200 метров. Для этого он оснащен вогнутым перевернутым однонаправленно вращающимся безелем, защищающим куполообразное сапфировое стекло от случайных ударов.

Команда инженеров полностью переработала механизм UN-371 с 96-часовым запасом хода, который виден через 44-миллиметровый корпус с синим PVD-покрытием. Первоначально разработанный для коллекции Executive Skeleton, он был улучшен за счет добавления осциллирующего груза в форме культовой буквы X Ulysse Nardin. На отметке «12 часов» видна крышка цилиндра заводной пружины из синего карбона, который совпадает с лицевой панелью. Стрелки часов, минут и секунд покрыты люминофором Superluminova, поэтому определить время под водой не составит труда.

Стремление сохранить циферблат Diver X Skeleton в форме синего PVD X было одной из самых сложных и технических разработок, когда-либо предпринятых Ulysse Nardin. Часовые метки должны были быть незаметно прикреплены к циферблату, поэтому они выглядели плавающими. Чтобы добиться ощущения глубины, были использованы наложенные слои, призванные подчеркнуть многоуровневую структуру центрального «X». Также были использованы различные уровни отделки, чтобы вызвать игру света, которая усиливалась прозрачностью скелетонизированного механизма.

Корпус с микрогранулированной отделкой по бокам и ушками с сатинированной полировкой покрыт синим PVD-покрытием. Оранжевые детали, такие как часовые метки, внутренние линии подписи Ulysse Nardin «X» и защитное уплотнение вокруг заводной головки, добавляют яркие цвета и подчеркивают спортивное происхождение модели. На лицевой панели Ulysse Nardin использовал синий карбон – материал, который изначально применялся в его Freak X. Карбон – чрезвычайно легкий аэрокосмический материал, который один из самых прочных и долговечных материалов, когда-либо разработанных учеными.

Он сделан из тех же волокон, что и фюзеляж с крыльями самолетов последнего поколения. Поскольку в его производственном процессе используются отходы, он оказывает на окружающую среду на 40% меньшее воздействие, чем другой углерод. Этот высокоэффективный материал создается с помощью сложного процесса, включающего в себя воздействие на углеродные волокна диаметром всего 7 мкм высокого давления и температуры. В результате чего волокна образуют узор, уникальный для каждой модели.

Ulysse Nardin Diver X Skeleton предлагаются на каучуковом ремешке синего или оранжевого цвета с элементом, украшенным якорем Ulysse Nardin оранжевого цвета. Постоянное напоминание о том, что Ulysse Nardin всегда управлял волнами, глядя на звезды. Модель выпущена ограниченным тиражом в 175 экземпляров, стоимость составляет 22 200 долларов.

Когда от смертельного «лекарства» спасает токсиколог

При борьбе с алкоголизмом не следует заниматься самолечением.

Не всегда испытанными народными средствами можно добиться ожидаемого эффекта – например, выработать стойкое отвращение к алкоголю. А вот не теряя драгоценного времени привезти отравленного пьяницу на лечение к токсикологу – придется. Такой врач принимает в отделении платных услуг Благовещенской городской клинической больницы. При употреблении алкоголя анонимно платно здесь окажут медицинскую помощь амбулаторно, в условиях дневного и круглосуточного стационара, а в рамках обязательного медицинского страхования (ОМС) — при отравлении алкоголем и его суррогатами — в условиях круглосуточного стационара.

— Актуальная для многих российских семей проблема – пьянство и алкоголизм – порождает достаточно жесткую борьбу, причем с использованием самых разнообразных, порой радикальных методов, — рассказывает посетителям полезного портала

врач-токсиколог городской клинической больницы Константин СТОЛБУНОВ. — Иногда в домашних условиях отчаявшиеся матери и жены используют различные «народные средства» и способы борьбы с запоями, в том числе ядовитые растения. Отравления, которые при этом возникают, являются одной из причин вызова «Скорой помощи». Ярким примером негативных последствий самостоятельного лечения алкоголизма на дому является отравление чемерицей, или кукольником.

Чемерица активно рекламируется и продается в аптеках, в интернете как растение, корни которого издревле без ведома больного применялись в качестве эффективного средства от пьянства. Да, действительно, в народной медицине алкоголизм лечили кукольником. Настой этого растения добавляли в жидкие блюда, любые безалкогольные напитки до тех пор, пока у больного не возникал рвотно-слабительный эффект, чтобы плохое самочувствие у него ассоциировалось с употреблением алкоголя. После нескольких таких «сеансов» пропадала агрессия, возникало стойкое отвращение к спиртному. Вот женщины и подливали его в пищу своим нерадивым мужьям, а потом проводили бессонные ночи в стационарах больниц. Хотелось бы предостеречь людей от употребления такого «чудо-средства». С виду безобидная травка — чемерица — сильнейший яд, который применяется как инсектицид для травли вшей. Она содержит большое количество ядовитых алкалоидов, которых особенно много в корневищах. Наибольшее количество случаев отравлений чемерицей зафиксировано у пациентов в возрасте от 40 до 60 лет, что связано с заболеваемостью хроническим алкоголизмом именно в этой возрастной группе. Достаточно высокие показатели в молодом возрасте – от 20 до 40 лет, поскольку алкоголизм в последнее время часто выявляется у молодежи.

Симптомы отравления

При употреблении чемерицы возникает замедление частоты сердцебиения (брадикардия), резко снижается артериальное давление, вплоть до коллапса. Кроме того, появляется неукротимая тошнота, рвота, жидкий стул, сильная головная боль, головокружение, слюнотечение, неприятные ощущения, першение, боль в пищеводе, глотке и глазах, побледнение лица, судороги, могут отмечаться нарушения зрения.

Что делать

При первых симптомах отравления необходимо срочно сделать промывание желудка, принять энтеросорбент (активированный уголь, полифепам) и обязательно вызвать «скорую помощь» либо незамедлительно обратиться за квалифицированной медицинской помощью, лучше — к врачу-токсикологу. Кстати, врачи настоятельно предупреждают: бытующее мнение на счет того, что настойка чемерицы или кукольника вызывает отвращение к алкоголю, ошибочно, поскольку не подтверждено официальной медициной.

Справка

Чемерица Лобеля (чемерица лобелева, кукольник, чемеричный корень, чемерка, чермис, черемица, волчок) — многолетнее травянистое растение с прямым стеблем высотой до 1 метра, с крупными широкими стеблеобъемлющими листьями и цилиндрическим многоглавым корневищем. На Дальнем Востоке известны два ее вида: чемерица черная — с черно-пурпуровыми цветками и чемерица Лобеля — с беловатыми или желтовато-зелеными цветками. И тот, и другой встречаются довольно часто: растут на лугах, в кустарниках, в поймах рек.

Где применяется

В медицине чемерица употребляется в виде спиртоводной настойки и «чемеричной воды» (водное извлечение из корневищ и корней) как наружное болеутоляющее средство при невралгии, артритах, ревматизме.

Евгения ЗОТОВА

Вред суррогатного алкоголя и спиртосодержащих жидкостей

Опасны ли отравления суррогатами алкоголя? Безусловно, опасны, так как зачастую сопровождаются тяжелыми, вплоть до смертельного исхода, поражениями печени, почек, глаз, центральной нервной системы. Часть отравлений бывает связана с употреблением поддельных спиртных напитков. При этом иногда страдают люди, вовсе не злоупотребляющие ими. Также нередко пьют суррогаты хронические алкоголики. Они часто используют вовсе «не съедобные» продукты бытовой химии, технические спирты, лекарственные жидкости, что приводит к очень тяжелым отравлениям.

Суррогаты алкоголя и их виды

Что же такое суррогаты алкоголя? Это спиртосодержащие жидкости, применяемые в быту и для технических нужд. Их употребляют с целью опьянения при недоступности обычных спиртных напитков. Также сюда можно отнести поддельные алкогольные напитки (вина, коньяки, водку, самогон, настойки, коктейли), изготовленные с использованием ненадлежащего сырья или с нарушениями технологии. Наряду с этиловым спиртом они содержат вредные примеси различных веществ.

Суррогаты подразделяют на две группы — содержащие этанол, или истинные суррогаты и вещества, не содержащие этиловый спирт, но вызывающие опьянение — ложные суррогаты. К истинным суррогатам, содержащим этанол, относятся лекарства — настойки пустырника, боярышника, различные лосьоны, одеколоны, технический этиловый спирт. Более опасные суррогаты — это бытовые жидкости, такие как растворители, средства для мытья стекол и поверхностей, политура; тормозная жидкость, антифризы; клей БФ. Они могут содержать гидролизный и сульфатный спирты, денатурат, примеси метилового спирта, этиленгликоля, альдегиды, эфирные масла, ацетон, хлороформ, красители, прочие ядовитые вещества. К ложным суррогатам относят метиловый, пропиловый, бутиловый, амиловый и муравьиный спирты, этиленгликоль, дихлорэтан и жидкости различного назначения, в которые они входят в большой концентрации. Они крайне ядовиты и вызывают опасные поражения различных органов. Особую опасность представляют поддельные алкогольные напитки. Попавшие в них ядовитые соединения, особенно метиловый спирт, приводят порой к смертельным отравлениям.

Признаки отравления алкогольными суррогатами

Первыми признаками отравления алкогольными суррогатами бывают тошнота, затем рвота, чувство дурноты, головокружение, боли в животе, мучительная головная боль. Клиническая картина первоначально такая же, как при отравлении большим количеством водки. Дальнейшие симптомы зависят от того, чем вызвано отравление и насколько велика доза выпитого.
Рассмотрим два примера:
Метанол (метиловый спирт). Состояние пострадавшего напрямую зависит от количества выпитого. Смертельная доза метанола равна 100 мл. Первыми признаками отравления будут тошнота и рвота, мушки перед глазами. Кожа больного сухая и красная. В течение последующих суток состояние его ухудшается. Появляется жажда, боли в животе, одновременно головная боль, сильные боли в икроножных мышцах, двоение в глазах. В тяжелых случаях часто наступает слепота. Появляются судороги, возбуждение, напряжение затылочных мышц. Нарушается сердечный ритм, падает давление. Если количество выпитого спирта близко к смертельной дозе, наступает кома и остановка дыхания. Возможно молниеносное развитие отравления со смертельным исходом. Если одновременно употреблялись этанолсодержащие напитки, картина отравления может быть менее тяжелая, так как этиловый спирт частично нейтрализует метанол. Похожие симптомы бывают при отравлении муравьиным спиртом.

Этиленгликоль. Смертельная доза его равна 150 мл. После 6-8 часов от приема этиленгликоля возникают головная боль, боли в пояснице, животе; жажда, понос, рвота. Кожа и слизистые сухие, красные, с синюшным оттенком. При тяжелом отравлении больной возбужден, зрачки расширены. Позднее появляются судороги, больной теряет сознание. В терминальной стадии развивается сердечная недостаточность с отеком легких, острая печеночная и почечная недостаточность.

Что делать при отравлении суррогатами алкоголя

При подозрении на отравление суррогатами алкоголя надо срочно вызвать скорую, так как тяжесть состояния может нарастать очень быстро. Если пострадавший в сознании, до прибытия врача ему надо дать выпить теплую воду в большем количестве и затем вызвать рвоту. Больного без сознания укладывают на бок, очищают рот и носоглотку от рвотных масс. Чтобы не допустить западение языка, выводят его из полости рта и фиксируют. Если точно известно, что отравление вызвал метиловый спирт, больному, находящемуся в сознании, можно дать выпить коньяк или водку. Содержащийся в них этиловый спирт частично нейтрализует метанол.

Профилактика отравлений суррогатами алкоголя

Самая надежная профилактика отравлений — никогда не употреблять суррогаты алкоголя. Чтобы избежать случайных отравлений, храните продукты бытовой химии отдельно, в посуде, имеющей соответствующие надписи. Покупать все спиртные напитки нужно в хорошо проверенных, специализированных магазинах. Прием перед употреблением алкоголя активированного угля поможет организму избавиться от токсинов.

Помните, алкоголь вреден для здоровья!

ГОБУЗ «Новгородский областной наркологический диспансер «Катарсис»

Гангрена

Гангрена это некроз (омертвение) тканей организма из-за отсутствия кровотока или бактериальной инфекции. Гангрена чаще всего затрагивает конечности, в том числе пальцы, стопы или полностью конечность, но также может развиться в мышцах и внутренних органов.

Риск развития гангрены в основном выше, если у вас есть заболевания, при которых могут повреждаться кровеносные сосуды и ухудшаться кровоток, например, сахарный диабет и атеросклероз.

Лечение гангрены включает в себя хирургическое иссечение некротизированных тканей, антибиотикотерапию и другие методы. Прогноз на выздоровление лучше, если гангрена выявляется на ранних стадиях и быстро начато лечение.

СИМПТОМЫ

Признаки и симптомы поражения кожи гангреной следующие:

изменение цвета кожи — от бледного до синего, фиолетового, черного, бронзового или красного, в зависимости от типа гангрены;
сильные боли, а в последующем ощущение онемения;
неприятный запах от пораженной части кожи.

Если у вас тип гангрены, затрагивающей расположенные под кожей ткани, например, газовая гангрена или гангрена внутренних органов, то можно заметить, что:

Пораженные ткани становятся опухшими и болезненными.
Вы чувствуете жар и недомогание.

Состояние, которое называется септический шок, может развиться, если возникшая в гангренозной ткани бактериальная инфекция распространяется по всему телу. Признаки и симптомы септического шока включают в себя:

низкое артериальное давление;
температура тела выше 38° C или ниже, чем 36° С;
учащенное сердцебиение;
головокружение;
одышка;
cпутанное сознание.

ПРИЧИНЫ

Гангрена может развиться по одной или нескольким причинам:

Недостаток кровоснабжения. Кровь обеспечивает кислородом и питательными веществами клетки, а также компоненты иммунной системы, антитела, предотвращающие инфекции. Без надлежащего кровоснабжения клетки не могут выжить, и ткани разрушаются.
Инфекция. Если бактерии долго беспрепятственно размножаются, инфекция может сама по себе привести к некрозу тканей, вызывая гангрену.

Виды гангрены

Сухая гангрена. Сухая гангрена характеризуется сухой и сморщенной кожей в диапазоне цветов от коричневого и пурпурно — синего до черного. Как правило, сухая гангрена развивается медленно. Это происходит чаще всего у людей с заболеваниями кровеносных сосудов, например, с атеросклерозом. Влажная гангрена. Гангрена называется «влажной», если есть бактериальная инфекция в пораженной ткани. Отеки, образование пузырей и влажные на вид ткани – общие черты влажной гангрены. Она может развиваться после тяжелых ожогов, обморожения или травмы. Часто встречается у людей с диабетом, которые случайно могут поранить палец ноги или ступню. Влажную гангрену нужно лечить немедленно, потому что она распространяется быстро и может быть смертельной.

Газовая гангрена. Газовая гангрена обычно поражает глубокие мышечные ткани. При газовой гангрене поверхность кожи сначала может быть нормальной. При прогрессировании состояния кожа может стать бледной, а затем серой или пурпурно-красного цвета. Пораженные участки кожи могут издавать звук небольшого потрескивания из-за газа в тканях. Газовая гангрена обычно вызывается бактерией Clostridium perfringens, которая развивается в местах травмы или хирургической раны, обедненных кровоснабжением. Бактериальная инфекция производит токсины, которые высвобождают газ — отсюда и название «газовая» гангрена — и причина смерти ткани. Как и влажная гангрена, газовая гангрена опасна для жизни.

Гангрена внутренних органов. Гангрена, затрагивающая один орган или несколько, чаще всего кишечник, желчный пузырь или аппендикс, называется гангреной внутренних органов. Этот тип гангрены возникает, когда приток крови к внутреннему органу заблокирован, например, когда часть кишечника выпячивается через ослабленную область мышц в животе (грыжа) и перекручивается. Гангрена внутренних органов часто вызывает лихорадку и сильные боли. При отсутствии лечения внутренняя гангрена может быть смертельной.

Фурнье гангрена. Гангрена Фурнье является редкой формой гангрены, которая затрагивает половые органы. Мужчины страдают чаще, но у женщин также может развиться этот вид гангрены. Гангрена Фурнье обычно возникает из-за инфекции в области половых органов и мочевыводящих путей и вызывает боль в гениталиях, покраснение и отек.

Синергическая гангрена Мелени (Meleney). Этот редкий тип гангрены обычно развивается через 1-2 недели после операции, с болезненным поражением кожи.

ФАКТОРЫ РИСКА

Некоторые факторы, которые повышают риск развития гангрены. К ним относятся:

Возраст. Гангрена встречается гораздо чаще у пожилых людей.
Диабет. Если у вас диабет, ваш организм не вырабатывает достаточное количество гормона инсулина (который помогает клетке получать сахар из крови), или клетки устойчивы к воздействию инсулина. Высокий уровень сахара в крови в конечном итоге может повредить кровеносные сосуды, прерывая приток крови к частям вашего тела.
Заболевания кровеносных сосудов. Сужение и уплотнение артерии (атеросклероз) и сгустки крови также могут блокировать приток крови к определенной области тела.
Тяжелые травмы или хирургические вмешательства.Любой процесс, который вызывает повреждение кожи и подлежащих тканей, в том числе травмы или обморожения, увеличивает риск развития гангрены, особенно если у вас есть основное заболевание, которое снижает приток крови к поврежденной области.
Ожирение.Ожирение часто сопровождается диабетом и сосудистыми заболеваниями, но давление лишнего веса также может сжимать артерии, что приводит к уменьшению притока крови и увеличивает риск инфекции и плохое заживление ран.
Иммуносупрессия. Способность организма бороться с инфекцией ухудшается при вирусе иммунодефицита человека (ВИЧ) или после химиотерапии или лучевой терапии.
Лекарства. В редких случаях причиной гангрены может быть препарат антикоагулянт варфарин — особенно при сочетании с терапией гепарином.

ОСЛОЖНЕНИЯ

Гангрена может привести к образованию рубцов, потребуется реконструктивная хирургия. Иногда количество некротизированной ткани настолько велико, что приходится убирать часть тела, например, ноги.

Гангрена, инфицированная бактериями, может быстро распространиться на другие органы и без лечения может быть смертельной

ТЕСТЫ И ДИАГНОСТИКА

Тесты, используемые для постановки диагноза гангрены, включают в себя:

Анализы крови. Аномальное повышение лейкоцитов часто указывает на наличие инфекции.
Инструментальные методы. Рентгенография, компьютерная томография (КТ) или магнитно-резонансная томография (МРТ) могут быть использованы для исследования внутренних органов и оценки, в какой степени распространилась гангрена.
Артериография является исследованием, используемым для визуализации артерий. Во время этого исследования краситель вводится в кровь и делается серия рентгеновских снимков, чтобы определить, насколько хорошо кровь проходит через артерии. Артериограмма может помочь вашему врачу выяснить, является ли любая из ваших артерии закрытой.
Хирургия. Операция может быть проведена для определения, насколько гангрена распространилась в вашем теле.
Посевы тканей или жидкости. Посев жидкости из волдыря на коже может указать на бактерии Clostridium perfringens (распространенная причина газовой гангрены), или врач может посмотреть под микроскопом образец ткани на наличие признаков гибели клеток.

ЛЕЧЕНИЕ И ПРЕПАРАТЫ

Поврежденные гангреной ткани не могут быть сохранены, но могут быть предприняты шаги, чтобы предотвратить прогрессирование гангрены. Эти процедуры включают в себя:

Хирургия. Удаление врачом мертвых тканей помогает остановить распространение гангрены и позволяет здоровой ткани зажить. Если это возможно, врач может восстановить поврежденные кровеносные сосуды, чтобы увеличить приток крови к пораженной области. Пересадка кожи является одним из видов восстановительной хирургии, которая используется для восстановления вызванного гангреной повреждения кожи. Во время пересадки кожи врач забирает участок здоровой кожи из другой части вашего тела — как правило, место, скрытое под одеждой — и аккуратно переносит его на пораженные участки. Здоровая кожа может быть зафиксирована на месте с помощью повязки или несколько маленьких швов. Кожный лоскут может прижиться, только если в поврежденном участке кожи было восстановлено адекватное кровоснабжение.

В тяжелых случаях гангрены пораженные части тела, например, стопа, пальцы или конечность, возможно, должны быть удалены хирургическим путем (ампутация). В некоторых случаях впоследствии может быть использован протез.

Антибиотики. Вводимые через вену (внутривенно) антибиотики могут использоваться для лечения гангрены, которая вызвана инфекцией.

Гипербарическая кислородная терапия. Гипербарическая кислородная терапия может использоваться для лечения газовой гангрены. Под повышенным давлением и с повышенным содержанием кислорода кровь способна доставлять большее количество кислорода. Кровь, богатая кислородом, тормозит рост бактерий, которые размножаются в отсутствие кислорода, и помогает инфицированным ранам легче заживать.

При этом виде терапии Вы будете находиться в специальной камере, которая обычно состоит из стола, который заезжает в специальную камеру-трубу. В камере находится чистый кислород, а давление внутри камеры будет медленно возрастать, примерно в два с половиной раза больше, чем нормальное атмосферное давление. Во время сеанса лечения, вы можете почувствовать головокружение и усталость.

Гипербарическая кислородная терапия для газовой гангрены обычно длится около 90 минут. Вам может понадобиться до трех сеансов в первый день гипербарической кислородной терапии, а затем два раза в день на срок до пяти дней.

Другие методы лечения гангрены могут включать в себя поддерживающую терапию, в том числе инфузии жидкости, питательных веществ и обезболивающие, чтобы облегчить боль.

ПРОГНОЗ

Как правило, люди с сухой гангреной имеют прогноз лучше, потому что сухая гангрена не связана с бактериальной инфекцией и распространяется медленнее, чем при других типах гангрены. Однако, когда инфицированная гангрена диагностируется и быстро начато лечение, вероятность выздоровления большая.

Пожилые люди, люди с ослабленным иммунитетом или имеющие сопутствующие заболевания (например, диабет, атеросклероз или некоторые виды рака), и те, кто обращается за медицинской помощью при уже далеко зашедших случаях гангрены, чаще имеют осложнения от гангрены.

ПРОФИЛАКТИКА

Вот несколько советов, которые помогут вам снизить риск развития гангрены:

Контролируйте диабет.Если у вас диабет, осматривайте ваши руки и ноги ежедневно на предмет порезов, язв и признаков инфекции, таких как покраснение, отек или отделяемое. Попросите врача осматривать ваши руки и ноги по крайней мере раз в год.
Снизьте лишний вес. Лишние килограммы не только увеличивают риск развития диабета, но и оказывают давление на ваши артерии, уменьшают кровоток и повышают возможность инфицирования и медленного заживления ран.
Не курите. Хроническое употребление табачных изделий может привести к повреждению кровеносных сосудов.
Старайтесь предотвратить инфекции. Мойте открытые раны с мягким мылом и водой и старайтесь держать их в чистоте и сухими, пока они заживают.
Следите за снижением температуры. Обморожение кожи может привести к гангрене, из-за обморожения уменьшается кровообращение в пораженной области. Если вы заметили, что любая область вашей кожи стала бледной, твердой, холодной и онемела после длительного воздействия низких температур, обратитесь к врачу.

Как борьба с самыми смертельными заболеваниями в мире может способствовать здоровой рабочей силе и экономическому росту?

Как ожидается, численность населения старше 60 лет в Шри-Ланке – стране с наиболее быстро стареющим населением в Южной Азии – удвоится в течение ближайших 25 лет. При поддержке Всемирного банка правительство Шри-Ланки создало центры здорового образа жизни в целях профилактики, выявления и лечения неинфекционных заболеваний в общинах и на уровне первичной медицинской помощи. Основной целевой аудиторией центров являются уязвимые бедные группы населения, мужчины и женщины старше 40 лет. Посетителей центров информируют о риске НИЗ и учат предотвращать, распознавать и лечить эти заболевания для того, чтобы жить более здоровой и полноценной жизнью.

Лакшми Перера, 48-летняя жительница Калутары, испытывала проблемы с потерей веса. С 2018 года она регулярно посещает один из центров здорового образа жизни. «Нам объясняют, как правильно питаться и оставаться в форме, а это не так-то просто сделать», — рассказала она. – «Сейчас я записалась в фитнес-секцию и за шесть месяцев сбросила 10 килограммов. Я получила необходимую мотивацию, я смогла почувствовать первые преимущества от потери веса, и теперь я еще сильнее, чем когда-либо, настроена продолжать мой путь к похуданию».

Оказываемая Всемирным банком поддержка в достижении ЦУР

До 2030 года – срока достижения Целей в области устойчивого развития – осталось всего десять лет, и международное сообщество, включая Всемирный банк, наращивает усилия, чтобы остановить распространение неинфекционных заболеваний.

Для защиты грядущих поколений правительствам и партнерам в области развития необходимо будет применить всесторонний подход, в основе которого лежит укрепление систем первичного медицинского обслуживания с особым акцентом на профилактические меры.

Всемирный банк помогает правительствам укреплять их системы здравоохранения и наращивать потенциал выявления и устранения факторов риска. Посредством финансовой, консультационной и технической помощи Всемирный банк удовлетворяет потребности стран в области поддержания здоровья работников и формирования человеческого капитала.

Египет принял решение бороться с возрастающими рисками распространения неинфекционных заболеваний при помощи ряда инициатив, направленных на защиту здоровья населения и переориентацию национальной системы здравоохранения на предоставление доступа всем слоям населения к качественному медицинскому обслуживанию на основе принципа равенства. В стране начала функционировать система всеобщего медицинского страхования, повышено качество медицинского обслуживания в государственных медицинских учреждениях, а борьба с определенными заболеваниями признана приоритетной национальной задачей.

При поддержке Всемирного банка Египет начал проведение общенациональной кампании «Сто миллионов здоровых людей», направленной на осуществление проверки на гепатит С и выявление факторов риска возникновения неинфекционных заболеваний (таких, как наличие лишнего веса/ожирения, диабет и артериальное давление).

Правительство Аргентины обратилось к Всемирному банку с просьбой помочь в наращивании потенциала национальных государственных медицинских учреждений в целях предоставления более качественных услуг и обеспечения защиты наиболее уязвимых групп населения от факторов риска возникновения широко распространенных неинфекционных заболеваний. Осуществление этого проекта в 2015-2019 годах позволило расширить охват профилактическими, диагностическими и медицинскими услугами; в настоящее время в рамках проекта осуществляются проверки на наличие туберкулеза и его лечение, безопасное переливание крови и борьба с неинфекционными заболеваниями и заболеваниями, связанными с образом жизни.

Определение экономически эффективных мер

Опираясь на примеры успеха, достигнутого в различных странах, Всемирный банк также определил ряд перспективных мер, таких как обязательная маркировка пищевых продуктов, прошедших технологическую обработку; активное просвещение потребителей; проведение эффективной бюджетно-налоговой политики, например, введение налогов на вредные для здоровья продукты питания; инвестиции в программы питания детей в раннем возрасте; и улучшение городской среды, например, создание игровых площадок в школах, пешеходных и велосипедных дорожек.

Правительство Тонга создало систему «здравоохранительных налогов», изначально ориентированную на препятствование расходованию средств на вредные потребительские товары, такие как табак, алкоголь и сахаросодержащие напитки, и на сокращение их потребления. Правительство обратилось к Всемирному банку с просьбой оценить эффективность этой бюджетно-налоговой политики. Проверка показала, что внедрение этой налоговой системы в целом привело к положительным изменениям в привычках населения в области расходования средств и потребления вредных для здоровья товаров.

Правительство Перу – страны, сумевшей менее чем за десять лет, с 2008 по 2016 год, добиться сокращения распространенности детской низкорослости (низкого роста для данного возраста) более чем наполовину, – перестраивает национальную систему оказания медицинских услуг в целях борьбы с хроническими заболеваниями. Финансируемый Всемирным банком новый проект комплексных сетей здравоохранения охватит более 20 млн человек, не имеющих доступа к государственному и частному медицинскому обслуживанию.

Благодаря новой модели медицинского обслуживания каждый перуанец в течение всей жизни будет получать доступ к непрерывной медицинской помощи, включающей в себя амбулаторные профилактические услуги, медицинский контроль, лечение хронических заболеваний и уход за взрослыми людьми.

Некоторые страны нашли более простой способ решения проблем, способствуя изменению образа жизни при помощи надлежащего питания.

В штате Керала на юге Индии Всемирный банк вместе с правительством штата занимается просвещением населения и производителей продуктов питания. Его задача – снизить содержание трансжиров и соли в коммерческих продуктах питания, в частности, в продуктах, производимых в пекарнях, ресторанах и на предприятиях быстрого питания, где готовят блюда во фритюре. Для этого Всемирный банк предоставляет производителям продуктов питания информацию о вредном воздействии масел с содержанием трансжиров и возможных заменителях этих масел.

К другим принимаемым мерам относится использование первичного медицинского обслуживания для привлечения людей в систему здравоохранения и повышения способности страны к борьбе с бременем хронических заболеваний.

Например, в Таджикистане одной из основных причин смерти населения является ишемическая болезнь сердца. Всемирный банк оказывает поддержку усилиям правительства Таджикистана по расширению охвата базовыми первичными медицинскими услугами в сельских медицинских учреждениях и повышению качества этих услуг в целях обеспечения более эффективной ранней диагностики заболеваний.

К 2030 году онкологические заболевания наряду с неинфекционными заболеваниями, вызванными лишним весом и ожирением, станут одной из трех основных причин преждевременной смерти: в мире будет выявлено более 22 млн новых случаев заболевания раком, почти 13 млн смертей будут вызваны онкологическими заболеваниями. Более половины всех новых случаев заболевания раком и две трети смертей, вызванных онкологическими заболеваниями, произойдут в странах с низким или средним уровнем дохода.

В целях наращивания потенциала министерств здравоохранения в области сбора достоверной статистики онкологических заболеваний Всемирный банк в 2017 году способствовал созданию региональной программы учета онкологических заболеваний в пяти восточноафриканских странах (Бурунди, Кении, Руанде, Танзании и Уганде), помогающей разрабатывать стратегии и программы профилактики онкологических заболеваний и борьбы с ними.

Глобальные действия на основе участия всего общества

Если страны хотят добиться успеха в наращивании человеческого капитала, то они больше не имеют права пренебрегать проблемой неинфекционных заболеваний и одной из коренных причин этих заболеваний – ожирением.

Некоторые уже начали решать эту проблему, но, чтобы справиться с ней, необходим общегосударственный подход, предполагающий участие всего общества: для защиты грядущих поколений потребуется мобилизовать соответствующие ресурсы и осуществлять в том числе и силами частного сектора – комплексные меры, охватывающие здравоохранение, образование, социальное обеспечение, а также противодействие изменению климата, городское развитие и транспорт.

Время действовать пришло.

границ | Влияние сублетальной гомогенизирующей обработки под высоким давлением на механизмы адгезии и гены стрессовой реакции у Lactobacillus acidophilus 08

Введение

Пробиотики

становятся все более популярными в последние десятилетия в результате растущего числа научных данных, подтверждающих их благотворное влияние на здоровье человека (FAO / WHO, 2001; Morelli and Capurso, 2012; Shewale et al., 2014). Большинство пробиотических составов содержат лактобациллы, пищевые микроорганизмы, широко применяемые в пищевой промышленности благодаря своим технологическим и укрепляющим здоровье свойствам (Grosu-Tudor et al., 2016). Среди них Lactobacillus acidophilus широко применяется в молочном секторе, и его физиологические, биохимические, генетические и ферментативные свойства широко изучаются (Sanders and Klaenhammer, 2001; Weiss and Jespersen, 2010). Внутри этого вида пробиотик L. acidophilus 08 (Burns et al., 2008), штамм, уже используемый в качестве добавки к свежим сырам и кисломолочным продуктам, может очень хорошо выдерживать сырье и условия хранения в холодильнике (Burns et al., 2008; Табанелли и др., 2013). Эти технологические характеристики вместе с функциональными являются фундаментальными, когда пробиотики предназначены для включения в пищу. Фактически, эти полезные микроорганизмы должны потребляться в количестве от 10 ⁸ до 10 ¹⁰ КОЕ / день, чтобы вызвать положительное воздействие на потребителей. По этой причине в нескольких исследованиях основное внимание уделялось выявлению технологических стратегий, направленных на повышение жизнеспособности пробиотиков во время обработки пищевых продуктов и их последующего хранения (Patrignani and Lanciotti, 2016).Среди этих стратегий нетермическая технология, основанная на гомогенизации под высоким давлением (HPH), уже доказала, что увеличивает выживаемость пробиотических штаммов или улучшает их общую функциональность при обработке в молоке (Burns et al., 2008, 2015; Patrignani et al. ., 2009). Более того, несколько исследований показали, что гидрофобность клеток, аутоагрегация и устойчивость in vitro к моделированию верхних отделов желудочно-кишечного тракта модулировались у L. acidophilus 08, подвергнутых сублетальной обработке HPH (50 МПа) (Tabanelli et al., 2013, 2014). Чтобы объяснить эти изменения, Tabanelli et al. (2015) доказали, что HPH способен влиять на внешнюю клеточную структуру и индуцировать специфический протеомный профиль двух пробиотических штаммов Lacticaseibacillus paracasei A13 и L. acidophilus DRU, по очереди модулируя некоторые их технологические и функциональные свойства, в том числе их способность прилипать к кишечному эпителию и колонизировать его. Например, более высокое взаимодействие / адгезия наблюдается у L.paracasei A13 и эпителиальные клетки кишечника при гипербарической обработке могут быть связаны с модификациями клеточной структуры (Tabanelli et al., 2012), включая структуру пептидогликана, различный цвиттерионный характер липотейхоевой кислоты (LTA) и поверхностные белки. Даже клеточная мембрана, которая способствует отделению микроорганизмов от внешней среды, считается одной из наиболее уязвимых мишеней давления и может реагировать по-разному, чтобы минимизировать сублетальный стресс (Serrazanetti et al., 2015). Изменения в составе мембран отражаются на изменении физических свойств поверхности клетки. Согласно литературным данным, наличие вторичных полимеров клеточной стенки и адгезионных белков на бактериальной поверхности [т.е. муцин-связывающих белков, фибронектин-связывающих белков, белков поверхностного слоя (Slps), белков, связанных с поверхностным слоем (SLAP), и адгезии экзопротеины] опосредуют адгезию и иммуномодулирующую активность L. acidophilus и других молочнокислых бактерий (Palomino et al., 2016; Selle et al., 2017; Wang et al., 2018). Например, большой амфифильный межфазный полимер LTA играет плейотропную роль в грамположительной физиологии и является основным иммуномодулирующим компонентом клеточной поверхности. Даже белки S-слоев могут действовать как барьер против опасностей окружающей среды, контролировать перенос питательных веществ и метаболитов, поддерживать форму клеток и способствовать распознаванию поверхности (Buck et al., 2005; Grosu-Tudor et al., 2016). Однако SlpA, основной компонент S-слоя в L.acidophilus , способствует взаимодействию эпителиальных клеток и бактерий на уровне кишечника и модуляции иммунного ответа.

Хотя литературные данные согласуются с сообщениями о положительном влиянии сублетальных обработок HPH на свойства пробиотиков (т.е. гидрофобность и аутоагрегацию) в зависимости от штамма, мало что известно об экспрессии микробных генов при этом стрессе. Недавно Siroli et al. (2020) показали, что L. paracasei A13 активирует серию реакций, направленных на контроль и стабилизацию текучести мембран в ответ на лечение HPH, вызывая активацию генов, участвующих в биосинтезе жирных кислот в качестве механизма немедленного ответа, принятого L.paracasei A13 — HPH. Однако информации о применении сублетальной обработки HPH в отношении нескольких белков стрессовой реакции, таких как шаперонины GroEL и DnaK, протеазы ClpP, GroEL и DnaK, которые играют ключевую роль в нескольких стрессовых состояниях, недостаточно (Frees et al., 2007). ; Weiss and Jespersen, 2010) и гены, участвующие в адгезии микробных клеток у L. acidophilus .

Таким образом, в рамках данного исследования в настоящем исследовании изучалось влияние сублетальной обработки HPH (50 МПа) на различные фенотипические признаки, участвующие в процессах феномена адгезии, такие как гидрофобность клеточной поверхности (CSH), аутоагрегация и in vitro адгезия (как в муцинах, так и в клетках Caco-2) л.acidophilus 08, пробиотический штамм, обычно используемый в коммерческих функциональных молочных продуктах. Структурные модификации, вызванные сублетальным лечением HPH, наблюдали с помощью просвечивающего электронного микроскопа. Кроме того, оценивалась повышающая или понижающая регуляция генов, участвующих в общих стрессовых ответах ( groEL и clpP ) и процессах адгезии ( efTu и slpA ), а также общий белковый профиль леченных и необработанная л.acidophilus 08 клеток.

Материалы и методы

Бактериальный штамм

Lactobacillus acidophilus 08, коммерческий пробиотический штамм, выделенный из молочных аргентинских молочных продуктов, хранили при -80 ° C. Перед экспериментами L. acidophilus 08 культивировали трижды без перемешивания в течение 24 ч в бульоне де Мана, Рогоза и Шарпа (MRS) (Thermo Fisher Scientific, Милан, Италия) при 37 ° C.

Гомогенизация под высоким давлением

Клетки Lactobacillus acidophilus 08 через 18 ч при 37 ° C роста (клетки ранней стационарной фазы) в бульоне MRS подвергали HPH при 50 МПа с использованием гомогенизатора высокого давления PANDA plus 2000, оборудованного теплообменником (Niro Soavi, Parma , Италия).Температура на входе образца составляла 25 ° C, а после обработки температура образца составляла приблизительно 30 ° C. После гипербарической обработки были взяты образцы для анализа экспрессии гена и CSH, как описано ниже.

Фенотипические исследования

Кинетика гидрофобности клеточной поверхности

CSH клеток L. acidophilus 08 оценивали как процентный индекс гидрофобности (H%) согласно Виндерола и Рейнхеймер (2003), с некоторыми модификациями, как было предложено Табанелли и др.(2013).

Способность рассматриваемого штамма связываться с н-гексадеканом и ее эволюция в течение 2 часов проверяли в зависимости от применяемой обработки HPH (50 МПа). Индекс H% рассчитывался по формуле:

H% = (A0-AtA0) * 100

, где At представляет собой поглощение при 560 нм после 1 ч инкубации при 37 ° C, а A0 представляет собой начальное поглощение (Vinderola and Reinheimer, 2003; Tabanelli et al., 2013). После обработки HPH при 50 МПа суспензию клеток L. acidophilus 08 центрифугировали при 8000 об / мин в течение 10 мин при 4 ° C, дважды промывали NaCl 0.9% изотонический раствор, а затем оптическую плотность клеток (ОП) при 560 нм доводили тем же раствором до 1.

Автоагрегация

Анализ аутоагрегации выполняли, как описано Valeriano et al. (2014). После обработки HPH обработанные и необработанные клетки собирали центрифугированием при 3800 об / мин в течение 10 мин при 10 ° C, дважды промывали и ресуспендировали в стерильном PBS для получения приблизительно 10 ^8–9 КОЕ / мл жизнеспособных количеств. Суспензии клеток (40 мл) перемешивали встряхиванием в течение 10 с и определяли аутоагрегацию через 3 и 6 ч инкубации при комнатной температуре.Для измерения аутоагрегации 100 мкл верхней суспензии переносили в 900 мкл PBS и измеряли оптическую плотность (A) при 600 нм. Процент автоагрегации был выражен как:

% Автоагрегации = 1- (AtA0) * 100

, где At представляет оптическую плотность после 3 и 6 часов инкубации, а A0 — оптическую плотность в момент t0.

Анализ адгезии к муцинам

Оценка микробной адгезии к муцинам проводилась в соответствии с протоколом Valeriano et al.(2014) с некоторыми модификациями. 96-луночные планшеты для микротитрования из полистирола (Sigma, Bornem) использовали для проведения высокопроизводительного анализа адгезии. Слизистый гель, покрывающий эпителий кишечника, моделировали смешиванием муцина свиньи типа II (Sigma) (5%, мас. / Об.) И агара (0,8%), ресуспендированного в фосфатно-солевом буфере (PBS, pH = 7,0), согласно Van den Abbeele. и другие. (2009). Муциновый агар стерилизовали автоклавированием при 121 ° C в течение 15 минут, а затем добавляли 100 мкл в каждую лунку. Приблизительно 100 мкл бактериальной суспензии (∼10 ^8–9 КОЕ / мл) промывали, суспендировали в буфере PBS (pH 7.0), и добавил в лунки. Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 1 ч. После инкубации лунки пять раз промывали 200 мкл стерильного цитратного буфера (pH 5,9) для удаления несвязавшихся бактерий. Затем добавляли еще 200 мкл 0,5% (об. / Об.) Triton X-100, чтобы изолировать прикрепленные бактерии. Количество жизнеспособных клеток, выраженное в КОЕ / мл, во всех случаях определяли путем посева на среду MRS. Каждый анализ проводили в четырех повторностях. Процент адгезии рассчитывали следующим образом (Collado et al., 2008):

% Относительной адгезии = (КОЕ / мл после адгезии КОЕ / мл до адгезии) * 100

Анализ проводили с клетками, обработанными HPH, инкубированными в течение 60, 90 и 120 мин и 24 ч до теста на адгезию, и необработанными л.acidophilus 08 и Lactobacillus rhamnosus GG в качестве контролей.

Анализ адгезии к клеткам Caco-2

Для описания способности L. acidophilus 08, обработанного при 50 МПа, прикрепляться к кишечному эпителию, использовали клеточную линию Caco-2. Эта линия клеток происходит от колоректальной аденокарциномы человека и обладает способностью дифференцироваться в клетки со многими свойствами, типичными для энтероцитов (Lea, 2015). Клетки Caco-2 обычно выращивали в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы (Sigma, Милан, Италия) с добавлением 2 мМ L-глутамина (Sigma, Милан, Италия) и 20% об. / Об. Сыворотки бычьего плода (Sigma, Милан, Италия). ) в колбах для клеточных культур (Корнинг, Нью-Йорк, США) при 37 ° C с 5% CO ₂.Для получения дифференцированных культур Caco-2 клетки инокулировали с плотностью 10 ⁵ клеток / см ² и выдерживали в культуре 21 день, меняя культуральную среду каждые 3-4 дня. Для испытаний на адгезию клетки Caco-2 инокулировали на стерильные покровные стекла в шестилуночных планшетах и выращивали до дифференцировки. Затем клетки инкубировали с экспоненциально растущими клетками лактобацилл, применяя соотношение 1: 400, при 37 ° C с 5% CO ₂ в течение 1 часа и дважды промывали PBS для удаления неприлипающих лактобацилл.Затем образцы фиксировали метанолом в течение 10 минут и окрашивали 10% Giemsa (Sigma, Милан, Италия) в течение восьми минут. После этого образцы трижды промывали PBS, а затем сушили на воздухе и наблюдали с помощью оптического микроскопа (увеличение в 1000 раз). Также были протестированы необработанные клетки L. acidophilus 08. Адгезию к клеткам Caco-2 оценивали путем подсчета количества прикрепившихся клеток Lactobacillus к клеткам Caco-2, учитывая по меньшей мере 200 клеток Caco-2.

Просвечивающий электронный микроскоп

Просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ) использовалась для исследования морфологических изменений, вызванных лечением HPH.Десять миллилитров контрольных образцов и образцов, обработанных HPH, центрифугировали (8000 г , 10 мин), и осажденные клетки фиксировали, суспендировав их в 2,5% глутаральдегиде (в 0,1 М буфере PBS, pH 7). Эти образцы хранили при 4 ° C в течение 2 часов. После фиксации альдегида образцы готовили согласно Bury et al. (2001). Постфиксированные клетки промывали тем же буфером, а затем их обезвоживали в течение 15 мин, используя следующую серию растворов этанола: 50, 75, 90 и 100%.Дегидратированные клетки инфильтрировали увеличивающимися концентрациями Спуррезина (Agar Scientific, Станстед, Эссекс, Соединенное Королевство) в течение 24 часов. Полимеризация смолы была достигнута путем нагревания образцов в печи при 65 ° C в течение 18 часов. Эти срезы (толщиной около 90 нм) помещали на покрытые углеродом медные сетки размером 300 меш с покрытием Form var примерно на 15 мин, промывали 20 каплями дистиллированной воды, окрашивали отрицательно, используя 6-7 капель 2% водного раствора уранилацетата. и затем исследовали с помощью просвечивающего электронного микроскопа Philips CM10.

Количественная ПЦР с обратной транскрипцией

Lactobacillus acidophilus 08 РНК экстрагировали с использованием MasterPure ^TM Complete DNA and RNA Purification (Lucigen). Выход и чистота каждой экстракции определяли путем измерения оптической плотности при 260, _нм, и 280, _нм,, используя BioDrop μLITE (BioDrop, Милан, Италия). Для всех образцов выход составил около 700 нг / мкл, и только образцы с соотношением 260 _нм/280 _нм находились между 1.9 и 2.1 использовали для реакции обратной транскрипции.

Обратную транскрипцию в кДНК проводили с использованием набора для системы обратной транскрипции (Promega, Wisconsin, WI, United States) в соответствии с инструкциями производителя. Перед анализами в реальном времени образцы должным образом разводили в воде, свободной от ДНКазы / РНКазы (Promega, Wisconsin, WI, United States), до конечной концентрации 5 нг / мкл.

Количественную ПЦР с обратной транскрипцией (RT-qPCR) проводили с использованием термоциклера Rotor gene 6000 (Corbett Life Science, Mortlake, NSW, Australia).Список генов и их функции представлены в таблице 1. Лучшие условия реакции RT-qPCR для каждого стета праймеров исследовали с помощью конечной точки ПЦР с использованием геномной ДНК L. acidophilus 08 в качестве матрицы. Были протестированы различные конечные концентрации MgCl ₂ (2,00, 3,00, 4,00 мМ) и температуры отжига (AT). Качество амплификации проверяли гель-электрофорезом с использованием 1,5% агарозных гелей (данные не представлены).

Таблица 1. Список генов, праймеров и функций белков, рассмотренных в этом исследовании.

Реакционная смесь RT-qPCR (10 мкл) включала 5 нг кДНК, 10 мкл SsoFast EvaGreen Supermix (Bio-Rad), 500 нМ каждый праймер и 8 мкл воды, свободной от ДНКазы / РНКазы (Promega, Wisconsin, WI, United Состояния). Каждую реакцию проводили трижды.

Для каждого гена определяли пороговую линию и количественный цикл (Cq), используя программное обеспечение серии Rotor-Gene (Qiagen Inc., Онтарио, Онтарио, Канада). Для каждой пары праймеров эффективность амплификации (E) рассчитывалась, как описано Pfaffl (2001), по формуле:

E = 10 (-1 / наклон)

и геномная L.acidophilus 08 Стандартные кривые ДНК, построенные с использованием пяти различных концентраций ДНК.

Анализ относительной экспрессии генов

Индексы относительной экспрессии генов (индексы RGE) были определены в соответствии с рекомендациями MIQE (Bustin et al., 2009) с использованием математической модели, предложенной Pfaffl (2001). На основании данных литературы в экспериментальных условиях были протестированы характеристики двух референсных генов (RG): 23S РНК и gadpH . Стабильность экспрессии генов двух кандидатов RG анализировали с помощью программы BestKeeper © (Pfaffl et al., 2004), и на основе индекса корреляции Пирсона была выбрана 23S РНК .

L. acidophilus 08 Анализ белка в SDS-PAGE

Всего белков L. acidophilus 08 экстрагировали из обработанных HPH и необработанных клеток в соответствии с Palomino et al. (2016) с некоторыми изменениями. Из каждого образца собирали 20 мл суспензии L. acidophilus 08 и промывали стерильным PBS (pH 7,0) центрифугированием при охлаждении (10 ° C) при 3800 об / мин в течение 10 мин.Собранные клетки снова разбавляли в буфере PBS до достижения OD 600 _нм = 1,0. Концентрированная суспензия клеток была разбавлена 1: 1 в загрузочном буфере [20% глицерин, 4% додецилсульфат натрия (SDS), 1% β-меркаптоэтанол, 0,15 M трис-HCl], и все белки экстрагировались нагреванием при 100 ° C в течение 5 дней. мин. После этого образцы инкубационного белка анализировали электрофорезом в 8–16% гелях SDS-PAGE (Biorad, Милан, Италия). Электрофорез проводили при постоянном напряжении 100 В в течение 30 мин, а затем при 200 В до завершения цикла.

Статистический анализ

Данные были обработаны с использованием программного обеспечения STATISTICA 8 (версия 8.0; Statsoft., Талса, штат Оклахома, США).

CSH, клеточные нагрузки и относительная экспрессия генов (RGE), обнаруженные в отношении приложенного давления гомогенизации 50 МПа и рассматриваемого времени кадра (2 ч), были признаны значимыми ( p <0,05 ) на основе ANOVA. и тест TUKEY HSD post hoc , в то время как адгезия к слизи и аутоагрегация были значительными ( p <0.05) на основе теста т . Для обоих тестов необработанные контрольные клетки считались контрольными условиями.

Результаты

Влияние HPH при 50 МПа на

L. acidophilus 08 Жизнеспособность клеток и гидрофобность клеточной поверхности

На рисунке 1 представлены изменения CSH L. acidophilus 08 (H%) после обработки гомогенизацией при 50 МПа. H% обработанного L. acidophilus 08 увеличился до 18,4% после 5 минут инкубации, затем он снизился в следующие 60 минут и снова увеличился в течение оставшегося рассматриваемого периода (120 минут).Напротив, H% необработанных клеток со временем снизился с 10 до 5% (рис. 1). Повышенная гидрофобность, наблюдаемая в обработанных образцах, не была связана со снижением жизнеспособности L. acidophilus 08. Фактически, как показано в таблице 2, не наблюдалось значительной потери жизнеспособности клеток ( p <0,05) (Log КОЕ / мл) после обработки HPH в течение следующих 120 минут инкубации.

Рисунок 1. Lactobacillus acidophilus 08 Гидрофобность клеточной поверхности (CSH) (H%) необработанных ( л.acidophilus 08) и обработанные клетки при 50 МПа (обработанные HPH L. acidophilus 08). Результаты представляют собой среднее значение трех независимых повторов ( n = 3). Планки погрешностей указывают на SD. Среди серий разными буквами обозначены образцы, которые существенно различаются ( p <0,05). Различные строчные буквы указывают на существенные различия для рассматриваемого образца в течение рассматриваемого времени кадра (0–120 мин), в то время как заглавные буквы указывают на существенные различия в рассматриваемых временных различиях между образцами (необработанный контроль и обработанный).

Таблица 2. Жизнеспособность необработанных (контроль) и обработанных (HPH при 50 МПа) клеток L. acidophilus 08 с течением времени (0–120 мин).

Влияние HPH при 50 МПа на

in vitro Адгезия L. acidophilus 08 в клетках муцина и Caco-2

HPH при 50 МПа увеличивал адгезионные свойства муцина L. acidophilus 08 (рис. 2). Фактически, в то время как контроль имел относительную адгезию в диапазоне от 0.38 и 1,66% в клетках, обработанных HPH, однако это значение увеличилось до 2,22 и 5,13% через 60 и 90 минут соответственно, а затем снизилось до 2,73% через 120 минут (Рисунок 2). Такое же испытание было выполнено для оценки адгезии обработанных и необработанных бактерий на клетках Caco-2. В этом случае тестировали только ту временную точку, которая показывала наилучшую адгезию муцина (90 мин). Однако не наблюдали значительных различий (9,49 ± 4,88 и 7,42 ± 2,48 прилипших клеток L. acidophilus 08 / Caco-2 для необработанных и обработанных HPH образцов, соответственно).

Рисунок 2. Lactobacillus acidophilus 08 процентные значения адгезии необработанных (контрольных) и обработанных (HPH при 50 МПа) клеток с течением времени (60–120 мин). Относительную адгезию рассчитывали на основе КОЕ / мл до и после анализа адгезии. Результаты представляют собой среднее значение четырех независимых повторов ( n = 4). Планки погрешностей указывают на SD. Различные строчные буквы указывают на существенные различия ( t -тест; p <0.05) для рассматриваемой выборки в течение рассматриваемого времени кадра (120 мин).

Влияние HPH при 50 МПа на аутоагрегацию

L. acidophilus 08

На рисунке 3 представлена кинетика аутоагрегации во времени (90–360 мин) обработанного и необработанного L. acidophilus 08. Значительные различия ( p <0,05) между двумя образцами были получены через 90 и 120 минут с более высокой аутоагрегацией в клетках, обработанных HPH, которая достигла значений 25.45% через 120 мин. Напротив, никаких различий не наблюдалось через 300 и 360 минут (Рисунок 3).

Рисунок 3. Lactobacillus acidophilus 08 процентные значения аутоагрегации необработанных (контрольных) и обработанных (обработанных HPH L. acidophilus 08) клеток с течением времени (90–360 мин). Аутоагрегацию рассчитывали на основе оптической плотности (OD) при λ = 600 _нм до и после инкубации из HPH при обработках 50 МПа. Результаты представляют собой среднее значение трех независимых повторов ( n = 3).Планки погрешностей указывают на SD. Различные строчные буквы указывают на значительные различия ( t -тест; p <0,05) для рассматриваемой выборки в течение рассматриваемого периода времени.

Влияние HPH при 50 МПа на внешнюю клеточную структуру

L. acidophilus 08

На рисунках 4A – C показаны ПЭМ-изображения обработанных и необработанных клеток L. acidophilus 08, вида, обычно характеризующегося наличием S-слоя в клеточной оболочке.Сразу после лечения HPH повлиял на внешние клеточные структуры. Фактически, непрерывный и оловянный S-слой необработанного L. acidophilus 08 (фиг. 4A) был модифицирован, создавая прерывистую и фрагментированную поверхность в клетках, обработанных HPH (фиг. 4B). Более того, наблюдались некоторые сублетальные повреждения клеточной стенки из-за приложенного механического напряжения (рис. 4C).

Рис. 4. Микрофотографии, полученные с помощью просвечивающего электронного микроскопа Lactobacillus acidophilus 08: необработанный контроль (A) ; 50 МПа клетки, обработанные HPH (B, C) .Белые стрелки указывают на прерывистую и фрагментированную поверхность; черные стрелки указывают на сублетальные повреждения клеточной стенки. Увеличение: 52000 ×.

Влияние HPH при 50 МПа на гены адгезии и стрессовой реакции

L. acidophilus 08
Фигура 5 иллюстрирует экспрессию генов, связанных с адгезией ( efTU и slpA ) и ответом на кислотный стресс ( groEL и clpP ) в течение 120 минут после гипербарической обработки (Рисунок 5). groEL и efTU были активированы, в то время как clpP и slpA были подавлены (рисунок 6). В частности, groEL и ef-TU показали аналогичную тенденцию экспрессии в течение первых 5 минут с увеличением в 1,5 и 2 раза ( p <0,05) соответственно. Затем волна индукции гена достигла максимального четырехкратного увеличения между 30 ( ef-TU ) и 90 ( groEL ) мин и в конечном итоге снизилась до значений, близких к исходным, через 120 мин ( p <0 .05) (Рисунок 2). Напротив, гомогенизация при 50 МПа значительно ( p <0,05) снижает экспрессию clpP и slpA в течение 2 часов после обработки. Половинное снижение экспрессии clpP было достигнуто через 30 мин после обработки, а понижающая регуляция сохранялась в течение 2 ч (фиг. 5). Аналогичное поведение наблюдалось для slpA (рис. 5).
Рисунок 5. Эволюция индекса относительной экспрессии генов (RGE) Lactobacillus acidophilus 08 groEL (шаперонин 60 кДа), ef-TU (фактор элонгации-TU), clpP (АТФ-зависимая протеолитическая субъединица протеазы Clp) и slpA (S-слой поротеина A) после гомогенизации под высоким давлением при 50 МПа с использованием 23S РНК в качестве контрольного гена.Результаты представляют собой среднее значение трех независимых повторов ( n = 3), собранных за период времени 0–120 минут. Планки погрешностей указывают на SD. Различные буквы относятся к значительным различиям ( p <0,05) RGE каждого гена в течение рассматриваемого периода времени.
Рисунок 6. Профиль SDS-PAGE белков цельных клеток (500 мкл OD _{600 нм} = 10) необработанных клеток Lactobacillus acidophilus 08 (контроль) и клеток, обработанных HPH, через 90, 120 и 360 минут, и 24 часа после обработки.
Влияние HPH при 50 МПа на цельноклеточные белки
L. acidophilus 08
Разделение белков, экстрагированных из L. acidophilus 08 после HPH при 50 МПа и в течение следующих 24 часов, было выполнено с помощью SDS-PAGE (Рисунок 6). В качестве контроля были взяты белки необработанных L. acidophilus 08. Полосы белка оценивали путем сравнения со стандартами молекулярной массы (20–250 кДа). По сравнению с контролем, образцы с гипербарической обработкой показали большее количество полос белков (и в некоторых случаях более интенсивные) с низкой и высокой молекулярной массой даже через 90 минут после препятствия.Этот эффект сохранялся в последующие 24 ч (рис. 6).
Обсуждение
Согласно литературным данным, сублетальные уровни HPH представляют собой полезный инструмент для увеличения пробиотических свойств в зависимости от штамма. В настоящем исследовании гипербарическая обработка при 50 МПа модулировала фенотипические признаки клеточной поверхности L. acidophilus 08, не влияя на его жизнеспособность. Фактически, HPH увеличивал CSH и автоагрегацию с течением времени. По сравнению с необработанными бактериями, клетки, обработанные HPH, увеличивали свой CSH до 20% в течение всех рассматриваемых 120 минут, в то время как различия в аутоагрегации наблюдались только до 90 минут от начала обработки.Что касается тестируемых анализов адгезии, никаких различий в клетках Caco-2 не наблюдалось. Однако на этот результат мог повлиять единственный тестируемый момент времени и тот факт, что Caco-2 не продуцируют слизь (Gagnon et al., 2013). Фактически, в испытании, проведенном на муциновом слое, обработанные бактерии показали улучшенную адгезию по сравнению с необработанными (5,13 и 0,76%, соответственно, через 90 минут от гипербарического барьера). Собранные данные, кажется, доказывают, что ответ L.acidophilus 08 к HPH связано с модуляцией его адгезии в течение периода времени от 60 до 120 минут после обработки. Эти результаты можно считать дальнейшим прогрессом по сравнению с результатами, описанными Tabanelli et al. (2013), где гидрофобность и аутоагрегацию оценивали только сразу после обработки HPH. Однако различия в двух исследованиях относительно начальных значений гидрофобности и аутоагрегации клеток можно объяснить разными применяемыми средами и стадией роста клеток.Фактически, согласно Klotz et al. (2017), S-слой L. acidophilus изменяется между логарифмической и ранней стационарной фазами. Более того, методы предварительного культивирования и инокуляции могут иметь сильное влияние на поведение клеток в зависимости от применяемых экспериментальных условий (Kragh et al., 2018). Результаты ПЭМ согласуются с выводами Tabanelli et al. (2015) относительно L. acidophilus DRU, обработанных HPH. Фактически, препятствие порождало прерывистую и фрагментированную клеточную поверхность.В настоящем исследовании также наблюдались сублетальные повреждения клеточной стенки из-за механического напряжения. Однако, как уже сообщалось Табанелли и соавт. (2013), HPH не снижал жизнеспособность L. acidophilus 08. Баротолерантность молочнокислых бактерий, таких как Lactiplantibacillus plantarum subsp. plantarum , L. paracasei A13 и L. acidophilus Dru уже были описаны Lanciotti et al. (2007) и Табанелли и др. (2013) с использованием сублетального давления.Даже более высокое давление (130 МПа) показало незначительное снижение жизнеспособности Lactobacillus helveticus и L. plantarum subsp. plantarum штаммов (Vannini et al., 2004), подтверждающих эту баротолерантность.
Понимание генетических механизмов, регулирующих CSH, очень важно при изучении пробиотиков, поскольку они могут коррелировать со способностью микробов прикрепляться и, в некоторой степени, колонизировать эпителий кишечника, обеспечивая конкурентное преимущество выбранному штамму (Schillinger et al. ., 2005). Данные, касающиеся экспрессии генов, предполагают, что гипербарическое лечение способно специфически модулировать groEL и clpP , которые оба связаны с общими механизмами реакции на стресс. groEL кодирует цитоплазматический шаперониновый белок (GroEL), и он широко консервативен среди видов микробов. Вместе с GroES и DnaK GroEL является частью комплекса репарации сворачивания денатурированных полипептидов и участвует во многих стрессовых реакциях (Weiss and Jespersen, 2010; Hernández-Alcántara et al., 2018), таких как воздействие кислот и оснований, высоких концентраций солевого раствора, этанола, кислорода и тепла (Hartl, 1996; Wickner et al., 1999; Saibil, 2008). Фактически, в этих условиях белки-шаперонины экспрессируются, и они обращают денатурацию развернутых полипептидов (Weiss and Jespersen, 2010; Mbye et al., 2020). Когда шаперонины не могут уложить поврежденные белки, молекулярный скавенджер АТФ-зависимая протеаза Clp действует в разложении поврежденных белков. В нашем эксперименте обработка HPH вызвала значительную сверхэкспрессию groEL , которая поддерживалась в течение 90 минут, после чего она начала снижаться, возвращаясь к исходному уровню.
По сравнению с groEL ген протеазы clpP показал противоположный ответ. Фактически, обработка HPH снижала его экспрессию в течение следующих 120 минут инкубации. Таким образом, это может указывать на то, что повышающая регуляция groEL проходит через альтернативный образец индукции, не связанный с общей реакцией на стресс. Данные настоящего исследования частично согласуются с данными, обнаруженными Weiss и Jespersen (2010) на L. acidophilus NCFM во время моделирования пищеварения желудочно-кишечного тракта, при котором условия желудка оказали значительный индуцирующий эффект на groEL и умеренное влияние на п.п. .Это предполагает, что обработка HPH может привести к экспрессии гена в L. acidophilus 08, подобной экспрессии, вызванной кислотным стрессом.
Хотя шаперонин GroEL является преимущественно внутриклеточным (Gupta, 1995), некоторые авторы идентифицировали присутствие этого белка на поверхности клеток различных пробиотиков и патогенов (Kainulainen and Korhonen, 2014), где он становится частью секретома. Этот комплекс дает штаммам преимущество для колонизации экологической ниши. Более того, другие исследования показали, что groEL имеет поведение при лунном свете (Kainulainen and Korhonen, 2014; Amblee and Jeffery, 2015; Jeffery, 2019), то есть способность выполнять более одной биологической функции, включая адгезию (Kainulainen and Корхонен, 2014).Как адгезиноподобный белок, groEL может способствовать адгезии клеток к слизи и эпителиальным клеткам, стимулировать выработку цитокинов и ингибировать адгезию энтеропатогенов к поверхности клетки-хозяина (Bergonzelli et al., 2006; Ramiah et al., 2008; Sánchez et al., 2009). ; Spurbeck, Arvidson, 2012; Sun et al., 2016; Peng et al., 2018). Как сообщается в литературе, фактор удлинения-Ту (EF-Tu) также должен иметь поведение при лунном свете. Фактически, помимо функции G-белка, который способствует правильному переносу аминоацил-тРНК к рибосомам во время синтеза белка (Gaucher et al., 2001), EF-Tu может иметь адгезионную функцию (Granato et al., 2004; Amblee, Jeffery, 2015; Jeffery, 2019). Подобно GroEL, EF-Tu усиливает адгезию Lactobacillus johnsonii NCC 533 (La1) к слизистой оболочке кишечника (Granato et al., 2004; Bergonzelli et al., 2006). В нашем исследовании ef-TU был индуцирован сублетальной обработкой HPH, и картина отражала наблюдаемую для groEL , с максимальным уровнем экспрессии, достигнутым через 60–90 мин. Более того, Ramiah et al.(2009) обнаружили, что моделируемая гастродуоденальная среда (бульон MRS с добавлением муцина, желчной соли и панкреатина) индуцировала 40-кратную экспрессию гена efTU в L. acidophilus ATCC 4356. Это может свидетельствовать о том, что лечение HPH оказало аналогичное воздействие на L. acidophilus 08.
Хотя GroEL и EF-Tu известны своим эффектом лунного света, нельзя сделать вывод, что их повышенная экспрессия генов после сублетальной обработки HPH также определяет лучшую адгезию.Безусловно, их увеличение — это реакция на стрессовые условия. Фактически, во время прохождения через гомогенизирующий клапан повышение температуры на миллисекунды и увеличение распределения газа в цитоплазматических мембранах вызывает заметный окислительный стресс для клеток, которому можно более или менее эффективно противодействовать, в зависимости от вида микробов, штаммов и применяемые протоколы (Siroli et al., 2020). Хотя это особенно верно, когда ячейки подвергаются воздействию 150 и 200 МПа, оно становится минимальным при приложении пониженного давления, как в нашем случае (50 МПа).
Чтобы лучше прояснить модификации поверхности, была исследована экспрессия гена slpA . Белок SlpA представляет собой один из трех основных белков внешнего S-слоя клеточной оболочки у L. acidophilus (Johnson et al., 2013). S-слой представляет собой кристаллическую матрицу нековалентно связанных белков (белков Slp), которая влияет на поверхностные свойства нескольких лактобацилл, включая штаммы, ферментирующие молочные продукты и связанные со слизистой оболочкой (например, L. acidophilus, Lactobacillus crispatus и Lactobacillus hevleticus ). ) (Hynönen and Palva, 2013).HPH при 50 МПа индуцировал сильную понижающую регуляцию гена slpA сразу после обработки и в течение следующих 120 минут. Однако это снижение не было связано со снижением CSH или других фенотипических признаков, таких как аутоагрегация или приверженность муцину. Это может указывать на то, что механизмы, регулирующие адгезию L. acidophilus 08, также могут быть связаны с положительной модификацией другой самой внешней структуры, такой как клеточная стенка и LTA.Фактически, Фина Мартин и др. (2019) продемонстрировали, что LTA служит якорем для белка S-слоя и прикрепляет S-слой к клеточной стенке лактобацилл. Даже Iucci et al. (2007) предположили, что лечение HPH может вызвать повышенное воздействие на гидрофобные области белков в зависимости от уровня лечения. Эта гидрофобность, по-видимому, является ключевым фактором усиленного антимикробного действия ферментов, обработанных HPH, таких как лизоцим или лактоферрин. Сообщалось, что давление может нарушить большую надмолекулярную структуру белков, позволяя отдельным компонентам свободно перемещаться и становиться независимыми от исходной структуры.Взаимодействие могло быть восстановлено, когда давление мгновенно снижалось, однако исходная структура не сохранялась из-за независимых движений компонентов (Iucci et al., 2007). По данным Palomino et al. (2016), SlpA имеет молекулярную массу 45,9 кДа и представляет 90% белков S-слоя в L. acidophilus ATCC 4356. В нашей работе необработанные клетки также обладали очень толстой полосой в SDS-PAGE, которая могла соответствовать в SlpA. Эта полоса не изменилась после лечения HPH.Несоответствие между подавлением гена и предполагаемым содержанием белка не известно. Фактически, экспрессия генов не всегда отражает количество белка из-за различных уровней регуляции внутри клеток (Liu et al., 2016). Более того, в нашем случае наблюдаемое снижение составило около 1 RGE, что может быть недостаточно для наблюдения с точки зрения содержания белка. Другая возможная гипотеза состоит в том, что бактерии, несущие S-слой, могут экспрессировать альтернативные гены белков S-слоя для адаптации к стрессовым условиям окружающей среды (Sára and Sleytr, 2000; Jakava-Viljanen et al., 2002; Schär-Zammaretti et al., 2005; Grosu-Tudor et al., 2016). Как показали Grosu-Tudor et al. (2016), на состав S-слоя L. acidophilus IBB 801 влияли различные условия культивирования, такие как температура роста, осмотическое давление и pH. Вероятно, гомогенизация вызвала специфический ответ, проходящий через активацию альтернативных генов slp , которые опосредуют адаптацию к приложенному стрессу. В нашей работе обработка HPH увеличивала полосы между 45 и 50 кДа, которые могли соответствовать белкам Slp, таким как SlpX.Фактически, Паломино и др. (2016) наблюдали увеличение SplX при осмотическом стрессе. Поскольку эти предположения основаны на профилях молекулярной массы, потребуются более специфические анализы S-белков, такие как вестерн-блоттинг или протеомика. Помимо предполагаемых белков S-слоя, обработка HPH выявила общее увеличение полос с высокой и низкой молекулярной массой. Табанелли и др. (2015) показали увеличение пептидов с низкой молекулярной массой в обработанных HPH L. acidophilus DRU с использованием протеомного подхода с помощью MALDI-TOF.Генерация этих молекул объяснялась как действием HPH на белки клеточной поверхности, так и клеточным ответом на обработку HPH. Кроме того, увеличение белков с более высокой молекулярной массой могло быть результатом как синтеза белка de novo , так и механической перестройки внешней поверхности клетки после применяемой обработки. Прерывистый S-слой обработанных клеток и наблюдаемые сублетальные повреждения клеточной стенки могут иметь открытые белки с гидрофобными участками, которые усиливают клеточную адгезию и гидрофобность.
Заключение
Гомогенизация под высоким давлением, примененная при 50 МПа к L. acidophilus 08, улучшила CSH (более высокий H%), аутоагрегацию и адгезию in vitro к муцину по сравнению с необработанными бактериями. Технология, применяемая на сублетальном уровне, также индуцировала специфические модуляции генов общей стрессовой реакции и клеточной адгезии. В частности, гены стрессовой реакции groEL и ef-TU были активированы, в то время как ген clpP и ген S-слоя slpA подавлялся.Подавление slpA могло быть компенсировано более высоким содержанием других белков Slp. Однако эта гипотеза требует дальнейшего углубленного изучения. Можно применить протеомный подход, чтобы точно понять, какие белки модулируются во время обработки HPH, и определить, какие из них могут повлиять на улучшенную функциональность. Фактически, как сообщает Wu et al. (2016), исчерпывающий протеомный профиль целевых видов микробов, подвергающихся различным стрессам, может предоставить более надежную информацию при описании стратегии молекулярного спасения, принятой штаммом при конкретном стрессе.В конце концов, чтобы полностью понять весь механизм HPH, необходимо выяснить структуру пептидогликана и LTA после лечения HPH. Результаты, полученные в настоящей работе, могут подтвердить свидетельство того, что сублетальное лечение HPH может положительно влиять на некоторые фенотипические признаки адгезии L. acidophilus 08, вызывая клеточный ответ между 60 и 120 минутами после обработки. Таким образом, при разработке инновационных стратегий повышения эффективности пробиотических штаммов с помощью технологии HPH следует учитывать оптимизацию операционных протоколов.
Заявление о доступности данных
Оригинальные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительные материалы, дальнейшие запросы можно направлять соответствующим авторам.
Авторские взносы
RL, GB и FP разработали исследование, интерпретировали данные и написали рукопись. GB и MD’A провели исследование и проанализировали данные. DG и LS внесли свой вклад в интерпретацию данных. RL и FP контролировали экспериментальные работы и предоставляли средства.Все авторы внесли свой вклад в редактирование рукописи и одобрили представленную версию.
Конфликт интересов
Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Список литературы
Бергонцелли, Г. Э., Гранато, Д., Придмор, Р. Д., Марвин-Гай, Л. Ф., Донникола, Д., и Кортези-Теулаз, И. Е. (2006). GroEL Lactobacillus johnsonii La1 (NCC 533) связан с клеточной поверхностью: потенциальная роль во взаимодействии с хозяином и желудочным патогеном Helicobacter pylori. Заражение. Иммун. 74, 425–434. DOI: 10.1128 / iai.74.1.425-434.2006
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Бак Б. Л., Альтерманн Э., Свингеруд Т. и Клаенхаммер Т. Р. (2005). Функциональный анализ предполагаемых факторов адгезии в Lactobacillus acidophilus NCFM. заявл. Environ. Microb. 71, 8344–8351. DOI: 10.1128 / AEM.71.12.8344-8351.2005
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Бернс, П., Виндерола, Г., Бинетти, А., Киберони, А., де Лос Рейес-Гавилан, К., и Рейнхеймер, Дж. (2008). Желчеустойчивые производные, полученные из не кишечных молочных лактобацилл. Внутр. Молочный J. 18, 377–385. DOI: 10.1016 / j.resmic.2011.07.005
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Бернс, П. Г., Патриньяни, Ф., Табанелли, Г., Виндерола, Г. К., Сироли, Л., Рейнхаймер, Дж. А. и др. (2015). Возможность гомогенизации под высоким давлением влияет на качество и функциональность пробиотического сыра Качотта. J. Funct. Продукты питания 13, 126–136. DOI: 10.1016 / j.jff.2014.12.037
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Бери Д., Елен П. и Калаб М. (2001). Разрушение Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus 11842 клетки для гидролиза лактозы в молочных продуктах: сравнение обработки ультразвуком, гомогенизации под высоким давлением и шариковой мельницы. Innov. Food Sci. Emerg. 2, 23–29. DOI: 10.1016 / S1466-8564 (00) 00039-4
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Бустин, С.A., Benes, V., Garson, J. A., Hellemans, J., Huggett, J., Kubista, M., et al. (2009). Рекомендации MIQE: минимум информации для публикации количественных экспериментов ПЦР в реальном времени. Оксфорд: Издательство Оксфордского университета, DOI: 10.1373 / Clinchem.2008.112797
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Колладо, М. К., Мерилуото, Дж., И Салминен, С. (2008). Адгезионные и агрегационные свойства пробиотических и патогенных штаммов. евро. Food Res. Technol. 226, 1065–1073. DOI: 10.1007 / s00217-007-0632-x
CrossRef Полный текст | Google Scholar
ФАО / ВОЗ (2001). Оценка здоровья и пищевых свойств сухого молока и живых молочнокислых бактерий. Рим: ФАО / ВОЗ.
Google Scholar
Фина Мартин, Дж., Паломино, М. М., Кутин, А. М., Моденутти, К. М., Фернандес До Порту, Д. А., Аллиеви, М. К. и др. (2019). Изучение лектин-подобной активности белка S-слоя Lactobacillus acidophilus ATCC 4356. заявл. Microbiol. Biotechnol. 103, 4839–4857. DOI: 10.1007 / s00253-019-09795-y
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Фрис Д., Савийоки К., Варманен П. и Ингмер Х. (2007). Clp-АТФазы и протеолитические комплексы ClpP регулируют жизненно важные биологические процессы у грамположительных бактерий с низким уровнем GC. Мол. Microbiol. 63, 1285–1295. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.2007.05598.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ганьон, М., Бернер А.З., Червет Н., Шассар К. и Лакруа К. (2013). Сравнение моделей кишечных клеток Caco-2, HT-29 и секретирующих слизь HT29-MTX для исследования адгезии и инвазии Salmonella . J. Microbiol. Методы 94, 274–279. DOI: 10.1016 / j.mimet.2013.06.027
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Гоше, Э. А., Миямото, М. М., и Беннер, С. А. (2001). Функционально-структурный анализ белков с использованием эволюционных подходов на основе коварионов: факторы элонгации. Proc. Natl. Акад. Sci. США 98, 548–552. DOI: 10.1073 / pnas.98.2.548
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Гранато Д., Бергонцелли Г. Э., Придмор Р. Д., Марвин Л., Руве М. и Кортези-Теулаз И. Э. (2004). Связанный с клеточной поверхностью фактор удлинения tu опосредует прикрепление Lactobacillus johnsonii ncc533 (la1) к клеткам кишечника и муцинам человека. Заражение. Иммун. 72, 2160–2169. DOI: 10.1128 / iai.72.4.2160-2169.2004
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Grosu-Tudor, S.-S., Brown, L., Hebert, E.M., Brezeanu, A., Brinzan, A., Fadda, S., et al. (2016). Продукция S-слоя Lactobacillus acidophilus IBB 801 в стрессовых условиях окружающей среды. заявл. Microb. Биотех. 100, 4573–4583.
Google Scholar
Гупта Р. С. (1995). Эволюция белков семейства шаперонинов (HSP60, HSP 10 и TCP-1) и происхождение эукариотических клеток. Мол. Microbiol. 15, 1–11. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.1995.tb02216.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Хартл, Ф. У. (1996). Молекулярные шаперонины в сворачивании клеточных белков. Природа 381, 571–580.
Google Scholar
Эрнандес-Алькантара, А. М., Вахер, К., Ллама, М. Г., Лопес, П., и Перес-Чабела, М. Л. (2018). Пробиотические свойства и стрессовая реакция термотолерантных молочнокислых бактерий, выделенных из приготовленных мясных продуктов. LWT 91, 249–257. DOI: 10.1016 / j.lwt.2017.12.063
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Hynönen, U., и Palva, A. (2013). Белки поверхностного слоя Lactobacillus: структура, функции и применение. заявл. Microb. Биотех. 97, 5225–5243. DOI: 10.1007 / s00253-013-4962-2
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Iucci, L., Patrignani, F., Vallicelli, M., Guerzoni, M. E., and Lanciotti, R. (2007). Влияние гомогенизации под высоким давлением на активность лизоцима и лактоферрина против Listeria monocytogenes. Food Control 18, 558–565. DOI: 10.1016 / j.foodcont.2006.01.005
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Якава-Вильянен, М., Авалл-Яэскеляйнен, С., Месснер, П., Слейтр, У. Б. и Палва, А. (2002). Выделение трех новых генов белка поверхностного слоя (slp) из Lactobacillus brevis ATCC 14869 и характеристика изменения их экспрессии в аэрированных и анаэробных условиях. J. Bacteriol. 184, 6786–6795. DOI: 10.1128 / JB.184.24.6786-6795.2002
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Джеффри, К. Дж. (2019). Внутриклеточные / поверхностные подрабатывающие белки, которые способствуют прикреплению кишечной микробиоты к хозяину. AIMS Microbiol. 5, 77–86. DOI: 10.3934 / microbiol.2019.1.77
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Джонсон, Б., Селле, К., О’Флаэрти, С., Го, Ю. Дж., И Кленхаммер, Т. (2013). Идентификация белков, связанных с внеклеточным поверхностным слоем, в Lactobacillus acidophilus NCFM. Микробиология 159 (Pt 11): 2269. DOI: 10.1099 / mic.0.070755-0
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Клотц, К., О’Флаэрти, С., Го, Ю. Дж., И Баррангу, Р. (2017). Изучение влияния фазы роста на протеом, связанный с поверхностным слоем Lactobacillus acidophilus , с использованием количественной протеомики. Фронт. Microbiol. 8: 2174. DOI: 10.3389 / fmicb.2017.02174
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Краг, К.N., Alhede, M., Rybtke, M., Stavnsberg, C., Jensen, P. Ø, Tolker-Nielsen, T., et al. (2018). Метод посева может повлиять на результат микробиологических экспериментов. заявл. Environ. Microb. 84: e02264-17. DOI: 10.1128 / aem.02264-17
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Lanciotti, R., Patrignani, F., Iucci, L., Saracino, P., and Guerzoni, M. E. (2007). Возможность гомогенизации под высоким давлением в контроле и усилении протеолитической и ферментативной активности некоторых видов Lactobacillus . Food Chem. 102, 542–550. DOI: 10.1016 / j.foodchem.2006.06.043
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ли, Т. (2015). «Клеточная линия Caco-2» в Влияние пищевых биологически активных веществ на здоровье , ред. К. Верхоэккс, П. Коттер, И. Лопес-Экспосито, К. Клейвеланд, Т. Ли, А. Маки и др. (Чам: Спрингер), 103–111. DOI: 10.1007 / 978-3-319-16104-4
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Mbye, M., Baig, M.A., AbuQamar, S.Ф., Эль-Тарабили, К. А., Обейд, Р. С., Осайли, Т. М. и др. (2020). Обновленная информация о реакции пробиотических молочнокислых бактерий на стрессы окружающей среды и основные моменты протеомного анализа. Компр. Rev. Food Sci. Food Saf. 19, 1110–1124. DOI: 10.1111 / 1541-4337.12554
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Паломино, М. М., Ваенер, П. М., Мартин, Дж. Ф., Охеда, П., Мэлоун, Л., Ривас, К. С. и др. (2016). Влияние осмотического стресса на профиль и экспрессию генов белков поверхностного слоя Lactobacillus acidophilus ATCC 4356. заявл. Microbiol. Biotechnol. 100, 8475–8484. DOI: 10.1007 / s00253-016-7698-y
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Патриньяни, Ф., Бернс, П., Серразанетти, Д., Виндерола, Г., Рейнхеймер, Дж., Ланчотти, Р., и др. (2009). Пригодность гомогенизированного молока под высоким давлением для производства ферментированного молока с пробиотиками, содержащего Lactobacillus paracasei и Lactobacillus acidophilus . J. Diary Res. 76:74.DOI: 10.1017 / S0022029
3828
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пэн З., Фогель Р. Ф., Эрманн М. А. и Сюн Т. (2018). Идентификация и характеристика адгезионных белков в лактобациллах, нацеленных на актин как рецептор. Мол. Клеточный зонд 37, 60–63. DOI: 10.1016 / j.mcp.2017.08.002
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Pfaffl, M. W., Tichopad, A., Prgomet, C., and Neuvians, T. P. (2004).Определение стабильных генов домашнего хозяйства, дифференциально регулируемых генов-мишеней и целостности выборки: инструмент на основе BestKeeper – Excel с использованием парных корреляций. Biotechnol. Lett. 26, 509–515. DOI: 10.1023 / B: BILE.0000019559.84305.47
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Рамия, К., ван Ринен, К., и Дикс, Л. (2009). Экспрессия mub гена адгезии слизи, белка поверхностного слоя slp и подобного адгезии фактора EF-TU из Lactobacillus acidophilus ATCC 4356 в условиях стресса пищеварения, что контролировалось с помощью ПЦР в реальном времени. Пробиотики Antimicro. 1:91. DOI: 10.1007 / s12602-009-9009-8
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Рамиа, К., ван Ринен, К. А., и Дикс, Л. М. Т. (2008). Поверхностно-связанные белки Lactobacillus plantarum 423, которые способствуют адгезии клеток Caco-2 и их роль в конкурентном исключении и вытеснении Clostridium sporogenes и Enterococcus faecalis . Res. Microbiol. 59, 470–475.DOI: 10.1016 / j.resmic.2008.06.002
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Санчес Б., Шмиттер Дж. М. и Урдачи М. К. (2009). Идентификация новых белков, секретируемых Lactobacillus rhamnosus GG, выращенными в бульоне де Манна-Рогоза-Шарпа. Lett. Прил. Microbiol. 48, 618–622. DOI: 10.1111 / j.1472-765X.2009.02579.x
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Сандерс, М., и Клаенхаммер, Т.(2001). Приглашенный обзор: научная основа функциональности Lactobacillus acidophilus NCFM как пробиотика. J. Dairy Sci. 84, 319–331. DOI: 10.3168 / jds.S0022-0302 (01) 74481-5
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Шер-Заммаретти, П., Диллманн, М.-Л., Д’Амико, Н., Аффолтер, М., и Уббинк, Дж. (2005). Влияние состава ферментационной среды на физико-химические свойства поверхности Lactobacillus acidophilus . заявл. Environ.Microbiol. 71, 8165–8173. DOI: 10.1128 / AEM.71.12.8165-8173.2005
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Schillinger, U., Guigas, C., and Heinrich Holzapfel, W. (2005). Приверженность in vitro и другие свойства лактобактерий, используемых в пробиотических йогуртовых продуктах. Внутр. Dairy J. 15, 1289–1297. DOI: 10.1016 / j.idairyj.2004.12.008
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Селле, К., Го, Ю. Дж., Джонсон, Б. Р., О’Флаэрти, С., Андерсен, Дж. М., Баррангу, Р. и др. (2017). Делеция синтазы липотейхоевой кислоты влияет на экспрессию генов, кодирующих белки клеточной поверхности в Lactobacillus acidophilus . Фронт. Microbiol. 8: 553. DOI: 10.3389 / fmicb.2017.00553
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Серразанетти, Д. И., Патриньяни, Ф., Руссо, А., Ваннини, Л., Сироли, Л., Гардини, Ф. и др. (2015). Изменения жирных кислот в клеточной мембране и экспрессия десатуразы Saccharomyces bayanus , подвергнутого гомогенизации под высоким давлением в связи с добавлением экзогенных ненасыщенных жирных кислот. Фронт. Microbiol. 6: 1105. DOI: 10.3389 / fmicb.2015.01105
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Шевале Р. Н., Савале П. Д., Хедкар К. и Сингх А. (2014). Критерии выбора пробиотика: обзор. Внутр. J. Probiot. Пребиот. 9, 17–22.
Google Scholar
Сироли, Л., Браски, Г., Росси, С., Готтарди, Д., Патриньяни, Ф., и Ланчотти, Р. (2020). Lactobacillus paracasei A13 и реакция на стресс гомогенизации при высоком давлении. Микроорганизмы 8: 439. DOI: 10.3390 / микроорганизмы8030439
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Спербек, Р. Р., Арвидсон, К. Г. (2012). Lactobacillus gasseri поверхностно-ассоциированные белки подавляют прикрепление Neisseria gonorrhoeae к эпителиальным клеткам. Заражение. Иммун. 80, 3743–3743. DOI: 10.1128 / IAI.00789-12
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Sun, Y., Zhu, D.-Q., Zhang, Q.-X., Pang, X.-H., Sun, S.-R., Liu, F., et al. (2016). Экспрессия белка GroEL амплифицирована из Bifidobacterium animalis subsp. lactis KLDS 2.0603 и его роль в конкурентной адгезии к Caco-2. Food Biotechnol. 30, 292–305. DOI: 10.1080 / 086.2016.1244769
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Табанелли, Г., Бернс, П., Патриньяни, Ф., Гардини, Ф., Ланчотти, Р., Рейнхаймер, Дж. И др. (2012). Влияние нелетальной обработки гомогенизацией под высоким давлением на реакцию пробиотических лактобацилл in vivo. Food Microbiol. 32, 302–307. DOI: 10.1016 / j.fm.2012.07.004
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Табанелли, Г., Патриньяни, Ф., Гардини, Ф., Виндерола, Г., Рейнхеймер, Дж., Грация, Л. и др. (2014). Влияние сублетальной гомогенизации под высоким давлением на состав жирнокислотной мембраны пробиотических лактобацилл. Lett. Прил. Microbiol. 58, 109–117. DOI: 10.1111 / lam.12164
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Табанелли, Г., Патриньяни, Ф., Виндерола, Г., Райнхеймер, Дж., Гардини, Ф., и Ланчотти, Р. (2013). Влияние сублетальных обработок гомогенизацией под высоким давлением на функциональные и биологические свойства молочнокислых бактерий in vitro. LWT Food Sci. Technol. 53, 580–586. DOI: 10.1016 / j.lwt.2013.03.013
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Табанелли Г., Вернокки П., Патриньяни Ф., Дель Кьерико Ф., Путиньяни Л., Виндерола Г. и др. (2015). Влияние сублетальной гомогенизации под высоким давлением на внешние клеточные структуры и профили летучих молекул двух штаммов пробиотических лактобацилл. Фронт. Microbiol. 6: 1006. DOI: 10.3389 / fmicb.2015.01006
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Валериано В., Парунгао-Балолонг М. и Канг Д. К. (2014). Оценка in vitro муциновой адгезионной способности и пробиотического потенциала Lactobacillus mucosae LM 1. J. Appl. Microbiol. 117, 485–497. DOI: 10.1111 / jam.12539
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ван ден Аббеле, П., Grootaert, C., Possemiers, S., Verstraete, W., Verbeken, K., and Van de Wiele, T. (2009). Модель in vitro для изучения модуляции сообщества прикрепленных к муцину бактерий. заявл. Microbiol. Биот. 83, 349–359. DOI: 10.1007 / s00253-009-1947-2
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ваннини Л., Ланчотти Р., Балди Д. и Герцони М. (2004). Взаимодействие между гомогенизацией под высоким давлением и антимикробной активностью лизоцима и лактопероксидазы. Внутр. J. Food Microbiol. 94, 123–135. DOI: 10.1016 / j.ijfoodmicro.2004.01.005
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Виндерола, К. Г., и Рейнхеймер, Дж. А. (2003). Стартовые молочнокислые бактерии и пробиотические бактерии: сравнительное исследование пробиотических характеристик и устойчивости биологического барьера «in vitro». Food Res. Int. 36, 895–904. DOI: 10.1016 / S0963-9969 (03) 00098-X
CrossRef Полный текст | Google Scholar
Ван, В., He, J., Pan, D., Wu, Z., Guo, Y., Zeng, X., et al. (2018). Метаболомический анализ адгезионной активности Lactobacillus plantarum ATCC 14917 при исходном кислотном и щелочном стрессе. PLoS One 13: e0196231. DOI: 10.1371 / journal.pone.0196231
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Вайс, Г., Джесперсен, Л. (2010). Транскрипционный анализ генов, связанных со стрессом и адгезией в Lactobacillus acidophilus NCFM во время прохождения через модель желудочно-кишечного тракта in vitro. J. Mol. Microb. Биотех. 18, 206–214. DOI: 10.1159 / 000316421
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Викнер С., Маурици М. Р. и Готтесман С. (1999). Посттрансляционный контроль качества: сворачивание, рефолдинг и деградация белков. Наука 286, 1888–1893.
Google Scholar
У З., Пинпин В., Хе Дж., Пан П., Цзэн Х. и Цао Дж. (2016). Протеомный анализ штамма Lactobacillus plantarum в сыроподобных условиях. J. Proteom. 146, 165–171. DOI: 10.1016 / j.jprot.2016.07.008
PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar
Пролежни: более опасно, чем мы думали?
Задача: Изучить бремя смертности от пролежней в США и изучить расовые / этнические различия и сопутствующие заболевания.
Дизайн: Описательное исследование с подобранными сравнениями отношения шансов.
Параметр: США, 1990-2001 гг.
Участники: Смерти, связанные с пролежневыми язвами, были идентифицированы из национальных регистрационных записей смертей с множественными причинами за период с 1990 по 2001 год.
Основные показатели результатов: Скорректированные по возрасту показатели смертности и сравнение соотношения шансов смертей от пролежней и смертей от других состояний.
Основные результаты: В период с 1990 по 2001 год пролежни были зарегистрированы как причина смерти 114 380 человек (коэффициент смертности с поправкой на возраст, 3,79 на 100 000 населения; 95% доверительный интервал [ДИ], 3,77–3,81). 21 365 (18,7%) из этих смертей были зарегистрированы как основная причина пролежней. Почти 80% смертей, связанных с пролежнями, приходятся на людей в возрасте от 75 лет.Септицемия отмечена в 39,7% смертей, связанных с пролежнями (совпадающее отношение шансов, 11,3; 95% ДИ, 11,0–11,7). Рассеянный склероз, паралич, болезнь Альцгеймера, остеопороз и болезнь Паркинсона чаще регистрировались среди смертей, связанных с пролежнями, чем в контрольной группе. Смертность от пролежней была выше среди чернокожих, чем среди белых (скорректированный по возрасту коэффициент 4,22; 95% ДИ 4,16–4,27).
Заключение: Пролежни связаны со смертельными септическими инфекциями и, как сообщается, являются причиной тысяч смертей каждый год в Соединенных Штатах.Недееспособные хронические и нейродегенеративные состояния являются распространенными сопутствующими заболеваниями, а уровень смертности среди чернокожих выше, чем среди других расовых / этнических групп.
Устойчивость бактерий к ультразвуковым волнам под давлением при несмертельных (манозонирование) и смертельных (манотермозонирование) температурах
На рисунке 3 показаны экспериментальные значения D обработки MS и MTS при различных температурах для четырех исследованных видов бактерий. Теоретический DRTC, соответствующий обработкам MTS (пунктирная линия), рассчитанный, как описано в разделе «Материалы и методы», и DRTC, соответствующий термообработкам, также были включены.Связь между экспериментальными и теоретическими значениями MTS проиллюстрирована для S. enteritidis , L. monocytogenes и A. hydrophila на фиг. 4A и для S. faecium на фиг. 4B. В диапазоне от 40 до 68 ° C экспериментальные значения S. faecium не соответствовали теоретическим значениям (рис. 4B). Следовательно, скорость инактивации S. faecium под действием MTS в этом диапазоне, по-видимому, является синергическим, а не аддитивным эффектом.Величина этого синергетического эффекта при 62 ° C проиллюстрирована на рис. 5, на котором показаны кривые выживаемости S. faecium , соответствующие теплу (62 ° C), MS (200 кПа, 117 мкм, 40 ° C), и обработка MTS (200 кПа, 117 мкм, 62 ° C), а также теоретическая кривая выживаемости (пунктирная линия), которая должна быть получена, если эффект MTS является аддитивным. Число выживших после лечения MTS было ниже (приблизительно 1 логарифм после 4 мин лечения), чем на теоретической кривой выживаемости.Скорость инактивации UW под давлением не зависела от температуры до достижения максимальной температуры (MS). Эта максимальная температура была разной для каждого исследованного вида бактерий (рис. 3). При значениях, превышающих эти максимальные значения, скорость инактивации резко возрастает с температурой (MTS). Подобное поведение наблюдалось у Y. enterocolitica Raso et al. (13), которые предположили, что этот профиль был результатом добавления скорости инактивации тепла к скорости инактивации UW под давлением.Наши результаты, полученные с L. monocytogenes , S. enteritidis и A. hydrophila , подтвердили эту гипотезу (рис. 4A). Напротив, мы наблюдали расхождение между теоретическими значениями и экспериментальными значениями, полученными для S. faecium (рис. 4B). Как показано на рис. 3, экспериментальная скорость инактивации S. faecium под действием MTS была выше, чем рассчитанная теоретически при температуре от 50 до 68 ° C. Эти результаты показали, что в этом диапазоне температур показатель С.Инактивация faecium под действием MTS была результатом синергетического, а не аддитивного эффекта (рис. 5). Аналогичный синергетический эффект наблюдался также при инактивации MTS спор B. subtilis (14). Raso et al. (14) предположили, что этот синергетический эффект может быть связан с нарушением коры бактериальных спор, вызывая регидратацию протопластов и потерю термостойкости. Возможно, подобное повреждение пептидогликана клеточной стенки могло бы объяснить этот синергетический эффект на S.faecium .
Рис. 3.
Рис. 3. Влияние температуры на скорость инактивации под действием тепла (светлые символы) и ультрафиолетового излучения под давлением (117 мкм, 200 кПа) (закрытые символы) S. faecium (○, • ), L. monocytogenes (□, ■), S. enteritidis (▵, ▴) и A. hydrophila (, ⧫). Теоретические значения D (▪) были рассчитаны по уравнению D _MTS = (D _MS × D _T) / (D _MS + D _T).
Рис.4.
Рис. 4. Корреляция между экспериментальными и теоретическими значениями D _MTS, рассчитанными по уравнению D _MTS = (D _MS × D _T) / (D _MS + D _T) для L. monocytogenes (■), S. enteritidis () и A. hydrophila (⧫) (A) и для S. faecium (•) (B).
Рис. 5.
Рис. 5. Кривые выживаемости S. faecium при нагревании (62 ° C) (□), МС (40 ° C, 200 кПа, 117 мкм) (▵) и MTS (62 ° C, 200 кПа, 117 мкм) (•) обработки.Пунктирная линия представляет собой теоретическую кривую выживаемости, полученную по уравнению D _MTS = (D _MS × D _T) / (D _MS + D _T).
Калифорния теперь находится под давлением, чтобы предложить метод смертельной инъекции
САН-ФРАНЦИСКО —
Решение Верховного суда в понедельник, дающее зеленый свет применению препарата для казни, вызвало новую попытку в Калифорнии создать метод смертельной инъекции с одним лекарством для заключенных после самой большой смерти в Америке ряд.
Согласно юридическому урегулированию, достигнутому ранее в этом месяце, Gov.Администрация Джерри Брауна согласилась предложить новый метод смертельной инъекции через 120 дней после того, как Верховный суд принял решение об оспаривании смертельного инъекционного препарата, применяемого в Оклахоме.
Решение было принято в понедельник в постановлении 5-4, которое поддержало использование препарата, мидазолама. В постановлении повторяется, что казнь не обязательно должна быть безболезненной, и от заключенных требуются сложные методы определения доступных альтернатив, которые представляют меньший риск сильной боли.
Кент Шайдеггер, юридический директор Правового фонда уголовного правосудия, выступающего за смертную казнь, сказал, что решение, вынесенное в понедельник, затруднит для претендентов блокировку нового протокола Калифорнии, который должен выйти в конце октября.
«Будет очень, очень сложно — вероятно, невозможно — получить отсрочку для кого-либо» — запретить государству использовать новый метод, — сказал Шайдеггер. «Решение было домашним».
Администрация Брауна согласовала крайний срок после того, как группа Шайдеггера подала в суд от имени жертв преступлений. Постановления суда вынудили штат пересмотреть свои планы казней, и прошло более трех лет с тех пор, как Браун приказал тюремным властям создать протокол для одного препарата.
Тем не менее, даже с учетом нового крайнего срока остается много препятствий, прежде чем казни могут возобновиться в Калифорнии.
Закон штата требует обширного общественного обсуждения нового метода исполнения приговора, который может занять год.
Противники смертной казни также могут принять решение вернуться к голосованию с предложением заменить смертную казнь пожизненным без права досрочного освобождения. Избиратели едва ли не отказались от такой меры в 2012 году.
А производители наркотиков все больше затрудняют получение тюрьмами смертоносных препаратов для казни.
Шайдеггер и другие сторонники смертной казни выступают за казнь заключенных с помощью смертельной дозы пентобарбитала, препарата, который ветеринары используют для усыпления животных.
Хотя Оклахома жаловалась на то, что больше не может получать пентобарбитал, его могла сделать любая фармацевтическая аптека, сказала профессор юридической школы Фордхэмского университета Дебора В. Денно, которая изучает смертельные инъекции в течение двух десятилетий.
«Вы можете построить аптеку в своей тюрьме», — сказал Денно.
Решение Верховного суда может иметь непредвиденные последствия, сказала она. Она, например, задалась вопросом, что произойдет, если один из заключенных из Калифорнии предложит расстрел в качестве альтернативы смертной казни с применением одного наркотика.
«В некотором смысле это решение закрыло двери, но может открыть другие возможности, которых, возможно, и не ожидали», — сказала она.
Профессор права Калифорнийского университета в Беркли Элизабет Семел, которая возглавляет клинику смертной казни юридического факультета, которая представляет осужденных заключенных, заявила, что Калифорния представит новый метод казни в то время, когда существует «глубокая двойственность в отношении казней в этом штате».
«Мы очень близко подошли к отмене», — сказала она.
Любой, кто считает возобновление казней в Калифорнии, «должен также учитывать тот факт, что это означает, что мы собираемся казнить 750 человек» — приблизительное число приговоренных к смертной казни — «я не думаю, что у кого-то есть аппетит, » она сказала.
Хотя сторонники смертной казни приветствовали решение, вынесенное в понедельник, Семел сказал, что это дело подчеркивает глубокий раскол по вопросу о суде. Судьи Стивен Брейер и Рут Бадер Гинзбург предложили суду пересмотреть конституционность самой смертной казни с учетом изменившихся обстоятельств и новых доказательств.
В инакомыслии, к которому присоединился Гинзбург, Брейер сослался на «все более продолжительные задержки» в несколько десятилетий между осуждением и казнью, промежутки времени, которые, по его словам, подрывают аргументы, что казни сдерживают преступления.У заключенных, приговоренных к смертной казни в Калифорнии, больше шансов умереть от старости, чем от иглы палача.
Дело, которое сейчас рассматривается Апелляционным судом 9-го округа США, определит, сделают ли многолетние задержки казней в Калифорнии неконституционной систему штата.
Окружной судья США Кормак Дж. Карни, назначенный бывшим президентом Джорджем Бушем, сослался на задержки и произвольный характер казней в постановлении, вынесенном прошлым летом, которое объявило смертную казнь в Калифорнии неконституционной.
Атти. Генерал Камала Д. Харрис подал апелляцию, и коллегия из трех судей заслушает аргументы в августе.
Ана Самора, юрист ACLU Северной Калифорнии, сказала, что противники смертной казни взвешивают все варианты, включая другую меру голосования. По ее словам, даже с учетом смертной казни у Калифорнии, вероятно, возникнут проблемы с ее исполнением.
«Государство потратило последние 10 лет на попытки создать юридически обоснованный протокол исполнения приговоров, но они неоднократно терпели неудачу», — сказала она.«Нет никаких доказательств того, что на этот раз все будет по-другому».
[email protected]
Twitter: @mauradolan
Исследователи призывают к клиническим испытаниям препарата от кровяного давления для предотвращения летальных осложнений COVID-19
Празозин, альфа-блокатор, одобренный Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США, который расслабляет кровеносные сосуды, может специально воздействовать на экстремальный воспалительный процесс, часто называемый синдромом цитокинового шторма (CSS), который непропорционально влияет на пожилых людей с сопутствующими заболеваниями и связан с болезнью. тяжесть и повышенный риск смерти при инфекции COVID-19.По их словам, его превентивное использование для борьбы с гипервоспалением легких и других органов, связанным с COVID-19, может снизить смертность среди наиболее уязвимых групп населения.
В отчете о своих результатах, опубликованном 30 апреля в Journal of Clinical Investigation , исследователи предупреждают, что, хотя, по их мнению, если его ввести достаточно рано после воздействия вируса, препарат может предотвратить некоторые смерти, он не будет работать у пациентов на поздних стадиях. болезни. Они также подчеркивают, что необходимы контролируемые клинические испытания этого нового применения празозина, прежде чем его можно будет безопасно рекомендовать.
По их словам, следователи опубликовали это письмо в надежде стимулировать быстрые усилия по проведению таких исследований.
В письме исследователи описали, как они работали в сотрудничестве с исследователями из отделений ревматологии и инфекционных заболеваний Джона Хопкинса и отделов неврологии и нейрохирургии, чтобы определить химические способы безопасного блокирования действия катехоламинов и цитокиновых реакций. Вместе катехоламины и цитокины усиливают воспалительный процесс, который приводит к тяжелым симптомам COVID-19, объясняет Четан Бетеговда, М.D., доктор философии, профессор нейрохирургии семей Дженнисона и Новака, который является старшим автором статьи.
«Цель нашей статьи — ознакомить биомедицинское сообщество с потенциалом этого подхода и стимулировать дополнительные фундаментальные и клинические исследования. Хотя мы воодушевлены этой идеей, мы подчеркиваем, что необходимо провести клиническое испытание, чтобы узнать, поможет ли это вмешательство пациентам с COVID, и именно на этом мы фокусируем все наше внимание », — говорит Бетеговда.
На мышиных моделях CSS они обнаружили, что празозин — обычно используемый для лечения артериального давления, увеличения предстательной железы и других состояний — блокирует катехоламины (гормоны, выделяемые надпочечниками, когда организм находится в состоянии стресса), снижает уровень цитокинов и увеличивает выживаемость. после воздействия агентов, вызывающих цитокиновый шторм, аналогичные тем, которые наблюдаются при COVID-19.
Согласно предварительным результатам ретроспективного клинического исследования, препараты, нацеленные на CSS, снижают риск смерти от других вирусных заболеваний до 55%.
Празозин принимается внутрь, стоит менее 25 долларов в месяц в Соединенных Штатах, и за последние два десятилетия его безопасно принимали миллионы людей. Это должно позволить ускорить клинические испытания на людях сразу после контакта с вирусом SARS-CoV-2, говорят исследователи.
«Все лекарства могут иметь непредвиденные побочные эффекты при использовании в новых ситуациях, поэтому крайне важно оценить эффективность и побочные эффекты этого лекарства в контролируемых клинических испытаниях, прежде чем его можно будет безопасно рекомендовать для общественного использования.Это особенно важно для таких препаратов, как празозин, которые уже продаются в аптеках », — говорит Бетеговда.
Максимилиан Кониг, доктор медицинских наук, научный сотрудник и ведущий автор отчета, говорит, что вакцина остается лучшей долгосрочной надеждой на предотвращение смерти от COVID-19, но отмечает, что в настоящее время во всем мире умирают сотни людей. день. «Празозин уже широко доступен, известен как безопасный и недорогой, а регуляторный путь его использования у лиц, подвергшихся воздействию вируса, прост, — говорит он.
Лечение CSS было одобрено Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов для изучения в клинических испытаниях на людях с COVID-19.
Помимо Беттегоуда и Кенига, в число других исследователей входят Майкл Пауэлл, Верена Стадтке, Рен-Юань Бай, Дэвид Томас, Николь Фишер, Сакибул Хук, Адхам Халафаллах, Эллисон Коенеке, Руохуан Сионг, Бретт Менш, Николас Пападопулос, Кеннет Кинзлер. Фогельштейн, Джошуа Фогельштейн, Сьюзан Этей и Шибин Чжоу.
В 2017 году Университет Джона Хопкинса подал заявку на патент на использование различных препаратов для предотвращения синдромов высвобождения цитокинов, изобретателями которых указаны Верена Стадтке, Рен-Юань Бай, Берт Фогельштейн, Кеннет Кинзлер и Шибин Чжоу.
DVIDS — Изображения — Монгольские солдаты, полиция репетируют нелетальные методы надавливания — NOLES 2013 [Изображение 4 из 7]
Gunnery Sgt. Герман Маркес демонстрирует, как сержант. Г. Уугантуя, медик Вооруженных сил Монголии, репетирует технику нажатия точки во время полевых учений семинара по нелетальному оружию в учебном полигоне «Пять холмов», Монголия, август.20. На протяжении всего учения NOLES инструкторы 3-го батальона правоохранительных органов 3-го экспедиционного корпуса морской пехоты проводили занятия по использованию нелетального оружия и тактики для контроля и вывода из строя подозреваемых, сводя к минимуму количество смертельных случаев и необратимых травм. Монголия, принимающая NOLES в третий раз за 12 лет, пригласила более 150 военнослужащих из Вооруженных сил Монголии и Генеральной полиции Монголии для участия в учениях. Маркес, инструктор по нелетальному оружию в 3-м батальоне LE, из Стоктона, Калифорния.
Дата съемки: 20.08.2013
Дата написания: 20.08.2013 20:32
Номер фотографии: 999559
ВИРИН: 130820-M-MG222-005
Разрешение: 5616×3744
Размер: 3.8 МБ
Расположение: УЧЕБНАЯ ЗОНА FIVE HILLS, MN
Родной город: Стоктон, Калифорния, США
Просмотры в сети: 118
Загрузки: 4
ВСЕОБЩЕЕ ДОСТОЯНИЕ
Эта работа, монгольские войска, полиция отрабатывает методы нелетального воздействия на точки — NOLES 2013 [Изображение 7 из 7], Ben Eberle, идентифицировано DVIDS, должна соответствовать ограничениям, указанным на https: // www.dvidshub.net/about/copyright.
ГАЛЕРЕЯ
ЕЩЕ НРАВИТСЯ НА ЭТО
УПРАВЛЯЕМЫЕ КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА
ТЕГИ
Флаг Актив
Монгольские военнослужащие, полиция отрабатывают нелетальные методы оказания давления — NOLES 2013
Трамп подписывает указ о полицейской деятельности на фоне растущего давления из-за смертельных инцидентов
ВАШИНГТОН — Президент Дональд Трамп подписал указ о полицейской деятельности во вторник на фоне растущего давления и общенациональных протестов по поводу смерти Джорджа Флойда, Бреонны Тейлор, Райшарда Брукса и других чернокожих в под стражей или в руках сотрудников правоохранительных органов.
«Сегодня мы следуем здравому смыслу и сражаемся, сражаемся за дело, за которое мы редко получаем возможность бороться», — сказал Трамп. «Мы должны найти общий язык».
Трамп сказал, что его распоряжение установит стандарты применения силы «столь же высокие и сильные, как есть на Земле», и что он будет уделять приоритетное внимание федеральным грантам полицейским управлениям, которые соответствуют этим стандартам.
Приказ будет использовать средства федерального гранта, чтобы побудить полицейские управления соблюдать ряд стандартов, включая запрет на удушающие захваты, за исключением случаев, когда жизнь офицера находится в опасности, сказал президент.Однако Верховный суд уже заявил, что в соответствии с Конституцией применение смертоносной силы разрешено только в том случае, если сотрудники полиции опасаются за свою безопасность или безопасность других лиц.
Распоряжением президента также будет создана национальная база данных жалоб на чрезмерное применение силы и будет поощряться участие специалистов в области психического здоровья при реагировании на ненасильственные дела, например, связанные с наркоманией, бездомностью и психическими заболеваниями.
Полное освещение смерти Джорджа Флойда и протестов по всей стране
В своем выступлении президент взорвал призывы некоторых активистов к освобождению полицейских управлений, заявив, что это противоречит поддержанию закона и порядка.
«Я категорически против радикальных и опасных усилий по защите, демонтажу и роспуску наших полицейских управлений, особенно сейчас, когда мы достигли самого низкого зарегистрированного уровня преступности в новейшей истории», — сказал Трамп. «Американцы знают правду: без полиции царит хаос. Без закона — анархия. А без безопасности — катастрофа».
Тем не менее, приказ Трампа далек от того, к чему призывали активисты и законодатели, включая призывы к полному запрету удушающих захватов, которые привели к смерти Флойда, и приказов о запрете ударов, которые использовались в инциденте, приведшем к к смертельной стрельбе Тейлора, среди прочего.
Лидер меньшинства в сенате Чак Шумер, штат Нью-Йорк, назвал приказ Трампа «скромным» действием, которое «не компенсирует его годы подстрекательской риторики и политики, призванной свести на нет прогресс, достигнутый в предыдущие годы».
«К сожалению, это распоряжение не обеспечит всесторонних значимых изменений и подотчетности в полицейских управлениях нашей страны, которых требуют американцы», — сказал Шумер в заявлении, требуя, чтобы Конгресс быстро принял закон, чтобы упростить привлечение полицейских к ответственности за злоупотреблений и что Трамп обязался подписать такую меру.
В сообщении из офиса спикера Палаты представителей Нэнси Пелоси говорится, что «дискреционный, необязательный» подход, изложенный в приказе Трампа, не предусматривает «основных шагов», таких как запрет на расовое профилирование и устранение юридических барьеров, препятствующих привлечению полиции к ответственности.
«Слабый административный приказ президента, к сожалению, серьезно не соответствует тому, что требуется для борьбы с эпидемией расовой несправедливости и жестокости полиции, убивающей сотни чернокожих американцев», — Пелоси, штат Калифорния., говорится в сообщении, добавляя, что меры Трампа «не хватает значимых, обязательных мер ответственности, чтобы положить конец проступкам».
«В этот момент национальных мучений мы должны настаивать на смелых изменениях, а не кротко сдаваться до минимума», — сказала она.
«Я никогда не могу представить вашу боль»
Трамп начал свое выступление во вторник, сказав, что незадолго до подписания «Розового сада» он встретился с семьями нескольких чернокожих, недавно убитых полицией, включая Ботама Джина, Антвона Роуза, Джемеля. Роберсон, Ататьяна Джефферсон, Майкл Дин, Дариус Тарвер и Кэмерон Лэмб.
Присутствовали также родственники Ахмауда Арбери, который был убит, когда он бежал в своем районе Джорджии, и Эверетта Палмера, умершего в тюрьме Пенсильвании при обстоятельствах, которые официально остаются неустановленными. Полиция Грузии подверглась критике за расследование смерти Арбери.
«Я никогда не могу представить вашу боль или глубину ваших страданий, но я могу пообещать бороться за справедливость для всего нашего народа», — сказал он.
Ли Мерритт, поверенный семьи Арбери, который присутствовал на встрече с Трампом во вторник утром, сказал, что указ президента «принимает постепенные меры», а не «радикальные изменения», которых ожидали семьи.
«Он не дал никаких указаний на то, что семьи в той комнате отражают проблему в Америке, что эта политика может действительно решить ее, и это возможно», — сказал Мерритт, обращаясь к репортерам на Капитолийском холме. «Так что это было моей заботой».
«Он изложил свое распоряжение, и я должен сказать, что он провалился», — сказал Мерритт. Мы не взяли из этого ничего такого, что, по нашему мнению, могло бы оживить движение ».
После встречи с Трампом семьи не остались на церемонии подписания.
Советник Белого дома Джа’Рон Смит объяснил отсутствие семей «обоюдным решением, потому что на самом деле речь шла не о возможности сфотографироваться».
На церемонию было приглашено около десятка сотрудников правоохранительных органов со всей страны, которые окружили президента, подписывающего указ, и позировали для фото.
Трамп, который изо всех сил пытался дать политический или политический ответ на национальное возмущение по поводу смерти Флойда, не обратил внимания на обеспокоенность в Розовом саду по поводу системного расизма или расизма в правоохранительных органах.
Вместо этого он снова сосредоточился на случаях насилия и разрушений, имевших место во время недавних протестов по всей стране, с призывом к реформе полиции и расовому правосудию, заявив, что «больше не будет грабежей или поджогов, и наказание будет очень суровым для тех, кто попасться.»
«Насилие и разрушение недопустимы», — сказал Трамп. «Мы не можем этого сделать. У мародеров нет причины, за которую они сражаются, только проблемы».
Однако большинство протестующих были мирными, и, помимо инцидентов с разрушениями и грабежами, на камеру были сняты многочисленные акты полицейского насилия против демонстрантов.
Действия Конгресса
Законодатели на Капитолийском холме работают над принятием закона об изменении полицейской практики.
В этом месяце демократы обнародовали масштабный законопроект о капитальном ремонте, который запрещает удушающие захваты и запреты на удушение. Сенатские республиканцы, которые обычно обращаются к Белому дому за подсказками относительно того, в каком направлении партия продвигается по политическим вопросам, также начали работать над своим собственным планом полицейской деятельности в этом месяце с Тимом Скоттом из Южной Каролины — единственным чернокожим республиканцем в Сенате — ведущие усилия.
Но лидеры республиканцев заявили в понедельник, что они не спешат принимать закон о реформе полиции до перерыва в четвертое июля, задержка, которую Скотт назвал «плохим решением».
Трамп заявил во вторник, что республиканский план может идти «рука об руку» с его указом.
«Я готов работать с Конгрессом над дополнительными мерами», — сказал он. «Надеюсь, они все соберутся вместе и предложат решение, выходящее за рамки того, что мы подписываем сегодня.«
ИСПРАВЛЕНИЕ (16 июня 2020 г., 17:30 по восточному времени): в предыдущей версии этой статьи имена двух мужчин были неточно включены в список людей, убитых полицией. Ахмауд Арбери не был убит полицией. Эверетт Палмер скончался в тюрьме округа Йорк, штат Пенсильвания, в 2018 году. Канцелярия коронера определила причину смерти как «осложнения после возбужденного состояния, связанного с отравлением метамфетамином, во время физического сдерживания», но манера поведения Палмера смерть не была установлена, и сотрудникам полиции не были предъявлены обвинения.