Онлайн тест на зпр: Онлайн-тест на аутизм у детей от 16 до 30 месяцев

Содержание

Онлайн-тест на аутизм у детей от 16 до 30 месяцев

Если вы указываете пальцем на что-то в другом конце комнаты, ваш ребенок на это смотрит?

Например: Если вы указываете пальцем на игрушку или животное, ребенок посмотрит на игрушку или животное.

Да Нет

Вы когда-нибудь предполагали, что ваш ребенок может быть глухим?

Да Нет

Ваш ребенок играет в воображаемые или сюжетно-ролевые игры?

Например: Ребенок притворяется, что пьет из пустой чашки, делает вид, что говорит по телефону, понарошку кормит куклу или плюшевую игрушку.

Да Нет

Ребенку нравится забираться на различные предметы?

Например: Ребенок любит залезать на мебель, на оборудование детской площадки.

Да Нет

Ваш ребенок делает необычные движения пальцами перед глазами?

Например: Ребенок перебирает пальцами около глаз.

Да Нет

Ребенок указывает пальцем, чтобы что-то попросить или получить помощь?

Например: Ребенок указывает пальцем на лакомство или игрушку, до которой не может дотянуться.

Да Нет

Ребенок указывает пальцем, чтобы обратить внимание на что-то интересное?

Например: Ребенок указывает пальцем на самолет в небе или на большой грузовик на дороге.

Да Нет

Ребенок интересуется другими детьми?

Например: Ребенок наблюдает за другими детьми, улыбается им, идет к ним.

Да Нет

Ребенок приносит предметы и поднимает их, чтобы показать вам?

Например: Ребенок показывает вам цветок, плюшевую игрушку или машинку.

Да Нет

Ребенок отзывается на свое имя?

Например: Он или она смотрит на вас, говорит или лепечет, прекращает то, что сейчас делает, когда вы зовете его или ее по имени.

Да Нет

Когда вы улыбаетесь ребенку, он или она улыбается в ответ?

Да Нет

Ребенка расстраивают обычные звуки?

Например: Ребенок начинает кричать или плакать от таких звуков, как шум пылесоса или громкая музыка.

Да Нет

Ребенок ходит?

Да Нет

Ребенок смотрит вам в глаза, когда вы говорите с ним, играете или одеваете?

Да Нет

Ребенок пытается копировать то, что вы делаете?

Например: Машет рукой в ответ, когда вы прощаетесь, хлопает в ладоши, издает смешные звуки.

Да Нет

Если вы обернетесь и посмотрите на что-нибудь, ваш ребенок обернется, чтобы увидеть, на что вы смотрите?

Да Нет

Ребенок старается сделать так, чтобы вы посмотрели на него?

Например: Ребенок смотрит на вас, ожидая похвалу, или говорит «гляди» или «посмотри на меня»

Да Нет

Ребенок понимает то, что вы говорите ему или ей?

Например: Если вы не будете ничего показывать руками, ребенок поймет такие фразы как «положи книжку на стул» или «принеси мне одеяло»

Да Нет

Когда случается что-то необычное, ребенок смотрит на ваше лицо, чтобы понять, как вы к этому относитесь?

Например: Если ребенок слышит странный или непривычный звук или видит новую игрушку, он или она смотрит на ваше лицо.

Да Нет

Вашему ребенку нравятся подвижные занятия?

Например: Когда ребенок подпрыгивает у вас на коленях или когда его раскачивают.

Да Нет

Аутизм или задержка речевого/психического развития: как понять?

04.11.18

Поведенческий аналитик и мама сына с аутизмом о том, на что нужно обратить внимание, если у ребенка есть задержка речи

У многих детей младшего дошкольного возраста бывает задержка речи. В некоторых случаях задержка речевого развития – это признак чего-то большего, в том числе, аутизма. Для родителей вопрос о том, что означает задержка речи у их ребенка, может быть крайне сложным и болезненным, особенно когда они пытаются попасть к специалисту в области аутизма, найти которого до сих пор очень сложно. Я знаю об этом по своему собственному опыту. В этой статье я хочу кратко описать, на что важно обратить внимание в этот период неопределенности. Также я хочу подчеркнуть, что могут сделать родители, независимо от того, аутизм ли это или «просто» задержка речевого (психического) развития.

Как и в случае многих других детей с аутизмом, сначала у моего сына Лукаса была просто задержка речевого развития. В два года он посещал обычный детский сад, он не плакал и редко капризничал. Раз в неделю он посещал логопеда, и первоначально логопед был настроен оптимистично – мне говорили, что речь появится, и все будет хорошо.

Хотя по профессии я была медсестрой, я не знала о типичных этапах психического развития, и я даже никогда не слышала про ранние признаки аутизма. В свою защиту скажу, что это были 1990-е годы, до появления Google или Фейсбука, а официальный уровень аутизма среди детей в США составлял 1 случай на 500, а не 1 на 50, как сейчас.

За один день до того, как Лукасу исполнилось три года, у него диагностировали аутизм. В тот момент я поставила для себя цель – я узнаю все, что могу, про ранние признаки аутизма, и я буду обучать им педиатров в нашем штате Пенсильвания. Я смогла сделать это благодаря гранту на раннее выявление аутизма от организации «Первые признаки». Я не могу диагностировать аутизм, но как медсестра, а теперь и как поведенческий аналитик с большим опытом работы в области аутизма, я всегда стараюсь обращать внимания на первые возможные признаки аутизма у ребенка. Например, если в 18 месяцев или в два года ребенок говорит слишком мало или вообще не говорит.

Ниже я перечисляю те факторы, на которые я всегда обращаю внимание. Если у вашего ребенка есть эти ранние признаки аутизма, пожалуйста, не надо паниковать. Независимо от того, подтвердится диагноз «аутизм» или нет, уже сейчас вы можете начать действовать, чтобы помочь вашему ребенку.

На какие признаки нужно обратить внимание при задержке речи у детей

Указательный жест, чтобы что-то попросить или привлечь внимание

В первую очередь, если речь идет про ребенка в возрасте от 18 до 24 месяцев, я проверяю, есть ли у него указательный жест. Раньше я не понимала, какую огромную роль играет указательный жест в психическом развитии ребенка. К 18 месяцам, в крайнем случае, к двум годам, ребенок должен уметь привлекать ваше внимание к чему-то с помощью указательного жеста. И речь идет не о том, чтобы ребенок показывал на что-то раз в месяц, он должен делать это постоянно. Ребенок должен указывать на те предметы, которые он хочет, например, на пачку сока или на игрушку. Он также должен указывать на что-то, чтобы привлечь ваше внимание – это то, что мы называем разделенное внимание, указывать с целью что-то вам показать. Например, ребенок указывает на самолет в небе, чтобы вы тоже на него посмотрели. Даже если он пока не может сказать «самолет», но он может показать на него пальцем и сказать вам «о, о!» – это очень хороший знак. Один из основных «тревожных звоночков» в отношении аутизма – отсутствие указательного жеста.

Понимание речи

Помимо указательного жеста, я проверяю, в какой степени ребенок понимает речь других людей, даже если он сам совсем не говорит. Когда моему сыну было два года и шесть месяцев, я пригласила к нам домой фотографа. Я помню, что тогда, в 1990-х годах, фотограф отдал Лукасу упаковку для пленки и сказал: «Держи малыш, выброси это». Лукас явно не понимал, что он вообще говорит. Тот фотограф удивленно посмотрел на него, словно хотел сказать «ты же уже достаточно большой». Тогда я не знала, в какой степени он должен понимать речь в этом возрасте, и я не придала этому значения. Сейчас я осознаю, что тогда Лукас совсем не понимал чужую речь. Это была не просто задержка экспрессивной речи, но и задержка рецептивной речи.

Я хочу подчеркнуть, что задержка рецептивной речи сама по себе не обязательно говорит об аутизме. У ребенка с такой задержкой может и не быть аутизма. Но в случае Лукаса, и в случае многих других детей, аутизм проявлялся в тяжелой задержке как экспрессивной, так и рецептивной речи.

Навыки игры

Помимо указательного жеста и понимания речи, я всегда обращаю внимание на то, как ребенок играет. Ребенок играет с разными игрушками, с более чем одной игрушкой? Или он полностью сосредоточен на каком-то одном предмете, например, хочет все время носить его с собой? Когда он играет, он выполняет одно и то же действие снова и снова, например, раскладывает кубики? Не пару минут, пока вы заняты чем-то своим, а час за часом, когда кажется, что ребенок вполне доволен повторением этого действия и отсутствием речи? Например, ребенок может часами раскладывать предметы в ряд или вращать что-нибудь. Такие виды поведения – возможные признаки аутизма.

Повторение чужих действий

Наконец, в 18-24 месяца для ребенка естественно повторять за окружающими их действия, например, помахать вам «пока-пока», когда вы прощаетесь, или запустить самолетик, если вы это сделали. Отсутствие имитации ваших действий может быть потенциальным признаком аутизма.

Таким образом, само по себе отсутствие речи еще не говорит об аутизме. Важно принять во внимание то, как ребенок играет, умеет ли он имитировать чужие действия, понимает ли он язык, пытается ли он общаться с помощью жестов. Если он никак не имитирует других людей во время игры, и если он не понимает чужую речь, это может быть больше, чем просто задержка речи.

Также смотрите: Онлайн-тест M-CHAT-R на ранние признаки аутизма, Пособие для родителей о симптомах аутизма.

Что могут сделать родители при задержке речи у ребенка

Я работала с сотнями, если не с тысячами детей как поведенческий аналитик, и я поняла, что неважно, аутизм это или задержка речевого развития – методы прикладного анализа поведения (ПАП) помогут ребенку улучшить речь и уменьшить проблемы поведения. Я также работала с маленькими детьми, у которых удалось предотвратить диагноз «аутизм», так как благодаря интенсивной поведенческой терапии они смогли быстро «подтянуться» и сравняться со сверстниками.

Так что я рекомендую три шага, если у вашего ребенка есть задержка речи и возможные признаки аутизма. Возможно, вы сейчас ждете назначенного визита к врачу, пытаетесь «выбить» помощь или ищете специалиста, чтобы узнать другое мнение о диагнозе. В любом случае, вы можете составить конкретный план действий на основе этих трех шагов.

1. Узнайте как можно больше про типичные этапы развития и постарайтесь сравнить их с развитием вашего ребенка. Существуют очень подробные описания и таблицы о том, какие навыки должны быть у ребенка в том или ином возрасте. Так что если вашему ребенку 4 месяца, 8 месяцев, 18 месяцев или два года, вы можете определить, есть ли у ребенка отставания в физическом, познавательном и языковом развитии. Например, когда у ребенка должен появиться указательный жест, когда он должен начать говорить фразами из двух слов, когда он должен есть самостоятельно. Очень важно обращать внимание не только на развитие речи – обратите внимание на навыки самообслуживания. Например, ребенок может самостоятельно есть ложкой, пить из открытой чашки? Может ли он самостоятельно успокоиться, или у него часто бывают истерики и другое проблемное поведение, потому что он не понимает мир вокруг себя? Такие описания – это просто ориентиры, это не значит, что все без исключения двухлетние дети обязаны это уметь. Но если вы видите, что у вашего ребенка не появилось практически никаких навыков, которые обычно формируются в два года, но он может все, что могут дети в 18 месяцев – это значит, что задержка есть, но она не очень сильная. Такое сравнение также поможет вам определить, над какими навыками ребенка нужно работать, и с каким запросом обращаться к специалистам.

2. В любом случае, если у ребенка есть задержка по сравнению с типичными этапами развития, вам нужно обратиться к врачу. В возрасте между 2 и 3 годами у нашего сына не было общих обязательных обследований, мы с мужем беспокоились о его развитии, но даже не думали о том, чтобы обращаться к врачу. Лучше всего сразу ищите специалиста, который может провести процесс диагностики, и с которым можно обсудить возможную помощь. Во время беседы с врачом, опишите все, что вас беспокоит, перечислите все задержки, которые вы обнаружили у вашего ребенка, а если ребенок посещает детский сад, то заранее поговорите с воспитателями – возможно, есть что-то что беспокоит их, но вы об этом не знаете. Если вам сложно понять, как пройти диагностику в вашем регионе, попробуйте связаться с местной организацией родителей детей с аутизмом или просто найти родителей детей с аутизмом и поговорить с ними.

3. Постарайтесь узнать как можно больше о прикладном анализе поведения (ПАП). Пока ребенок еще маленький, даже если у него диагностирована тяжелая форма аутизма, интенсивная терапия на основе ПАП может оказать огромную помощь и будет способствовать тому, чтобы ребенок вел нормальную жизнь в будущем. Даже если окажется, что это просто задержка речевого развития, терапия на основе ПАП ребенку не повредит – она лишь поможет ему быстрее освоить речевые навыки. Самый лучший подход для родителей – самостоятельно и активно обучаться стратегиям на основе ПАП и сразу же начать применять их со своим ребенком дома. ПАП применяется для детей с разными расстройствами и задержками развития, и он помогает развивать социальные навыки и речь.

Также смотрите: «Десять полезных книг для родителей детей с аутизмом».

Подводя итоги: если у вашего ребенка или ребенка, которого вы знаете, есть задержка речи, и вы подозреваете, что это может быть аутизм: «погуглите» этапы типичного развития ребенка; поговорите с воспитателями, врачами, другими родителями и обратитесь за диагностикой, будьте настойчивы и обращайтесь за помощью как можно раньше; узнайте как можно больше про методики ПАП и о том, как они могут помочь вашему ребенку.

Надеемся, информация на нашем сайте окажется полезной или интересной для вас. Вы можете поддержать людей с аутизмом в России и внести свой вклад в работу Фонда, нажав на кнопку «Помочь».

CHAT-R — тест на первые признаки аутизма у ребенка

1.	Если Вы показываете на что-то на другом конце комнаты, Ваш ребёнок смотрит на это? (Пример: если Вы показываете на игрушку или животное, ребёнок смотрит на игрушку или животное?)	Да Нет
2.	Вы когда-либо предполагали, что Ваш ребёнок может быть глухим?	Да Нет
3.	Ваш ребёнок играет в воображаемые или сюжетно-ролевые игры? (Пример: притворяется, что пьёт из пустой чашки, изображает, что говорит по телефону, понарошку кормит куклу или плюшевую игрушку?)	Да Нет
4.	Вашему ребёнку нравится забираться на предметы? (Пример: мебель, строения на игровой площадке, лестницы)	Да Нет
5.	Ваш ребёнок делает необычные движения пальцами перед его/eё глазами? (Пример: Ваш ребёнок шевелит его/eё пальцами около его/её глаз?)	Да Нет
6.	Ваш ребёнок указывает пальцем, чтобы попросить что-то или получить помощь? (Пример: указывает пальцем на лакомство или игрушку, до которой не может дотянуться)	Да Нет
7.	Ваш ребёнок указывает пальцем на что-то интересное, чтобы обратить на это Ваше внимание? (Пример: указывает пальцем на самолёт в небе или на большой грузовик на дороге)	Да Нет
8.	Ваш ребёнок интересуется другими детьми? (Пример: Ваш ребёнок наблюдает за другими детьми, улыбается им, идёт к ним?)	Да Нет
9.	Ваш ребёнок показывает Вам предметы, принося их Вам или держа их около Вас, просто чтобы поделиться, а не попросить помощь? (Пример: показывает Вам цветок, мягкую игрушку или игрушечный грузовик)	Да Нет
10.	Ваш ребёнок отзывается, когда Вы зовёте его/её по имени? (Пример: ребёнок оглядывается на Вас, говорит или лепечет, прекращает то, что он/она делает, когда Вы зовёте его/её по имени?)	Да Нет
11.	Когда Вы улыбаетесь Вашему ребёнку, он/она улыбается Вам в ответ?	Да Нет
12.	Ваш ребёнок расстраивается от бытовых звуков? (Пример: Ваш ребёнок кричит или плачет от таких звуков как шум пылесоса или громкая музыка?)	Да Нет
13.	Ваш ребёнок умеет ходить?	Да Нет
14.	Ваш ребёнок смотрит Вам в глаза, когда Вы говорите с ним/ней, играете с ним/ней или одеваете его/её?	Да Нет
15.	Ваш ребёнок пытается копировать то, что Вы делаете? (Пример: машет рукой при прощании, хлопает в ладоши, издаёт смешные звуки Вам в ответ)	Да Нет
16.	Если Вы оборачиваетесь, чтобы на что-то взглянуть, то Ваш ребёнок оглядывается вокруг, чтобы увидеть то, на что Вы смотрите?	Да Нет
17.	Ваш ребёнок пытается обратить на себя Ваш взгляд? (Пример: Ваш ребёнок смотрит на Вас, ожидая похвалу, или говорит «смотри», или «посмотри на меня»)	Да Нет
18.	Ваш ребёнок понимает, когда Вы говорите ему/ей что-то сделать? (Пример: если Вы не сделаете указательных движений, то ребёнок сможет понять «положи книгу на стул» или «принеси мне одеяло»?)	Да Нет
19.	Если происходит что-то необычное, то ребёнок смотрит на Ваше лицо, чтобы понять, как Вы к этому относитесь? (Пример: если он/она услышит странный или забавный звук или увидит новую игрушку, то он/она посмотрит на Ваше лицо?)	Да Нет
20.	Вашему ребёнку нравится двигательная активность? (Пример: когда кружат или подбрасывают на коленях)	Да Нет

Тест на аутизм (16-30 месяцев) — РОО помощи детям с РАС «Контакт»

1. Если Вы показываете на что-то на другом конце комнаты, Ваш ребёнок смотрит на это? (Пример: если Вы показываете на игрушку или животное, ребёнок смотрит на игрушку или животное?)	ДаНет
2. Вы когда-либо предполагали, что Ваш ребёнок может быть глухим?	ДаНет
3. Ваш ребёнок играет в воображаемые или сюжетно-ролевые игры? (Пример: притворяется, что пьёт из пустой чашки, изображает, что говорит по телефону, понарошку кормит куклу или плюшевую игрушку?)	ДаНет
4. Вашему ребёнку нравится забираться на предметы? (Пример: мебель, строения на игровой площадке, лестницы)	ДаНет
5. Ваш ребёнок делает необычные движения пальцами перед его/eё глазами? (Пример: Ваш ребёнок шевелит его/eё пальцами около его/её глаз?)	ДаНет
6. Ваш ребёнок указывает пальцем, чтобы попросить что-то или получить помощь? (Пример: указывает пальцем на лакомство или игрушку, до которой не может дотянуться)	ДаНет
7. Ваш ребёнок указывает пальцем на что-то интересное, чтобы обратить на это Ваше внимание? (Пример: указывает пальцем на самолёт в небе или на большой грузовик на дороге)	ДаНет
8. Ваш ребёнок интересуется другими детьми? (Пример: Ваш ребёнок наблюдает за другими детьми, улыбается им, идёт к ним?)	ДаНет
9. Ваш ребёнок показывает Вам предметы, принося их Вам или держа их около Вас, просто чтобы поделиться, а не попросить помощь? (Пример: показывает Вам цветок, мягкую игрушку или игрушечный грузовик)	ДаНет
10. Ваш ребёнок отзывается, когда Вы зовёте его/её по имени? (Пример: ребёнок оглядывается на Вас, говорит или лепечет, прекращает то, что он/она делает, когда Вы зовёте его/её по имени?)	ДаНет
11. Когда Вы улыбаетесь Вашему ребёнку, он/она улыбается Вам в ответ?	ДаНет
12. Ваш ребёнок расстраивается от бытовых звуков? (Пример: Ваш ребёнок кричит или плачет от таких звуков как шум пылесоса или громкая музыка?)	ДаНет
13. Ваш ребёнок умеет ходить?	ДаНет
14. Ваш ребёнок смотрит Вам в глаза, когда Вы говорите с ним/ней, играете с ним/ней или одеваете его/её?	ДаНет
15. Ваш ребёнок пытается копировать то, что Вы делаете? (Пример: машет рукой при прощании, хлопает в ладоши, издаёт смешные звуки Вам в ответ)	ДаНет
16. Если Вы оборачиваетесь, чтобы на что-то взглянуть, то Ваш ребёнок оглядывается вокруг, чтобы увидеть то, на что Вы смотрите?	ДаНет
17. Ваш ребёнок пытается обратить на себя Ваш взгляд? (Пример: Ваш ребёнок смотрит на Вас, ожидая похвалу, или говорит «смотри», или «посмотри на меня»)	ДаНет
18. Ваш ребёнок понимает, когда Вы говорите ему/ей что-то сделать? (Пример: если Вы не сделаете указательных движений, то ребёнок сможет понять «положи книгу на стул» или «принеси мне одеяло»?)	ДаНет
19. Если происходит что-то необычное, то ребёнок смотрит на Ваше лицо, чтобы понять, как Вы к этому относитесь? (Пример: если он/она услышит странный или забавный звук или увидит новую игрушку, то он/она посмотрит на Ваше лицо?)	ДаНет
20. Вашему ребёнку нравится двигательная активность? (Пример: когда кружат или подбрасывают на коленях)	ДаНет

Тест и курс ЗПР | Академия вашего образования

Тест «Психология детей с задержкой психического развития»

Позволяет проверить уровень знаний в изучении детей с ЗПР различными методами: анализировать историю развития ребенка, наблюдать и анализировать поведение ребенка, его игру, продуктивную деятельность. Для автогенерации бесплатного сертификата вам необходимо набрать не менее 50% правильных вариантов ответов и пройти регистрацию на этой платформе. Благодарим за сотрудничество с институтом АНО ДПО ИДПК ГО!

1. Для детей с задержкой психического развития создаётся специальное (коррекционное) образовательное учреждение:

V вида

VIII вида

VII вида

2. К компонентам личностной реабилитации не относится:

воспитание чувства собственного достоинства

формирование адекватных форм социального поведения

лечение недостатков, последствий дефекта

преодоление чувства малоценности, маргинальности

3. К первичным нарушениям при задержке психического развития относятся:

эмоциональная незрелость

микросоциальная и педагогическая запущенность

нейродинамические расстройства (лабильность и инертность психических процессов)

мозаичные повреждения базальных мозговых систем

заниженный уровень притязаний и связанные с ним гиперкомпенсаторные установки

4. Основными направлениями первичной профилактики пограничной интеллектуальной недостаточности следует считать все перечисленные, кроме:

санации микросоциальных условий

устранения экзогенных вредностей

санитарно-гигиенического и психолого-педагогического просвещения будущих родителей

медико-генетического консультирования

5. Наиболее яркие проявления аутизма в раннем возрасте характеризуются:

выраженными потребностями в контакте с другими людьми

отсутствием фиксации взгляда на другом человеке

6. Основное отличие пограничной интеллектуальной недостаточности от умственной отсталости состоит:

в более высокой работоспособности

в наличии абстрактного мышления

в более гармоничном развитии сферы мотиваций

в лучшем развитии памяти

7. Направленность на устранение причин и источников отклонений в психическом развитии ребенка соответствует:

принципу коррекции «сверху вниз»

деятельностному принципу

принципу системности развития

принципу «нормативности» развития

8. Сомато-вегетативный уровень нервно-психического реагирования по В.В. Ковалеву относится к возрасту:

0-3 года

4-10 лет

12-16 лет

7-12 лет

9. Основной элемент патогенеза парциальных задержек психического развития:

нарушение высших корковых функций

отсутствие абстрактного мышления

нарушение механизмов волевого контроля над деятельностью

10. Ведущее нарушение при гармоническом инфантилизме:

низкая потребность в общении с окружающими

личностная незрелость

психоорганический синдром

нарушение высших корковых функций

11. Тотальность поражения с вовлечением как частных функций, так и общих регуляторных систем присуща:

искаженному психическому развитию

поврежденному психическому развитию

дефицитарному психическому развитию

психическому недоразвитию

12. Понятию задержки психического развития соответствует отставание:

в интеллектуальном развитии

от возрастной нормы темпа речевого развития

от нормы по уровню интеллектуального или личностного развития, промежуточное

от нормы по уровню развития школьных навыков

13. К основным трудностям, мешающим психическому развитию аутичного ребенка, могут быть отнесены следующие:

нарушения сенсорики

дефицит психической активности

все ответы верны

нарушение речи

14. В психологический анализ аномального развития ребенка входит:

квалификация вторичного дефекта

все ответы верны

квалификация первичного дефекта

описание сохранных психических функций

анализ социальной ситуации развития ребенка

15. Для детей с задержкой психического развития характерны:

предельное «экстремальное» одиночество и стереотипность в поведении

двигательные расстройства

задержка речевого развития и нарушение коммуникативной функции речи

незрелость эмоционально-волевой сферы и недоразвитие познавательнойдеятельности

16. Замедление темпа развития психики ребенка, которое выражается в недостаточности общего запаса знаний, незрелости мышления, преобладании игровых интересов, быстрой пресыщаемости в интеллектуальной деятельности:

деменция

умственная отсталость

шизофрения

задержка психического развития

17. Утверждение о том, что все психические явления необходимо рассматривать в динамическом плане, то есть в процессе развития и становления, соответствует такому принципу как:

генетический или принцип развития

речевого

психического

принцип детерминизма

физического

принцип единства психики и деятельности

18. Изучение закономерностей аномалий развития психики сосредоточено в следующих областях знаний:

детская психиатрия

все ответы верны

детская патопсихология

дефектология

19. Для органической деменции присущи признаки:

парциальности нарушений психических функций

недоразвития психических функций

иерархичности нарушений психических функций

тотальности нарушений психических функций

20. Невротические расстройства (неуверенность в себе, страхи, ипохондричность, повышенная пугливость) характерны для детей с нарушениями:

зрения и слуха

зрения, слуха, двигательной сферы

зрения

двигательной сферы

Почему у детей бывает ЗПР, можно ли вылечить?

Разные причины влияют на речевое развитие детей с зпр. Проблема решаемая и нестрашная, если обнаружить вовремя и начать лечение. Ответственные за своевременную помощь детям – родители. Заметив признаки недуга, они обязаны пройти с малышом полноценное обследование, выбрать специалистов с опытом. При попустительстве и затягивании с лечением, по мере роста ребенка, отставание в психике, освоение учебных материалов в школе будут проблемой. Трудным будет и контакт со сверстниками.

Статистика за 20 лет констатирует рост психоэмоционального отклонения детского развития в десятки раз. Задержка развития речи негативно сдерживает мышление, помогает развиться ЗПРР, а сопутствующие врожденные психические, неврологические патологии усугубляют речевую недоразвитость.

Диагностику ЗПР проводят пятилетним, и 20% обратившихся получают диагноз. Самый возраст активного общения с окружающими. Только пять – запоздалый срок обращения к специалистам за помощью. Вероятность излечения 6-летнего 0,2%. Лечение ЗПР у детей двух-трех лет – идеальный возраст.

Тест-советы родителям

Обнаружить недуг можно с младенчества:

Четырехмесячный младенец не откликается на «ути-пути» взрослых. Мало или совсем не улыбается.
Не лепечет в восемь-девять мес.
Годовалый произносит что-то, то очень тихо. Может совсем молчать
Полуторагодовалый. Не произносит простейшие «мама, дай и пр.». Их значения для него бессмысленные, не реагирует на просьбы.
Двухлетний. Малый словарный запас. Не запоминает новые.
В 2 г 6 мес. Словарный запас до двух десятков. Не составляет фразы, не знает понятий предметов, тела.
В три не выстроит предложение. Не воспринимает простые тексты. Невнятная скороговоркой речь с глотанием окончаний. Или, наоборот, заторможенная речь с растягиванием слов. Не в состоянии повторить дословно сказанное взрослыми.

К этим симптомам может добавиться повышенное слюноотделение, приоткрытый постоянно ротик. Обычно малыши гиперактивные, агрессивные, невнимательные, быстро устают. У них плохая память, воображение близко к нолю, слабо проявляют эмоциональные стороны. Органические изменения обнаруживаются на ЭЭГ, ВП. Будут выявлены сбои левого полушария.

Получается замкнутый круг. Трудности с речью, дите отстает психически и умственно. А получают информацию в основном из диалогов. Поэтому в 3-6 лет они такие «почемучки». Задумайтесь, родители, начните лечение раньше.

Что приводит к недугу?

Из-за отклонения развития головного мозга и ЦНС.

Во время беременности мать болела. Внутриутробное нарушение развития из-за инфекций, отравления, травмы.
Внутриутробная гипоксия.
Стремительные или осложненные роды, травмирование новорожденного.
В младенческом возрасте перенес тяжелые инфекционные заболевания, давшие осложнение на мозг, получил травмы.
Заболевания генетического плана или хромосомные, нарушающие структуру мозга.
Воспитание под сильной опекой или брошен «на ветер», жестокое обращение. Воспитание в асоциальной семье.
Перенес страшную травму в психологическом аспекте.

Кроме этого, есть ряд заболеваний, вызывающих психоречевую задержку. Среди них на втором месте эпилепсия, а на первом аномалия и нарушение обмена в ЦНС. Важно лечить и ЗПРР, и первопричину.

Элементы аутизма при ЗПРР

Нарушение функциональности ЦНС, перенесенные инфекционные осложненные болезни бьют не только по речи, но и развитию психики малыша. В 5% случаев диагностируются аутичные признаки:

Не контактирует эмоционально с окружающими, не делает попыток общения с родителями. Почти не улыбается.
Агрессию часто направляет на себя. Приступы агрессии регулярные.
Однотонное повторяющее поведение-стереотип.
Игрушками пользуется по-своему.
Избегает сверстников.

В 50% не понимает обращения к себе. Таких деток лечат несколько специалистов.

Современные методики лечения ЗПРР

Комплексное лечение с участием родителей, терапевта, невролога, психолога, логопеда, рефлексотерапевта. При небольшой степени отставания, раннем лечении шанс устранения проблемы до 100%.

Воздействием микромалыми электроимпульсами на биоактивные мозговые точки – микротоковая рефлексотерапия.

Импульсное восстановление функциональности ЦНС в поврежденных местах. Воздействие аппарата направляется участки мозга, отвечающие за речь. Особенно высокие результаты показывает при гидроцефалии. Назначается малышам с шести месяцев.

Малышами с 2 лет занимается дефектолог.

Развивает мелкую моторику, мышление. Ребятишки с четырех лет попадают к логопеду. Он выставит артикуляцию, в игровой форме покажет, как составить предложение, целый текст.

Логопедический массаж.

Это дополнительно, стимулируются лицевые и шейные мышцы.

Медикаментозная терапия.

Лекарства назначаются после консультации у невролога, невропатолога. По результатам ЭЭГ врач диагностирует патологии, составляет индивидуальное лечение.

Коррекция, как дополнение к лечению

Коррекционные занятия для детей с зпр не обязательны, но желательны. В первую очередь требуется участие детского психолога, если дите перенесло психическую травму, росло в неблагополучной среде.

Прекрасно, если у родителей есть возможность оплатить дельфинотерапию, иппотерапию. Посещать музыко и арттерапии. Это повышает психоэмоциональный фон, объединяет семью, появляется общий с отпрыском интерес. Попутно развивается речевая сигнатура.

Остеопатия дает неплохой результат. Мануальщик воздействует на активные точки, приводит к балансу функционирование ЦНС, обмена веществ. Благотворно влияет на уравновешивание психики.

Главное, чтобы папа с мамой приняли к сведению. Только один метод не вылечит, не устранит недуг. Только комплексно, только вместе с врачами и при активном участии родителей.

Задержка физического развития ребенка симптомы, лечение в Железнодорожном

22.03.2017

Под задержкой психического развития понимается темповое отставание развития психических механизмов, а также незрелость эмоционально-волевой деятельности детей, поддающиеся преодолению с помощью специализированного обучения и воспитания. Для детей с задержкой психического развития характерны: недостаточная степень развития памяти, моторики, мышления, речи, внимания, а также самоконтроля. Кроме того, отмечается примитивность и неустойчивость эмоций, плохая успеваемость в школе. Диагностику задержки психического развития необходимо проводить коллегиально комиссией, в которую входят, помимо медицинских специалистов, психологи и педагоги. Дети с установленной задержкой психического развития нуждаются наравне с медицинской помощью в специально организованном коррекционно-развивающем обучении.

Задержка психического развития является обратимым нарушением эмоционально-волевой, а также интеллектуальной сферы, которые сопровождаются определенными трудностями в процессе обучения. Около 15-16% детей имеют ту или иную степень задержки психического развития. Задержку психического развития чаще всего относят к психолого-педагогическим проблемам, но ее основу могут составлять и органические отклонения, в частности неврологические заболевания. Различные психические функции у детей развиваются неравномерно, поэтому часто диагноз невозможно установить детям до достижения 4-5 лет. На практике диагноз устанавливается в основном уже в школьном возрасте.

Причины задержки психического развития

В основе задержки психического развития могут лежать социально-психологические или биологические факторы. Биологические факторы приводят к нарушению формирования различных отделов головного мозга, что сопровождается частичными отклонениями психического созревания ребенка. Влияние могут оказывать факторы, воздействующие во время беременности (гипоксия плода, тяжелый токсикоз, гестоз, резус-конфликт, внутриутробная инфекция и т.д.), в родах и после рождения ребенка (внутричерепная травмами, ядерная желтуха новорожденных). В раннем детском периоде задержка психического развития может вызываться тяжелыми соматическими и инфекционными заболеваниями, черепно-мозговыми травмами.

К другой группе причин относятся средовые (социальные) факторы. При этом отсутствует органическое повреждение головного мозга. Причиной может быть как безнадзорность со стороны родителей, таки и чрезмерная опека, социальная депривация, авторитарное воспитание, недостаток контакта с взрослыми и сверстниками.

Задержку психического развития вторичного генеза нередко вызывают раннее нарушение зрения и слуха, дефекты речи из-за выраженной нехватки сенсорной информации и общения.

Виды задержки психического развития

Таким образом, группы детей, имеющие задержку психического развития, являются неоднородными. Существует несколько классификаций задержки психического развития. Рассмотрим этиопатогенетическую классификацию, выделяющую 4 клинических типа задержки психического развития.

ЗПР конституционального генеза обуславливается медленным созреванием центрально-нервной системы. Для нее характерен гармоничный физический и психический инфантилизм. Поведение и антропометрические данные детей не соответствуют возрасту. Они являются эмоционально лабильными, непосредственными, отмечается неспособность концентрировать внимание, нехватка памяти. В школьном возрасте у таких детей преобладают игровые, нежели учебные интересы.
ЗПР соматогенного генеза обуславливается продолжительными тяжелыми соматическими заболеваниями детей в раннем возрасте, которые неизбежно задерживают созревание и формирование центральной нервной системы. В анамнезе детей отмечаются хронические заболевания органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистой системы, почек и т.д. Как правило, дети в течение длительного времени находятся в больницах, изолированно от своих сверстников. ЗПР соматогенного генеза может проявиться в виде астенического синдрома, низкой работоспособности детей, уменьшением памяти, поверхностного внимания, гиперактивности либо заторможенности при переутомлении.
ЗПР психогенного генеза обуславливается негативными социальными условиями, в которых вынужден находиться ребенок (безнадзорность, жестокое обращение, гиперопека). Вследствие дефицита внимания, у ребенка может формироваться психическая неустойчивость, отставание в интеллектуальном плане, импульсивность. При чрезмерной опеке формируется безволие, безынициативность, отсутствие целеустремленности, эгоцентризм.
ЗПР церебрально-органического генеза встречается довольно часто. Она может быть обусловлена негрубым органическим повреждением головного мозга. Возможно поражение одной области или мозаичное поражение нескольких областей головного мозга, нарушающей одну или несколько психических функций. Задержку психического развития церебрально-органического генеза можно характеризовать, как несформированность эмоционально-волевой стороны и познавательной работы: отсутствует яркость и живость эмоций, выраженная внушаемость, бедность воображений, двигательная расторможенность и т.д.

Отличительные черты детей с задержкой психического развития

Нарушения интеллекта у детей с задержкой психического развития, характеризуются легким характером, но могут затрагивать все аспекты интеллектуальной деятельности: речь, восприятие, мышление, память, внимание.

Ребенок с задержкой психического развития имеет фрагментарное, неточное, замедленное восприятие. Некоторые анализаторы функционируют полноценно, но ребенок испытывает трудности при создании целостных образов окружающей среды. Зрительное восприятие является наиболее развитым, слуховое – менее, в связи с этим при разъяснении учебных дисциплин детям с задержкой психического развития необходимо использовать наглядные материалы.

Дети с задержкой психического развития имеют неустойчивое, поверхностное, кратковременное внимание. Ребенок отвлекается и переключает внимание под воздействием любых посторонних стимулов. Ситуации, которые связаны со сосредоточенностью, концентрацией внимания на чем-либо, могут вызвать затруднения. При переутомлении и повышенном напряжении возможно обнаружение признаков синдрома гиперактивности, а также дефицита внимания.

Память характеризуется мозаичностью запоминания информации, слабой избирательностью. Наглядно-образная память преобладает над вербальной. Характерна низкая мыслительная активность в процессе воспроизводства информации. Дети с задержкой психического развития имеют более сохранное наглядно-действенное мышление; большему нарушению подвергается образное мышление в связи с неточностью восприятия. Абстрактно-логического мышления нельзя достигнуть без помощи взрослых. Детям с задержкой психического развития характерны трудности с синтезом и анализом, сравниванием, обобщением; они не способны упорядочивать события, строить умозаключения, формулировать выводы. Кроме того, дети с задержкой психического развития имеют искаженную артикуляцию большинства звуков, повреждения слуховой дифференцировки, резкое ограничение словарного запаса.

Диагностика

Для диагностики задержки психического развития проводится комплексное обследование ребенка специальной комиссией, в которую входят детский психолог, логопед, детский невролог, дефектолог, психиатр, педиатр и, при необходимости, другие специалисты. Осуществляется сбор, изучение анамнеза, диагностическое обследование речи, изучение условий жизни, нейропсихологическое тестирование, анализ медицинских данных. С ребенком обязательно проводят беседу, исследуются интеллектуальные процессы и эмоционально-волевые качества.

При выявлении органической патологии необходимо обследование медицинскими специалистами, в первую очередь, детским неврологом и педиатром. При инструментальной диагностике может проводится инструментальная диагностика — ЭЭГ, МРТ головного мозга. Дифференциальную диагностику задержки психического развития проводят с аутизмом и олигофренией.

Коррекция

Для работы с детьми, страдающими ЗПР, необходим мультидисциплинарный подход, активное участие детских психологов, неврологов, педиатров, логопедов, психиатров, дефектологов. Коррекцию задержки психического развития следует начинать как можно раньше, желательно в дошкольном периоде.

Часто дети нуждаются в посещении специализированных детских дошкольных и общеобразовательных учреждений либо специальных групп и коррекционных классов. Необходимо дозировать учебный материал, опираться на наглядность, частое повторение материала, регулярную смену видов деятельности. Важно уделять внимание развитию различных познавательных навыков (мышления, внимания, восприятия, памяти), моторной, сенсорной и эмоциональной сферы, используя для этого игровую терапию, детскую арт-терапию. Коррекцию нарушений речевого аппарата проводит логопед.

При выявлении соматических заболеваний и органических повреждений головного мозга, массаж, физиотерапия, водолечение, ЛФК.

Профилактика

Дети с задержкой психического развития способны догнать своить сверстников. Они являются обучаемыми. При правильной организации коррекционной работы в их развитии наблюдается выраженная положительная динамика. Педагоги помогают им осваивать новые знания, навыки. Они могут также, как и их сверстники, поступать в ВУЗы, колледжи.

Для профилактики задержки психического развития ребенка необходимо с большой ответственностью отнестись к планированию беременности, избегать негативных воздействий на плод, заниматься профилактикой соматических и инфекционных болезней у ребенка в раннем возрасте, обеспечивать благоприятные условия их жизни. При отставании ребенка в психомоторном развитии необходимо незамедлительное обследование и начало коррекционной работы.

HALFORDS AUTOCENTRES QUIZZES ЗНАНИЯ ВОДИТЕЛЕЙ ВПЕРЕДИ ИЗМЕНЕНИЙ В ТЕСТИРОВАНИИ

В преддверии новых изменений в экзаменах по вождению 4 декабря Halfords Autocentres проверяет знания водителей, проверяя их пригодность к эксплуатации, независимо от того, новички они в дороге или более опытные: http: //www.halfordsautocentres. ru / advice / news / quiz-how-roadworthy-are-you

В ходе онлайн-теста было опрошено 50 000 автомобилистов и выяснилось, что только 17% годны к эксплуатации, а 83% набрали меньше баллов, чем успешный текущий тест по теории вождения.Водителей задавали вопросы по десяти вопросам, включая дорожное законодательство Великобритании, техническое обслуживание автомобилей, законы о вождении в нетрезвом виде и общие правила дорожного движения.

Водителям задается один вопрос: «Какова минимальная допустимая глубина протектора шин в Великобритании?»
Другой вопрос: «Вы записаны на ТО, но у вас треснуло лобовое стекло на уровне глаз пассажира. Какая из этих длин трещин не выдержит ТО? »

Если водители задают вопрос неправильно, викторина дает им ответ и предлагает советы для повышения уровня знаний.
Результаты показали, что удивительно 65% новых водителей не знали о новых штрафах за превышение скорости, в то время как вызывающие беспокойство 63% новых водителей не знают о влиянии мокрых поверхностей на тормозной путь.

Но это не все плохие новости, поскольку новые водители более сообразительны, когда дело доходит до знаний технологий: 74% знают, с какими наказаниями они столкнутся, если используют телефон во время вождения, а 71% могут расшифровать символы на приборной панели. .

Исследование также показывает, что опыт не всегда означает опыт: 73% автомобилистов, которые водят от 10 до 20 лет или более, не знают, что делает трещину на лобовом стекле незаконной, и удивительно 61% из той же группы не знают об этом. четыре неизношенные шины могут повлечь за собой штраф в размере до 10 000 фунтов стерлингов.

Тест также показал, что многие автомобилисты не знают точного лимита вождения в нетрезвом виде, при этом 43% полагают, что лимит такой же, как и в Шотландии.

Еще один неожиданный факт: 39% новых водителей считали законным использование смартфона для оплаты проезда на вынос, но использование смартфона, если двигатель вашего автомобиля все еще работает, может привести к значительному штрафу.

Райан Винс из Halfords Autocentres, который отвечал за викторину, говорит:

«Исследование привело к некоторым сенсационным результатам.Например, вызывает беспокойство то, что 62% водителей не знают максимального штрафа за превышение скорости, а 65% водителей не знают о правилах для изношенных шин, которые могут привести к их наложению крупного штрафа. Несмотря на то, что наш тест беззаботен, он помогает автомобилистам напомнить об основных принципах работы, независимо от того, новички они или опытные ».

Это лишь одна из серии инициатив, запущенных Halfords Group, направленных на помощь новым драйверам, поскольку новые тестовые изменения вступают в силу 4 ^-го декабря.

Чтобы отпраздновать новые изменения в экзаменах по вождению, сэкономить деньги водителям и напомнить им о безопасности транспортных средств, Halfords Autocentres предлагает бесплатную проверку безопасности: http://www.halfordsautocentres.com/car-care/free-safety-check

Halfords запускает специальное предложение по спутниковой навигации для молодых водителей.

Чтобы проверить свою пригодность к эксплуатации, зайдите на http://www.halfordsautocentres.com/advice/news/quiz-how-roadworthy-are-you

-ENDS-

За дополнительной информацией обращайтесь в Halfords @ z-pr.com или 020 7287 5006
Примечания редактора: Автоцентры Halfords How Roadworthy Quiz опросили 55 313 автомобилистов между 10 ^-м-17 ^-м ноября.
Все автомобилисты

83% британцев не заслуживают внимания и набрали меньше, чем успешный экзамен по теории (86%)
12% водителей не узнают символ противотуманной фары на приборной панели автомобиля
15% водителей не знают, что резьба разрешена для шин
55% водителей не подозревают о том, какое воздействие может оказать влажная поверхность на тормозной путь
62% водителей не знают о пределе содержания алкоголя в крови для водителей в Англии и Уэльсе
43% автомобилистов Великобритании считают, что ограничение на вождение в нетрезвом виде такое же, как в Шотландии.
29% считают, что есть во время вождения — это незаконно, но это не так, но автомобилистов могут привлечь к ответственности за неосторожное вождение.
62% автомобилистов не знают о повышении штрафов за превышение скорости
26% водителей считают, что максимальный штраф за превышение скорости составляет 25% от недельной заработной платы (это до 175%)
73% водителей не знают, что делает трещину на лобовом стекле незаконной
13% водителей не знают о новом законе, раскрывающем увеличение баллов за использование телефона во время вождения
61% водителей не знают, что четыре изношенные шины могут оштрафовать вас на сумму до 10 000 фунтов стерлингов
Шотландцы — самые опытные водители в Великобритании.

Новые драйверы

29% новых водителей не узнают символ противотуманной фары на приборной панели
63% новых водителей не знают о влиянии мокрых поверхностей на тормозной путь
69% новых водителей не знают о законном лимите вождения в нетрезвом виде
39% молодых водителей считают, что использование телефона для оплаты проезда на вынос через
65% новых водителей не знают о новых штрафах за превышение скорости в Великобритании
26% новых водителей не знают о наказаниях, с которыми они столкнутся, если будут пользоваться телефоном во время вождения.
65% новых водителей не знают, что за четыре изношенных покрышки можно оштрафовать до 10 000 фунтов стерлингов

Об автоцентрах Halfords: Автоцентры Halfords работают из 315 объектов по всей стране и предлагают автомобилистам высококачественные ТО, ремонт и обслуживание автомобилей по доступным ценам.

zpr.io ▷ Статистика веб-сайта и онлайн-инструменты

#
# ARIN Данные и услуги WHOIS регулируются Условиями использования
#, доступными по адресу: https://www.arin.net/whois_tou.html
#
# Если вы видите неточности в результатах, сообщите об этом по адресу
# https://www.arin.net/resources/whois_reporting/index.html
#
# Copyright 1997-2018, American Registry for Internet Numbers, Ltd.
#

ASNumber: 14618
ASName: AMAZON-AES
ASHandle: AS14618
RegDate: 2005-11-04
Обновлено: 2012-03-02
Ссылка: https: // rdap.arin.net/registry/autnum/14618

OrgName: Amazon.com, Inc.
OrgId: AMAZO-4
Адрес: Amazon Web Services, Inc.
Адрес: P.O. Box 81226
Город: Сиэтл
StateProv: WA
PostalCode: 98108-1226
Страна: US
RegDate: 2005-09-29
Обновлено: 2017-01-28
Комментарий: Подробнее об этой услуге см.
Комментарий: http : //ec2.amazonaws.com/
Ссылка: https://rdap.arin.net/registry/entity/AMAZO-4

OrgNOCHandle: AANO1-ARIN
OrgNOCName: Amazon AWS Network Operations
OrgNOCPhone: + 1-206 -266-4064
OrgNOCEmail: amzn-noc-contact @ amazon.com
OrgNOCRef: https://rdap.arin.net/registry/entity/AANO1-ARIN

OrgTechHandle: ANO24-ARIN
OrgTechName: Amazon EC2 Network Operations
OrgTechPhone: + 1-206-266-4064
OrgzTechEmail: [email protected]
OrgTechRef: https://rdap.arin.net/registry/entity/ANO24-ARIN

OrgAbuseHandle: AEA8-ARIN
OrgAbuseName: Amazon EC2 Abuse
OrgAbusePhone: + 1-206-266 -4064
OrgAbuseEmail: [email protected]
OrgAbuseRef: https://rdap.arin.net/registry/entity/AEA8-ARIN

RTechHandle: ANO24-ARIN
RTechName: Amazon EC2 Network Operations
RTechPhone: + 1- 206-266-4064
RTechEmail: amzn-noc-contact @ amazon.com
RTechRef: https://rdap.arin.net/registry/entity/ANO24-ARIN

#
# ARIN Данные и услуги WHOIS регулируются Условиями использования
#, доступными по адресу: https: //www.arin .net / whois_tou.html
#
# Если вы видите неточности в результатах, сообщите об этом по адресу
# https://www.arin.net/resources/whois_reporting/index.html
#
# Copyright 1997-2018, American ООО «Реестр Интернет-номеров»
№

Одношаговый иммунохроматографический тест-полоска с флуоресцентными микросферами с временным разрешением для количественного и одновременного обнаружения ДОН и ЗЕН

DOI: 10.1007 / s00216-021-03612-0. Онлайн до печати.

Принадлежности Расширять

Принадлежности

¹ Государственная ключевая лаборатория пищевых наук и технологий, Школа пищевых наук и технологий, Национальный инженерный исследовательский центр функционального питания, Синергетический инновационный центр безопасности пищевых продуктов и контроля качества, Университет Цзяннань, Уси, Цзянсу, 214122, Народная Республика Китая.
² Комплексный технологический центр таможни Чжанцзяган, Чжанцзяган, Цзянсу, 215600, Китайская Народная Республика.
³ Государственная ключевая лаборатория пищевых наук и технологий, Школа пищевых наук и технологий, Национальный инженерный исследовательский центр функционального питания, Синергетический инновационный центр безопасности пищевых продуктов и контроля качества, Университет Цзяннань, Уси, Цзянсу, 214122, Народная Республика Китай[email protected].

Элемент в буфере обмена

Jiadi Sun et al. Anal Bioanal Chem. 2021 .

Показать детали Показать варианты

Показать варианты

Формат АннотацияPubMedPMID

DOI: 10.1007 / s00216-021-03612-0. Онлайн до печати.

Принадлежности

¹ Государственная ключевая лаборатория пищевых наук и технологий, Школа пищевых наук и технологий, Национальный инженерный исследовательский центр функционального питания, Синергетический инновационный центр безопасности пищевых продуктов и контроля качества, Университет Цзяннань, Уси, Цзянсу, 214122, Народная Республика Китая.
² Комплексный технологический центр таможни Чжанцзяган, Чжанцзяган, Цзянсу, 215600, Китайская Народная Республика.
³ Государственная ключевая лаборатория пищевых наук и технологий, Школа пищевых наук и технологий, Национальный инженерный исследовательский центр функционального питания, Синергетический инновационный центр безопасности пищевых продуктов и контроля качества, Университет Цзяннань, Уси, Цзянсу, 214122, Народная Республика Китай[email protected].

Элемент в буфере обмена

Полнотекстовые ссылки Опции CiteDisplay

Показать варианты

Формат АннотацияPubMedPMID

Абстрактный

Дезоксиниваленол (ДОН) и зеараленон (ЗЕН) — это микотоксины, поражающие широкий спектр зерновых и сельскохозяйственных культур.В этом исследовании для чувствительного и количественного определения ДОН и ЗЕН впервые была разработана одноканальная иммунохроматографическая тест-полоска с одноэтапным временным разрешением на основе флуоресцентных микросфер полистирола иона европия. Концентрация искусственного антигена и массовое отношение моноклонального антитела к флуоресцентным микросферам для конъюгации были оптимизированы, чтобы упростить процесс добавления образца во время иммунохроматографического анализа и повысить эффективность обнаружения на месте. Пределы обнаружения (LOD) одноканальной иммунохроматографической тест-полоски для обнаружения ДОН и ЗЕН были равны 0.17 и 0,54 мкг / л соответственно. Между тем, двухканальная иммунохроматографическая тест-полоска была разработана для одновременного обнаружения DON и ZEN с LOD 0,24 и 0,69 мкг / л, достигнутыми для DON и ZEN, соответственно. Разработанные тест-полоски также дали результаты восстановления, согласующиеся с результатами, полученными с помощью LC-MS / MS для обнаружения DON и ZEN в реальных образцах пшеничной и кукурузной муки, подтверждая практичность и надежность тест-полоски. Разработанные иммунохроматографические тест-полоски обеспечивают быстрое и чувствительное обнаружение ДОН и ЗЕН, демонстрируя потенциал для широкого применения на платформе тестирования множественных микотоксинов в сельскохозяйственных продуктах в местах оказания медицинской помощи.Графический аннотация.

Ключевые слова: Дезоксиниваленол; Иммунохроматографическая тест-полоска; Одновременное обнаружение; Флуоресцентные микросферы с временным разрешением; Зеараленон.

ZPR-6 Experiment 6A Geometry and U-235 Plate Power Solution.

PyLith — это конечно-элементный код с открытым исходным кодом для динамического и квазистатического моделирования деформации земной коры, в первую очередь землетрясений и вулканов. • Основная страница: [https://geodynamics.org/cig/software/pylith] (https://geodynamics.org/cig/software/pylith) • Руководство пользователя • Бинарные пакеты • Утилита для сборки PyLith и всех его зависимостей из исходного кода. • PyLith Wiki: [https://wiki.geodynamics.org/software:pylith:start] (https://wiki.geodynamics.org/software:pylith:start) • Архив онлайн-уроков • Подсказки, подсказки, приемы и т. Д. • План развития PyLith • Отправляйте отчеты об ошибках через https: // github.ru / geodynamics / pylith / issues • Присылайте все вопросы по адресу: [email protected] Функции • Квазистатическое (неявное) и динамическое (явное) изменение времени • Типы ячеек включают треугольники, четырехугольники, шестигранники и тетраэдры. • Линейно-упругие, линейные и обобщенные вязкоупругие Максвелла, степенные вязкоупругие материалы и упругопластические материалы Друкера-Прагера. • Составы, обеспечивающие эластичность при бесконечно малых и малых деформациях. • Интерфейсы неисправностей с использованием связных ячеек • Предписанный сдвиг с множественными, потенциально перекрывающимися землетрясениями и асейсмической ползучестью. • Самопроизвольное скольжение с трением, ослабляющим скольжение, и определяющие модели разлома по скорости и трению состояний Дитериха. • Граничные условия Дирихле, зависящие от времени (перемещение / скорость). • Граничные условия Неймана, зависящие от времени (тяга) • Точечные силы, зависящие от времени • Поглощающие граничные условия • Гравитационные силы тела • VTK и HDF5 / Xdmf вывод решения, информации об ошибках и переменных состояния • Шаблоны для добавления ваших собственных объемных реологий, структурных моделей разломов и взаимодействия с пользовательской скоростной моделью сейсмических волн.• Удобное вычисление статических трехмерных функций Грина. Установка Подробные инструкции по установке для двоичных пакетов находятся в Руководстве пользователя с подробными инструкциями по сборке для нескольких платформ в файле INSTALL, поставляемом с утилитой PyLith Installer. Мы также предлагаем образ Docker (https://wiki.geodynamics.org/software:pylith:docker) для запуска PyLith в портативной виртуальной среде Linux. Примечания к выпуску • Добавлен аргумент командной строки —version для отображения информации о версии PyLith и его зависимостей.• Улучшена информация, отображаемая с аргументом командной строки —help. • Добавлен аргумент командной строки —include-citations для отображения публикаций для цитирования при публикации результатов вычислений с использованием PyLith. Общие ссылки PyLith также отображаются с аргументом командной строки —version. • Разрешить использование версий NetCDF выше 4.1.3. Переключитесь с использования C ++ API на C API. • Исправлена ошибка в Pythia, связанная с проверкой параметров перед отображением справки. • Исправлены опечатки в руководстве для гравитации и точечных сил.• Добавлена интеграция с Travis для автоматического тестирования.

zpr s.a. Вопросы и ответы на интервью | zpr s.a. Документы для размещения

Вы можете получить работу на базе этих zpr s.a. Интервью вопросы, которые были созданы на основе исследования и опроса компании. Первый вопрос, который нам приходит в голову: как взломать zpr s.a. интервью обработано. Эти zpr s.a. вопросы интервью обеспечат лучшую поддержку для взлома интервью. Это дает правильное направление для проведения интервью за меньшее время, так как большинство компаний задавали похожие вопросы, основанные на их предыдущих собеседованиях и их деловых операциях.Более того, будет лучше расширить ваши знания об истории и текущем положении компании. В дополнение к этому zpr s.a. Вопросы на собеседовании необходимы для того, чтобы настроить наше мнение, которое также повысит ваш уровень уверенности. Вы должны прочитать эти вопросы собеседования, чтобы добиться успеха на собеседовании. Это даст больше шансов попасть в шорт-лист на собеседовании. Вы можете найти лучшие ответы на все вопросы интервью от экспертов и профессионалов, которые сталкивались с такими типами интервью в прошлом.Кроме того, zpr s.a. вопросы и ответы на собеседование предоставляются как опытным, так и более свежим кандидатам. Кроме того, вы можете легко настроить собеседование на основе ваших знаний и подготовки. Мы обеспечиваем высокий уровень содержания, чтобы составить короткий список на собеседовании и получить работу своей мечты. Более того, большинство компаний повторили свои вопросы на собеседовании. Таким образом, вам также следует прочитать эти вопросы и ответы, потому что вы должны дать правильный ответ на эти вопросы, чтобы попасть в короткий список на собеседовании.Более того, у этих zpr s.a. есть много хороших результатов. вопросы интервью и ответ на ваше предстоящее интервью, а также будущие интервью. Итак, вам стоит пройти через все эти zpr s.a. вопросы и ответы на собеседование один раз. Вы должны знать свой уровень для этого собеседования на основе данных zpr s.a. вопросы интервью также. Эти zpr s.a. Вопросы и ответы на собеседовании были разработаны для взлома интервью. Несомненно, вы добьетесь успеха на собеседовании или работе. zpr s.a. Документы о зачислении полезны для улучшения знаний и личного развития, которые также будут использоваться в другом собеседовании.

Инструмент для тестового перевода в Италию и Австрию для приграничных поездов

Проект Translate4Rail достиг важной вехи на границе между Италией и Австрией. В прошлом месяце водители и диспетчеры из обеих стран протестировали прототип системы перевода на практике.

Согласно Translate4Rail, тест прошел успешно, поскольку была подтверждена безопасная работа Language Tool. Водителю и диспетчеру удалось связаться друг с другом через систему заранее заданных сообщений.

В испытаниях участвовали специалисты двух менеджеров инфраструктуры, Rete Ferroviaria Italiana (RFI) и ÖBB Infra, и четырех железнодорожных предприятий: DB Cargo, Lokomotion, Rail Cargo Austria и Rail Traction Company. Испытания начались на итальянской стороне 30 июня на участке Тарвизио-Понтебба / Понтебба-Тарвизио и продолжились на австрийской стороне 1 июля в Арнольдштайн-Филлах-Арнольдштайн, где были испытаны различные испытательные модули.

Предопределенные сообщения

Железнодорожные грузовые перевозки сильно зависят от трансграничных перевозок.Но одним из препятствий на пути к поиску подходящих машинистов поездов является требование владения языком на уровне B1 для управления поездом в стране назначения. Чтобы преодолеть этот барьер, 1 декабря 2019 года UIC и RNE запустили проект Translate4Rail, финансируемый фондом Shift2Rail Европейского Союза.

Translate4Rail будет работать в течение 24 месяцев, до 30 ноября 2021 года. По данным Европейской комиссии, основная цель проекта Translate4Rail — «увеличить поток движения вокруг границ, по крайней мере, поддерживать уровень безопасности и повышать конкурентоспособность. железнодорожный сектор ».

Это достигается путем разработки прототипа языкового инструмента, который позволяет водителям поездов и диспетчерам на трансграничных службах общаться друг с другом в обычных, аварийных и аварийных ситуациях, даже если они не говорят на одном языке. Translate4Rail предоставляет машинистам и диспетчерам поездов набор предопределенных сообщений (PDM), которые удовлетворяют их потребности в коммуникации во всех рабочих ситуациях.

После обширных лабораторных испытаний команда Translate4Rail приступила к полевым испытаниям прототипа в реальных условиях.На австрийско-итальянской границе были протестированы два сценария в режимах «неподвижный» и «рабочий».

Обратная связь

Разработка Translate4Rail Language Tool с использованием базы данных предопределенных сообщений (PDM) теперь переходит к следующему этапу тестирования. Будут обработаны отзывы машинистов поездов и диспетчеров о системе перевода, ее эргономике (использование планшета) и корректировках для повседневной работы. Translate4Rail — это проект Shift2Rail, UIC и Rail Net Europe (RNE).

Подробнее:

Европа PMC

iScience. 2020 21 августа; 23 (8): 101433.

, ^1, ^3, ^4, ⁹, ^1, ^3, ^4, ⁹, ^1, ^3, ^4, ⁹, ^1, ³, ⁴, ^1, ³, ⁸, ⁶, ^1, ³, ^1, ^{, ⁵, ^2, ⁵, ^1, ^3, ⁶, ⁶, ⁷, ⁸, ⁴ и ^1, ^3, ^3, 4,} ^10,

Томас К.Чемберлен

¹ Исследовательский центр иммунитета и инфекций, Ванкуверский научно-исследовательский институт прибрежного здравоохранения, Ванкувер, Британская Колумбия, V6H 3Z6, Канада

³ Отделение хирургии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

⁴ Отделение биохимии и молекулярная биология, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Sylvia T. Cheung

³ Департамент хирургии , Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

⁴ Кафедра биохимии и молекулярной биологии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Джефф С.J. Yoon

³ Отделение хирургии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

⁴ Отделение биохимии и молекулярной биологии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Эндрю Минг-Лум

¹ Исследовательский центр иммунитета и инфекций, Ванкуверский научно-исследовательский институт прибрежного здравоохранения, Ванкувер, Британская Колумбия V6H 3Z6, Канада

³ Департамент хирургии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Бернд Р.Gardill

⁴ Департамент биохимии и молекулярной биологии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Соруш Шакибахо

¹ Исследовательский центр иммунитета и инфекций, Ванкуверский научно-исследовательский институт прибрежного здравоохранения, Ванкувер, Канада

Z6, V6

³ Отделение хирургии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Эдис Дзананович

⁸ Отделение химии, Университет Манитобы, Виннипег, Канада

Fuqiang Ban

⁶ Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Abrar Samiea

³ Департамент хирургии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Камалдип Джаванда

^{1 9000 4 Исследовательский центр иммунитета и инфекций, Ванкуверский научно-исследовательский институт прибрежного здравоохранения, Ванкувер, Британская Колумбия, V6H 3Z6, Канада}

³ Отделение хирургии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Джон Приатель

⁵ Отделение патологии и патологии. Лабораторная медицина, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Джеральд Кристал

² Онкологический исследовательский центр Британской Колумбии, Ванкувер, Британская Колумбия, V5Z 1L3, Канада

⁵ Департамент патологии и лабораторной медицины, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Кристофер Дж.Ong

³ Отделение хирургии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

⁶ Отделение урологии Наук, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Артем Черкасов

⁶ Кафедра урологических наук, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Раймонд Дж.Андерсен

⁷ Химический факультет Университета Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Шон А. Маккенна

⁸ Химический факультет Университета Манитобы, Виннипег, Канада

Филип Ван Петегем

Департамент биохимии и молекулярной биологии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

Алиса Л.Ф. Mui

³ Отделение хирургии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

⁴ Отделение биохимии и молекулярная биология, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

² Онкологический исследовательский центр Британской Колумбии, Ванкувер, Британская Колумбия V5Z 1L3, Канада

³ Департамент хирургии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

⁴ Департамент биохимии и молекулярной биологии, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

⁵ Департамент патологии и Лабораторная медицина, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

^{6 9000 4 Департамент урологических наук, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада}

⁷ Химический факультет, Университет Британской Колумбии, Ванкувер, Канада

⁸ Химический факультет, Университет Манитобы, Виннипег, Канада

⁹ Эти авторы внесли поровну

¹⁰ Контактное лицо

Получено 23 апреля 2019 г .; Пересмотрено 7 июля 2020 г .; Принята в печать 31 июля 2020 г.

Это статья в открытом доступе под лицензией CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Сопутствующие данные

Дополнительные материалы: Документ S1. Прозрачные методы, рисунок S1 – S6 и таблица S1

Заявление о доступности данных: Данные рентгеновской кристаллографии, подтверждающие результаты этого исследования, были депонированы во Всемирном банке данных по белкам (wwPDB) под идентификационным кодом , PDB: 6DLG.

Резюме

Считается, что противовоспалительное действие интерлейкина-10 (IL10) опосредуется в первую очередь фактором транскрипции STAT3, но провоспалительные цитокины, такие как интерлейкин-6 (IL6), также действуют через STAT3. Теперь мы сообщаем, что IL10, но не передача сигналов IL6, индуцирует образование комплекса между STAT3 и инозитолполифосфат-5-фосфатазой SHIP1 в макрофагах. И SHIP1, и STAT3 перемещаются в ядро макрофагов. Примечательно, что сесквитерпены семейства Pelorol, которые мы ранее описали как аллостерические активаторы активности фосфатазы SHIP1, могут индуцировать образование комплекса SHIP1 / STAT3 в клетках и имитировать противовоспалительное действие IL10 на мышиной модели колита.Используя кристаллографию и исследования докинга, мы идентифицировали карман, связывающий лекарство, в SHIP1. Наши исследования раскрывают новые механизмы действия как STAT3, так и SHIP1 и дают обоснование для использования аллостерических соединений, активирующих SHIP1, которые имитируют полезное противовоспалительное действие IL10.

Тематические области: Молекулярная биология, молекулярное взаимодействие, иммунитет

Графическое резюме

Введение

Распространенность воспалительного заболевания кишечника (ВЗК) в Северной Америке составляет 505/100 000 человек (язвенный колит) и 322/100 000 человек ( Болезнь Крона) и увеличивающаяся (Sairenji et al., 2017). Многие факторы способствуют развитию ВЗК, но общегеномные исследования ассоциации (Verstockt et al., 2018) и клинические данные (Engelhardt and Grimbacher, 2014; Glocker et al., 2009, 2011; Louis et al., 2009) показывают что противовоспалительное действие интерлейкина-10 (IL10) (Friedrich et al., 2019; Ouyang and O’Garra, 2019; Ouyang et al., 2011) важно для поддержания надлежащего иммунного гомеостаза. У мышей с дефицитом IL10 развивается колит, аналогичный воспалительному заболеванию кишечника человека (Kuhn et al., 1993; Shouval et al., 2014b), а ключевой мишенью IL10 является макрофаг (Friedrich et al., 2019; Shouval et al., 2014b; Zigmond et al., 2014). У людей полиморфизм гена IL10 связан с язвенным колитом (Louis et al., 2009), а гомозиготные мутации потери функции в субъединицах рецептора IL10 приводят к раннему началу колита (Engelhardt and Grimbacher, 2014; Glocker et al. ., 2009, 2011). Следовательно, понимание механизма, посредством которого IL10 оказывает свое действие на клетки-мишени, может дать представление о разработке терапевтических средств для лечения воспалительного заболевания (Kumar et al., 2017).

IL10 поддерживает иммунный гомеостаз слизистой оболочки толстой кишки главным образом за счет ингибирования макрофагами продукции медиаторов воспаления, таких как фактор некроза опухоли альфа (TNFα) и IL1α, вызванных воспалительными стимулами (Friedrich et al., 2019; Ouyang and O’Garra, 2019; Ouyang et al. ., 2011; Shouval et al., 2014a; Zigmond et al., 2014; Iyer, Cheng, 2012). В классической модели передачи сигналов рецептора IL10 связывание IL10 с его рецептором вызывает активацию тирозинкиназы Jak1 и Tyk2, фосфорилирование тирозина фактора транскрипции STAT3 и экспрессию генов, регулируемых STAT3 (Hutchins et al., 2013; Мюррей, 2006a, 2006b). Широко распространено мнение, что активации STAT3 достаточно для опосредования всех противовоспалительных действий IL10 (El Kasmi et al., 2006; Murray, 2005, 2006a, 2006b; Weaver et al., 2007; Hutchins et al., 2012). В подтверждение этого, у мыши, специфичной для миелоида STAT3 ^{— / —}, развивается колит (Takeda et al., 1999), как и у мыши IL10 ^{— / —} (Kuhn et al., 1993; Zigmond et al., 2014). ). Однако STAT3 фосфорилируется по тирозину и активируется многими стимулами, включая провоспалительный цитокин IL6 (Garbers et al., 2015), поэтому активация STAT3 должна отличаться от передачи сигналов IL10 и IL6, чтобы опосредовать их противоположные действия.

SHIP1-фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфат-5-фосфатаза представляет собой цитоплазматический белок, экспрессируемый преимущественно в кроветворных клетках (Hibbs et al., 2018; Fernandes et al., 2013 # 1400, Huber et al., 1999; Krystal, 2000; Паулс и Маршалл, 2017). В ответ на внеклеточные сигналы SHIP1 может рекрутироваться на клеточную мембрану, и одним из его действий может быть отключение передачи сигналов фосфоинозитид-3-киназы (PI3K) (Brown et al., 2010) путем дефосфорилирования продукта PI3K PIP ₃ в PI (3,4) P ₂ (Fernandes et al., 2013; Huber et al., 1999; Krystal, 2000; Pauls and Marshall, 2017). Мы показали, что активность фосфатазы SHIP1 аллостерически активируется ее продуктом PI (3,4) P ₂ и что небольшие молекулы семейства пелорол (ZPR-MN100 и ZPR-151) также аллостерически усиливают активность фосфатазы SHIP1 (Meimetis et al. ., 2012; Онг и др., 2007). Эти данные предполагают, что стимуляция активности фосфатазы SHIP1 с помощью низкомолекулярных активаторов SHIP1 может быть использована для лечения воспалительных заболеваний, вызванных ненадлежащим образом длительной выработкой PI3K PI (3,4) P ₂.

Однако, помимо своей ферментативной функции по гидролизу PIP ₃, SHIP1 также может действовать как стыковочный белок для сборки сигнальных комплексов (Pauls and Marshall, 2017). Ранее мы показали, что передача сигналов IL10R требует, чтобы SHIP1 ингибировал трансляцию TNFα (Chan et al., 2012), но работают ли SHIP1 и STAT3 независимо или вместе, не было определено. Теперь мы сообщаем, что белок SHIP1, содержащий точечные мутации, который инактивирует его фосфатазную активность, все еще может опосредовать противовоспалительное действие IL10 и что SHIP1 и STAT3 связываются друг с другом в ответ на IL10.Кроме того, низкомолекулярные аллостерические активаторы SHIP1 могут сами по себе индуцировать образование комплекса SHIP1 / STAT3 и ингибировать воспаление в модели колита у мышей.

Эти данные предполагают, что агонисты SHIP1 могут быть использованы для индукции полезного противовоспалительного действия IL10 путем индукции конформационного изменения в SHIP1, которое делает возможным образование комплекса SHIP1 / STAT3. Более того, признаки заболевания, при которых происходит потеря нормальной функции IL10, могут быть наиболее полезны при использовании агонистов SHIP1.

Результаты

IL10 требует как SHIP1, так и STAT3 для ингибирования продукции TNFα макрофагами

Роль STAT3 в опосредовании ингибирования IL10 TNFα in vivo была впервые описана (Takeda et al., 1999). Они обнаружили, что введение LPS мышам с миелоид-специфическим нокдауном STAT3 продуцировало больше TNFα, чем мыши дикого типа, и пришли к выводу, что эндогенный IL10 неспособен противодействовать передаче сигналов LPS у мышей STAT3 ^{— / —}. Однако более тщательное изучение их данных показало, что, хотя уровни TNFα остаются высокими после введения LPS у мышей IL10 ^{— / —} (Berg et al., 1995), уровни TNFα падают у мышей STAT3 ^{— / —} по мере повышения эндогенных уровней IL10 (Takeda et al., B). Это означает, что белок, отличный от STAT3, может вносить вклад в действие IL10. Наши предыдущие исследования на основе клеточных культур подтвердили, что SHIP1 участвует в действии IL10 (Chan et al., 2012; Cheung et al., 2013; Samiea et al., 2020). Теперь мы проверили in vivo на способность IL10 ингибировать LPS-индуцированную экспрессию воспалительных цитокинов (A) у мышей SHIP1 ^{+ / +} и SHIP1 ^{— / —} и обнаружили, что IL10 ингибирует TNFα в SHIP1 ^{+ / +} но не SHIP1 ^{— / —} мышей.Ранее мы показали, что активность SHIP1 фосфатазы аллостерически стимулируется ее продуктом PI (3,4) P ₂ (Ong et al., 2007). Мы синтезировали низкомолекулярный аллостерический регулятор ZPR-MN100 (ранее называвшийся AQX-MN100 (Ong et al., 2007)) (A), который связывается с тем же доменом SHIP1 C2, что и PI (3,4) P ₂ и увеличивает функциональную активность SHIP1 (Ong et al., 2007). Мы обнаружили, что ZPR-MN100 ингибирует LPS-индуцированный TNFα у мышей SHIP1 ^{+ / +}, но не SHIP1 ^{— / —}, предполагая, что эти соединения могут имитировать противовоспалительные свойства IL10 и действительно специфичны для SHIP1 (B).

IL10 использует SHIP1 и STAT3 для ингибирования активации макрофагов

(A и B) Сывороточный TNFα у мышей SHIP1 ^{+ / +} или SHIP1 ^{— / —}, которым внутрибрюшинно вводили LPS, LPS + IL10 (A) или ЛПС + ZPR-MN100 (B) в указанных концентрациях в течение 1 часа. Данные представляют собой средние значения n ≥ 4. p <0,05, p <0,01 по сравнению с мышами, стимулированными только LPS, ns = несущественно.

(C) STAT3 ^{+ / +}, STAT3 ^{— / —}, SHIP1 ^{+ / +} и SHIP1 ^{— / —} макрофаги, полученные из костного мозга (BMDM), стимулировались LPS (пунктирная линия) или LPS + IL10 (сплошная линия) в течение 180 мин в проточном аппарате.Фракции собирали каждые 5 минут для измерения уровней TNFα. Данные представляют два независимых эксперимента.

SHIP1 и STAT3 могут действовать независимо или вместе, опосредуя действие IL10. Чтобы помочь различить эти две возможности, мы использовали систему непрерывного проточного культивирования клеток, которая позволяет нам оценить кинетику продукции TNFα в SHIP1 и STAT3 дикого типа и макрофагах, полученных из костного мозга (BMDM). ЛПС стимулирует два пика экспрессии TNFα, один примерно через 1 час, а другой через 3 часа (C).IL10 снижает уровни TNFα как в клетках SHIP1 ^{+ / +}, так и в STAT3 ^{+ / +}, но полностью нарушает ингибирование 1-часового пика как в клетках STAT3 ^{— / —}, так и в SHIP1 ^{— / —} и частично нарушается. в ингибировании 3-часового пика в обоих КО BMDM. Идентичные паттерны невосприимчивости предполагают, что SHIP1 и STAT3 взаимодействуют.

IL10 вызывает физическую ассоциацию SHIP1 и STAT3 в макрофагах

Наше открытие, что SHIP1 и STAT3 работают вместе, беспрецедентно.Оба белка находятся в цитоплазме покоящихся клеток и рекрутируются на клеточную мембрану в ответ на внеклеточные стимулы, но с помощью различных механизмов. STAT3 функционирует в основном как фактор транскрипции (Matsuda et al., 2015), а SHIP1 наиболее известен своей липидной фосфатазной активностью (Pauls and Marshall, 2017). Однако SHIP1 также может действовать как стыковочный или адаптерный белок для сборки сигнальных комплексов (Pauls and Marshall, 2017). Действительно, мы обнаружили, что версия SHIP1 с минимальной активностью фосфатазы (3PT) (An et al., 2005) могут опосредовать ингибирующий эффект IL10 на LPS-стимулированную продукцию TNFα (A), поэтому мы исследовали, может ли SHIP1 выполнять функцию адаптера в передаче сигналов IL10 и связываться с STAT3 в ответ на IL10. B показывает, что обработка клеток IL10 приводила к соосаждению SHIP1 с STAT3. IL6 не может индуцировать ассоциацию STAT3 с SHIP1, хотя STAT3 становится фосфорилированным по тирозину в той же степени, что и в ответ на IL10. Примечательно, что обработка клеток низкомолекулярным аллостерическим регулятором SHIP1 ZPR-151 (ранее называвшимся 28 · HCl (Meimetis et al., 2012)), более водорастворимого производного ZPR-MN100 (A), достаточно для индукции ассоциации SHIP1 и STAT3 (B). Способность ZPR-151 индуцировать ассоциацию SHIP1 и STAT3 предполагает, что связывание ZPR-151 может вызывать конформационные изменения, которые могут изменять ассоциацию SHIP1 с другими белками. Чтобы увидеть, происходит ли взаимодействие SHIP1 / STAT3 в интактных клетках, мы создали конструкции слитых белков Clover-SHIP1 и mRuby2-STAT3 и трансдуцировали их в клетки J17 SHIP1 ^{— / —} для анализа FRET.C показывает, что стимуляция клеток Clover-SHIP1 / mRuby2-STAT3 с помощью IL10 или ZPR-151, но не IL6, увеличивает сигнал FRET Clover-mRuby2, предполагая, что SHIP1 и STAT3 взаимодействуют in vivo.

И SHIP1, и STAT3 имеют домены Sh3, и сообщалось, что оба они фосфорилируются по остаткам тирозина, поэтому образование комплекса может быть опосредовано взаимодействием фосфотирозин / Sh3. Поскольку B показывает, что STAT3 не должен фосфорилироваться для связывания с SHIP1 (см. Дорожку ZPR-151), мы посмотрели, могут ли остатки тирозина на SHIP1 фосфорилироваться для взаимодействия с доменом STAT3 Sh3.Четыре остатка тирозина в SHIP1 существуют в контексте последовательности узнавания домена Sh3 STAT3. Мы сконструировали мутанты SHIP1, в которых каждый из этих остатков замещен фенилаланином, экспрессировали их в линии макрофагов J17 SHIP1 ^{— / —} и протестировали способность IL10 ингибировать экспрессию TNFα (A) в этих клетках. Клетки, экспрессирующие мутант Y190F, вели себя как клетки SHIP1 ^{— / —} (A). Способность мутанта Y190F взаимодействовать с STAT3 снижалась в 2 раза в ответ на IL10 и ZPR-151 (B и 3C), предполагая, что часть взаимодействия SHIP1 со STAT3 требует фосфорилирования SHIP1 Y190.

Мы также изучили субклеточную локализацию SHIP1 и STAT3 в первичных клетках. Перитонеальные макрофаги дикого типа, SHIP1 ^{— / —} или STAT3 ^{— / —} стимулировали IL10 или ZPR-151 и окрашивали антителами против SHIP1 или STAT3. A и B показывают индуцированную IL10 или ZPR-151 мембранную ассоциацию как SHIP1, так и STAT3 через 2 мин в клетках дикого типа. SHIP1 не перемещается в клетках STAT3 ^{— / —}, а STAT3 не перемещается в клетках SHIP1 ^{— / —} (B).Через 20 мин и SHIP1, и STAT3 обнаруживаются в ядре клеток дикого типа, и клетки требуют транслокации для экспрессии как STAT3, так и SHIP1. Таким образом, ZPR-151 может имитировать IL10 в отношении транслокаций SHIP1 и STAT3. В отличие от IL10, IL6 одинаково хорошо индуцировал ядерную транслокацию STAT3 в клетках SHIP1 ^{+ / +} и SHIP1 ^{— / —} (рисунок S1).

SHIP1 претерпевает конформационное изменение при связывании аллостерического регулятора

Чтобы лучше понять взаимодействие низкомолекулярных аллостерических регуляторов с SHIP1, которые мы создали для рентгеновской кристаллографии, усеченные белки SHIP1, которые содержат минимальную область SHIP1, необходимую для аллостерических- регулируемая активность фосфатазы ().Полноразмерный SHIP1 не может быть выражен в количестве, достаточном для кристаллографии, поэтому мы сначала определили минимальную область SHIP1, необходимую для аллостерической активации. Ранее мы показали, что домен C2 связывает аллостерические регуляторы SHIP1 (PI (3,4) P ₂, ZPR-MN100) и что N-конец домена PH-R к домену фосфатазы может быть вовлечен (Ong et al. ., 2007). Итак, мы экспрессировали полноразмерный SHIP1 (который может продуцироваться только в клетках 293T млекопитающих), PPAC (который содержит домены PH-R-фосфатазы-C2 и может экспрессироваться как в клетках 293T, так и в E.coli ) и PAC1 / PAC2 (которые содержат домены фосфатазы-C2 и могут быть экспрессированы в E. coli ) белков (A). Мы исследовали их кинетические свойства фермента (фосфатазы) и способность активироваться ZPR-MN100. Мы обнаружили, что PPAC, полученный из 293T и E. coli , обладает одинаковыми ферментативными свойствами (B) и что все четыре белка (полноразмерный SHIP1, PPAC, производный 293T, PPAC , производный E. coli , и PAC2) могут быть активированы ZPR. -MN100 (С).

PPAC, PAC1 и PAC2 обладают такой же ферментативной активностью, что и полноразмерный SHIP1

(A) Схематическая диаграмма различных конструкций усечения SHIP1.PPAC состоит из домена PH-R, фосфатазы и домена C2 (остатки аминокислот 293-877). PAC1 и PAC2 состоят из фосфатазы и домена C2 (остатки аминокислот 402-861 и 402-857 аминокислот соответственно). PAC1-cc и PAC2-cc содержат мутации снижения поверхностной энтропии в домене C2 (E770A, E772A, E773A). Этот кластер остатков был идентифицирован с помощью сервера SERp (http://services.mbi.ucla.edu/SER/intro.php).

(B) Ферментные каталитические начальные скорости были определены при указанных концентрациях IP4.Значения K _cat и K _m были рассчитаны с использованием программного обеспечения GraphPad.

(C) Способность ZPR-MN100 стимулировать активность фосфатазы в полноразмерных SHIP1, PPAC и PAC (данные представляют собой среднее ± стандартное отклонение. Двусторонний дисперсионный анализ с поправкой Тьюки для множественных сравнений, p <0,01, p <0,0001) .

Только белки PAC1 и PAC2 могли быть экспрессированы в количествах, необходимых для структурных исследований, поэтому они были произведены и подвергнуты проверке на условия для получения кристаллов достаточного качества для определения структуры.Это включало создание версий с уменьшенной поверхностной энтропией (Derewenda, 2004; Goldschmidt et al., 2007), названных PAC1-cc и PAC2-cc, в которых три остатка глутаминовой кислоты в PAC1 и PAC2 были заменены на аланины. Мы решили структуру для нескольких кристаллов PAC1-cc и PAC2-cc, и данные для кристалла PAC2-cc, дифрагированные с разрешением 1,6 Å, показаны в A и в таблице S1. Мы также использовали данные малоуглового рассеяния рентгеновских лучей (SAXS) для создания моделей PAC1 с ZPR-MN100 и без него. Конформация раствора безлигандированного PAC1, определенная методом SAXS, подтверждает рентгеновскую кристаллическую структуру.Кроме того, анализ SAXS показал, что связывание ZPR-MN100 с PAC1 приводит к изменению его общей конформации (B).

Используя молекулярное моделирование (Ban et al., 2018), мы идентифицировали потенциальный карман связывания для ZPR-MN100 / ZPR-151 в PAC2 (A). Предполагается, что остаток K681 в этом кармане участвует в связывании ZPR-MN100 / ZPR-151, поэтому мы создали точечный мутант K681A для PAC2 и протестировали способность дикого типа и PAC2-K681A связывать ZPR-151 с помощью биослойной интерферометрии ( BLI). Как показано на C (и на рисунке S3), замена K681A в предполагаемом кармане ухудшает способность ZPR-151 и PI (3,4) P ₂ связываться с PAC2.Затем мы изучили влияние замены K681A на способность полноразмерного SHIP1 опосредовать ингибирование макрофагов IL10. D показывает, что IL10 эффективно ингибирует продукцию TNFα в клетках, экспрессирующих SHIP1 дикого типа, но не K681A.

В работе, выполненной независимо от авторов этой статьи, Stenton et al. описали молекулу под названием AQX-1125 (структура в A, позже получившая название клинического исследования Rosiptor) в качестве агониста SHIP1 (Stenton et al., 2013a, 2013b). Однако AQX-1125 / Rosiptor обладает маргинальной активностью по усилению фосфатазы SHIP1 (Stenton et al., 2013b) и демонстрировали свойства кинетики ферментов, отличные от кинетических свойств фермента (Stenton et al., 2013b), чем мы наблюдали с ZPR-MN100 (Ong et al., 2007). Stenton et al. изучили связывание меченного тритием AQX-1125 / Rosiptor с белком SHIP1 с использованием сцинтилляционного анализа близости, но трудно оценить значимость наблюдаемого ими сигнала ~ 300 импульсов в минуту. Поэтому мы напрямую сравнили способность PI (3,4) P _2., ZPR-151 и AQX-1125 / Rosiptor связываться с SHIP1 в нашем анализе BLI (B и S3). Мы обнаружили, что AQX-1125 / Rosiptor очень плохо связывается с SHIP1 по сравнению с ZPR-151 или природным агонистом SHIP1 PI (3,4) P ₂.

Аллостерический регулятор SHIP1 малых молекул ZPR-MN100 снимает воспаление в IL10

^{— / —} Колит

Чтобы проверить, могут ли маломолекулярные аллостерические регуляторы SHIP1 имитировать противовоспалительное действие IL10 in vivo , мы исследовали, действительно ли ZPR -MN100 может уменьшать воспаление в модели колита у мышей с нокаутом IL10 (Keubler et al., 2015). У мышей с нокаутом IL10 развивается колит при колонизации нормальной кишечной флорой, потому что IL10 необходим для сдерживания иммунного ответа хозяина на кишечные комменсальные бактерии (Keubler et al., 2015; Kuhn et al., 1993). Мы инициировали колит у мышей IL10 ^{— / —}, инокулируя их свежевыделенным содержимым толстой кишки нормальных, свободных от специфических патогенов мышей, и позволили воспалению развиться в течение 6 недель (Sydora et al., 2003). Затем мышей обрабатывали в течение 3 недель носителем, 2 мг / кг ZPR-MN100 или 0,4 мг / кг дексаметазона (противовоспалительное стероидное лекарственное средство, используемое в качестве положительного контроля) перед забором ткани толстой кишки для анализа. Срезы, окрашенные гематоксилином и эозином, получали из проксимального, среднего и дистального отделов толстой кишки мышей, а также из мышей, не инокулированных флорой (группа без колита) (A).Два исследователя, не имевшие информации о группах лечения, оценивали срезы на основании отека подслизистой оболочки, инфильтрации иммунных клеток, наличия бокаловидных клеток и целостности эпителия (B). В трех группах, в которых был индуцирован колит, группы дексаметазона и ZPR-MN100 имели значительно более низкие баллы патологии, чем группа носителя (B). РНК получали из толстой кишки всех четырех групп для анализа экспрессии Il17 и Ccl2 , медиаторов воспаления, повышенных при колите (Lee et al., 2007). Как показано на C, лечение как ZPR-MN100, так и дексаметазоном значительно снижало уровни мРНК Il17 и Ccl2 . Эти данные показывают, что лечение ZPR-MN100 может уменьшить воспаление при колите, возникающем в результате потери IL10.

Аллостерический регулятор SHIP1 с малыми молекулами ZPR-MN100 снимает воспаление в IL10 ^{— / —} Колит

(A) Репрезентативные окрашенные H&E проксимальные, средние и дистальные срезы толстой кишки (шкала, 100 мкМ) и патологические баллы (B) нормальных (без колита, n = 6) и колитических мышей IL10 ^{— / —}, получавших носитель (Veh., n = 9), ZPR-MN100 (3 мг / кг) (n = 8) или дексаметазон (Dex., 0,4 мг / кг) (n = 3) в течение 3 недель. p <0,0001 по сравнению с группой, получавшей носитель (данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение. Однофакторный дисперсионный анализ с поправкой Тьюки).

(C) RT-qPCR кДНК, полученной из срезов толстой кишки нормальных (без колита) и колитических мышей IL10 ^{— / —}, обработанных носителем (Veh.), ZPR-MN100 (3 мг / кг) или дексаметазоном (Dex ., 0,4 мг / кг). Данные представляют собой среднее значение экспрессии Il17 и Ccl2 относительно Gapdh .p <0,01, p <0,0001 по сравнению с группой, получавшей носитель (однофакторный дисперсионный анализ с поправкой Тьюки).

Обсуждение

IL6 и IL10 обладают противоположным провоспалительным и противовоспалительным действием соответственно на макрофаги (Garbers et al., 2015; Yasukawa et al., 2003), но оба цитокина стимулируют фосфорилирование тирозина STAT3 Y705 в клетках. Мы обнаружили, что IL10, но не IL6, индуцирует ассоциацию STAT3 с SHIP1, и предположили, что это различие может способствовать тому, почему STAT3 может опосредовать про- и противовоспалительные ответы ниже по течению обоих цитокинов.Возможно, индуцированная IL10 передача сигналов SHIP1 / STAT3 поддерживает противовоспалительные ответы, тогда как индуцированные IL6 димеры STAT3 / STAT3 поддерживают провоспалительные ответы. Исследование Yasukawa et al. Клеток с нокаутом SOCS3 показало, что продолжительность активации STAT3 в клетках макрофагов может лежать в основе противоположных биологических эффектов IL10 и IL6 (Yasukawa et al., 2003). Наши данные совместимы с их данными, потому что активация STAT3 также может быть продлена путем его ассоциации с SHIP1.

Наше текущее исследование сосредоточено на ингибировании IL10 TNFα, но предварительное исследование предполагает, что ингибирование IL10 экспрессии других воспалительных цитокинов (IL1α, IL1β, IL6 и IL12) также зависит от SHIP1 (рисунок S4).Будущие исследования будут включать изучение зависимости SHIP1 и STAT3 всех генов, которые регулирует IL10, чтобы определить, индуцирует ли комплекс SHIP1 / STAT3 экспрессию противовоспалительных генов или присутствие SHIP1 в ядре мешает экспрессии воспалительных генов. В предварительных исследованиях ChIP-qPCR мы обнаружили, что стимулированная IL10 экспрессия Socs3, Sbno2 и Bcl3 требует SHIP1, чтобы позволить STAT3 связываться с их промоторами (рисунок S5).Хотя IL6-индуцированная ассоциация STAT3 с этими промоторами снижена в клетках SHIP1 ^{— / —}, вклад действия SHIP1 в экспрессию этих генов невелик. Будущие исследования включают анализ ChIP-seq по всему геному для определения влияния дефицита SHIP1 на занятость STAT3 в промоторах всех генов, регулируемых IL10 и IL6.

Наши исследования SHIP1 pull-down использовали N-концевую конструкцию SHIP1 с меткой His ₆, трансдуцированную в линию клеток SHIP1 ^{— / —}.Нам не удалось совместно преципитировать SHIP1 и STAT3 с какими-либо другими антителами SHIP1 (все они направлены на другие области SHIP1). Это предполагает, что N-конец SHIP1 доступен в комплексе SHIP1 / STAT3. Предостережения относительно использования клеточных линий, трансдуцированных His ₆-меченным SHIP1, включают возможную экспрессию SHIP1 до более высоких уровней, чем наблюдаемые в клетках дикого типа. Однако, как показано на рисунке S6, уровень SHIP1 с тегом His ₆ аналогичен уровню SHIP1 в ячейках SHIP1 ^{+ / +}.Еще одно предостережение заключается в том, что ассоциации, наблюдаемые в эксперименте in vitro с понижением уровня , могут не возникать в интактных клетках. Однако мы смогли использовать FRET, чтобы показать, что SHIP1 с меткой Clover и STAT3 с меткой mRuby2 связываются в клетках в ответ на IL10 или ZPR-151 (C). Будущие исследования включают создание антител к N-концу SHIP1 для изучения эндогенного SHIP1.

Ранее мы показали, что низкомолекулярные агонисты SHIP1 обладают противовоспалительным действием in vitro (Meimetis et al., 2012; Ong et al., 2007) и приписали эти действия стимуляции фосфатазы SHIP1 дефосфорилированию продукта PI3K PIP ₃ в PI (3,4) P ₂ (Fernandes et al., 2013; Huber et al., 1999; Кристал, 2000; Паулс, Маршалл, 2017). Однако наши текущие данные демонстрируют, что белка SHIP1 с необнаруживаемой активностью фосфатазы достаточно, чтобы опосредовать противовоспалительный эффект IL10, поэтому адапторная функция SHIP1 может сама по себе поддерживать действие IL10. Наши анализы SAXS предполагают, что связывание агонистов SHIP1 с SHIP1 вызывает конформационные изменения в SHIP1.Это конформационное изменение может позволить SHIP1 взаимодействовать с STAT3, а комплекс SHIP1 / STAT3 перемещаться в ядро. Мы решили структуру минимального домена (PAC1 / 2) SHIP1, необходимого для опосредования аллостерического действия агонистов SHIP1, и идентифицировали карман, связывающий лекарство, с помощью молекулярного анализа стыковки. Мутация остатка, который, как предполагается, участвует в связывании с ZPR-151, отменяет связывание ZPR-151 и способность SHIP1 опосредовать ингибирование IL10 экспрессии TNFα в макрофагах.

Мы обнаружили, что SHIP1 Y190 способствует способности SHIP1 связываться со STAT3. Способность мутанта Y190F взаимодействовать с STAT3 была снижена в 2 раза по сравнению с SHIP1 дикого типа (B). Однако способность SHIP1 Y190F поддерживать ингибирование IL10 TNFα (A) полностью нарушена. Одна из интерпретаций состоит в том, что частичное ингибирование комплекса SHIP1 / STAT3 является физиологически значимым, поскольку ингибирование TNFα полностью отменено. Альтернативно, образование комплекса SHIP1 / STAT3 является только одной функцией Y190.Примечательно, что агонист SHIP1 ZPR-151 сам по себе может индуцировать образование комплекса SHIP1 / STAT3. Добавление ZPR-151 к перимакам может также вызывать транслокацию SHIP1 и STAT3 в ядро. Вместе эти данные предполагают, что действие агонистов SHIP1 включает их способность как стимулировать активность фосфатазы SHIP1, так и индуцировать ассоциацию SHIP1 с STAT3.

Обработки макрофагов ZPR-151 / ZPR-MN100 было достаточно, чтобы вызвать противовоспалительные эффекты, аналогичные таковым IL10 in vitro в этом и наших предыдущих исследованиях (Chan et al., 2012; Cheung et al., 2013; Онг и др., 2007). Таким образом, мы протестировали ZPR-MN100 на мышиной модели колита, поскольку полезное противовоспалительное действие IL10 при колите проявляется через действие IL10 на макрофаги (Friedrich et al., 2019; Ouyang and O’Garra, 2019; Shouval et al., 2014b; Zigmond et al., 2014). Мы обнаружили, что ZPR-MN100 так же эффективен, как и дексаметазон, в снижении гистологических и молекулярных маркеров воспаления толстой кишки. Группа Меджитова недавно сообщила о стимуляции митофагии IL10 и инактивации инфламмасомы как части его защитного действия при колите, и что это связано с зависимой от STAT3 активацией белка DDIT4 (Ip et al., 2017). Мы подтвердили, что для активации DDIT4 в макрофагах необходимы как STAT3, так и SHIP1; кроме того, ZPR-151 сам по себе был способен индуцировать экспрессию DDIT4 (данные не показаны).

Низкомолекулярный аллостерический регулятор SHIP1 (AQX-1125 / Rosiptor) (Stenton et al., 2013a, 2013b), разработанный независимо от авторов этой рукописи, недавно был протестирован в клинических испытаниях для облегчения боли в мочевом пузыре, возникающей при интерстициальном цистите ( IC) пациентов (Nickel et al., 2016). Сообщается, что IC был выбран для показания к заболеванию, потому что AQX-1125 / Rosiptor накапливается в мочевом пузыре (Stenton et al., 2013b), две статьи касались PI3K-зависимого воспаления при ИЦ (Liang et al., 2016; Qiao et al., 2014), и предварительные испытания фазы 2 казались многообещающими (Nickel et al., 2016). Однако в ходе исследования фазы 3 не удалось продемонстрировать эффективность AQX-1125 / Rosiptor (Nickel et al., 2019). Есть много причин, по которым низкомолекулярные препараты не работают в процессе разработки лекарств. Однако мы отмечаем, что ни IL10, ни SHIP1 не участвуют в физиологии / патофизиологии IC (Nickel et al., 2019). Кроме того, мы обнаружили, что AQX-1125 / Rosiptor очень слабо связывается с SHIP1, что согласуется с данными Stenton et al.Открытие, что AQX-1125 обладает очень слабой способностью активировать фосфатазу SHIP1 (Stenton et al., 2013b).

Мы предполагаем, что показаниями к заболеваниям, для которых разработаны маломолекулярные аллостерические регуляторы SHIP1, должны быть те, при которых IL10 (Friedrich et al., 2019; Ouyang and O’Garra, 2019; Ouyang et al., 2011) (или другие физиологические регуляторы of SHIP1) (Hibbs et al., 2018; Chan et al., 2012; Cheung et al., 2013; Dobranowski and Sly, 2018; Pauls and Marshall, 2017), как было показано, играет полезную роль.Эти небольшие молекулы также должны иметь такие же связывающие свойства с SHIP1, как и его природный лиганд PI (3,4) P _2. Согласно этим критериям, маломолекулярные агонисты SHIP1, такие как агонисты семейства Pelorol, должны быть исследованы для лечения воспалительных заболеваний человека. заболевание кишечника.

Ограничения исследования

Как подчеркивалось в Обсуждении, ограничением этого исследования была неспособность со-преципитировать STAT3 с эндогенным SHIP1. Мы предполагаем, что N-конец SHIP1 доступен в комплексе SHIP1 / STAT3, поскольку мы успешно удалили STAT3 в SHIP1 ^{— / —} клетках, экспрессирующих N-концевую конструкцию SHIP1, помеченную His ₆.В настоящее время нам неизвестны какие-либо антитела, существующие к N-концевой области SHIP1.

Доступность ресурсов

Контактное лицо для ведущих специалистов

Дополнительную информацию и запросы на ресурсы и реактивы следует направлять ведущему контактному лицу, Алисе Л.Ф. Муи ([email protected]), и выполнять эти запросы.

Доступность материалов

Все уникальные / стабильные реагенты, полученные в этом исследовании, можно получить у контактного лица без ограничений.

Доступность данных и кода

Данные рентгеновской кристаллографии, подтверждающие результаты этого исследования, были депонированы во Всемирном банке данных по белкам (wwPDB) под идентификационным кодом PDB: 6DLG.

Выражение признательности

Мы с благодарностью выражаем признательность доктору Лауре Слай за ее критический обзор рукописи и доктору Наде Лаллоус за ее советы по исследованиям BLI. Источники финансирования включают Канадские институты исследований в области здравоохранения (CIHR) (MOP-84539 для ALM), Институт исследований канадского онкологического общества (грант Канадского онкологического общества № 017289 для RJA) и грант NSERC Discovery для SAM. STC и AML вручили награды CIHR за докторские исследования и премии Фонда Майкла Смита исследований в области здравоохранения (MSFHR).Мы благодарим сотрудников службы поддержки Advanced Photon Source (Chicago) GM / CA-CAT на линии 23-ID-D, Stanford Synchrotron Radiation Lightsource (Menlo Park, США) и Canadian Light Source (Саскатун, SK, Канада) , который поддерживается Советом по естественным наукам и инженерным исследованиям Канады, Национальным исследовательским советом Канады, Канадскими институтами исследований в области здравоохранения (CIHR), провинцией Саскачеван, Западной экономической диверсификацией Канады и Университетом Саскачевана.

Вклад авторов

TCC, STC, JSJY и ALM разработали и выполнили исследования, проанализировали данные и написали рукопись. AML, SS, ED, FB, AS, KJ и SAM провели эксперимент (ы) и проанализировали данные. BRG собрала и проанализировала кристаллографические данные. JP, GK, CJO, AC, RJA, SAM и FVP предоставили реагенты и помогли подготовить рукопись.

Декларация интересов

ALM, RJA, CJO и GK были научными основателями Aquinox Pharmaceuticals, но не были связаны с компанией и не получали от нее компенсации с 2010 года.

Примечания

Опубликован: 21 августа 2020 г.

Дополнительная информация

Документ S1. Прозрачные методы, рисунок S1 – S6 и таблица S1:

Ссылки

An H., Xu H., Zhang M., Zhou J., Feng T., Qian C., Qi R., Cao X. Src. Инозитол-5-фосфатаза 1, содержащая домен homology 2 (SHIP1), негативно регулирует TLR4-опосредованный ответ LPS, главным образом, посредством фосфатазной активности и PI-3K-независимого механизма. Кровь. 2005; 105: 4685–4692. [PubMed] [Google Scholar]
Бан Ф., Далал К., Леблан Э., Морин Х., Ренни П.С., Черкасов А. Разработка новых методов лечения лекарственно-устойчивого рака простаты, основанная на хеминформатике. Мол. Сообщить. 2018; 37: 1800043. [PubMed] [Google Scholar]
Berg DJ, Kuhn R., Rajewsky K., Muller W., Menon S., Davidson N., Grunig G., Rennick D. Интерлейкин-10 является центральным регулятором реакции на ЛПС в мышиных моделях эндотоксического шока и реакции Шварцмана, но не толерантность к эндотоксинам. J. Clin. Инвестировать. 1995; 96: 2339–2347. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Brown J., Ван Х., Хаджишенгаллис Г.Н., Мартин М. Сети передачи сигналов TLR: интеграция адапторных молекул, киназ и перекрестных помех. J. Dental Res. 2010; 90: 417–427. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Chan CS, Ming-Lum A., Golds GB, Lee SJ, Anderson RJ, Mui AL Интерлейкин-10 ингибирует индуцированную липополисахаридом трансляцию фактора некроза опухоли-альфа через SHIP1 -зависимый путь. J. Biol. Chem. 2012. 287: 38020–38027. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Cheung S.T., So E.Y., Chang D., Ming-Lum A., Mui A.L. Интерлейкин-10 ингибирует индуцированную липополисахаридом стабильность и созревание предшественника miR-155. PLoS One. 2013; 8: e71336. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Derewenda Z.S. Рациональная кристаллизация белка с помощью мутационной поверхностной инженерии. Состав. 2004. 12: 529–535. [PubMed] [Google Scholar]
Dobranowski P., Sly L.M. SHIP отрицательно регулирует иммунные ответы типа II в тучных клетках и макрофагах. J. Leukoc. Биол. 2018 doi: 10.1002 / JLB.3MIR0817-340R. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Эль Касми К.С., Холст Дж., Коффре М., Мильке Л., Де Пау А., Лхосин Н., Смит А.М., Рутчман Р., Каушал Д., Шен Й. • Общая природа противовоспалительного ответа, активируемого STAT3. J. Immunol. 2006; 177: 7880–7888. [PubMed] [Google Scholar]
Энгельхардт К.Р., Гримбахер Б. IL-10 в организме человека: уроки кишечника, дефицит рецепторов IL-10 / IL-10 и полиморфизмы IL-10. Curr. Верхний. Microbiol. Иммунол. 2014; 380: 1–18.[PubMed] [Google Scholar]
Фернандес С., Айер С., Керр В.Г. Роль SHIP1 при раке и воспалении слизистой оболочки. Анна. N.Y. Acad. Sci. 2013; 1280: 6–10. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Фридрих М., Похин М., Паури Ф. Цитокиновые сети в патофизиологии воспалительных заболеваний кишечника. Иммунитет. 2019; 50: 992–1006. [PubMed] [Google Scholar]
Гарберс К., Апарисио-Зигмунд С., Роуз-Джон С. Ось передачи сигналов IL-6 / gp130 / STAT3: последние достижения в направлении специфического ингибирования.Curr. Opin. Иммунол. 2015; 34: 75–82. [PubMed] [Google Scholar]
Glocker EO, Kotlarz D., Boztug K., Gertz EM, Schaffer AA, Noyan F., Perro M., Diestelhorst J., Allroth A., Murugan D. Воспалительное заболевание кишечника и мутации воздействуя на рецептор интерлейкина-10. N. Engl. J. Med. 2009; 361: 2033–2045. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Glocker E.O., Kotlarz D., Klein C., Shah N., Grimbacher B. Дефекты рецепторов IL-10 и IL-10 у людей. Анна. N.Y. Acad. Sci. 2011; 1246: 102–107.[PubMed] [Google Scholar]
Goldschmidt L., Cooper D.R., Derewenda Z.S., Eisenberg D. На пути к рациональной кристаллизации белка: веб-сервер для разработки вариантов кристаллизующихся белков. Protein Sci. 2007. 16: 1569–1576. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Hibbs M.L., Raftery A.L., Tsantikos E. Регуляция передачи сигналов гемопоэтических клеток с помощью инозитолфосфатазы SHIP-1: факторы роста и не только. Факторы роста. 2018; 36: 213–231. [PubMed] [Google Scholar]
Хубер М., Helgason C.D., Damen J.E., Scheid M., Duronio V., Liu L., Ware M.D., Humphries R.K., Krystal G. Роль SHIP в передаче сигналов, индуцированных факторами роста. Прог. Биофиз. Мол. Биол. 1999. 71: 423–434. [PubMed] [Google Scholar]
Хатчинс А.П., Диз Д., Миранда-Сааведра Д. Противовоспалительный ответ, опосредованный IL-10 / STAT3: последние разработки и будущие проблемы. Краткий. Функц. Геномика. 2013; 12: 489–498. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Хатчинс А.П., Пулен С., Миранда-Сааведра Д.Полногеномный анализ связывания STAT3 in vivo позволяет прогнозировать эффекторы противовоспалительного ответа в макрофагах. Кровь. 2012; 119: e110 – e119. [PubMed] [Google Scholar]
Ip W.K.E., Hoshi N., Shouval D.S., Snapper S., Medzhitov R. Противовоспалительный эффект IL-10, опосредованный метаболическим перепрограммированием макрофагов. Наука. 2017; 356: 513–519. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Айер С.С., Ченг Г. Роль регуляции транскрипции интерлейкина 10 в воспалении и аутоиммунных заболеваниях.Крит. Rev. Immunol. 2012; 32: 23–63. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Койблер Л.М., Бюттнер М., Хэгер К., Блайх А. Модель с множественными ударами: уроки колита у мышей с дефицитом интерлейкина-10. Воспаление. Кишечник. 2015; 21: 1967–1975. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Кристал Г. Липидные фосфатазы в иммунной системе. Семин. Иммунол. 2000; 12: 397–403. [PubMed] [Google Scholar]
Кун Р., Лохлер Дж., Ренник Д., Раевски К., Мюллер В. У мышей с дефицитом интерлейкина-10 развивается хронический энтероколит.Клетка. 1993. 75: 263–274. [PubMed] [Google Scholar]
Кумар С., Шукла Р., Ранджан П., Кумар А. Интерлейкин-10: убедительная терапевтическая мишень для пациентов с синдромом раздраженного кишечника. Clin. Ther. 2017; 39: 632–643. [PubMed] [Google Scholar]
Lee JW, Bajwa PJ, Carson MJ, Jeske DR, Cong Y., Elson CO, Lytle C., Straus DS Фенофибрат подавляет экспрессию интерлейкина-17 и гамма-интерферона и улучшает колит интерлейкинов. 10-дефицитных мышей. Гастроэнтерология. 2007. 133: 108–123.[PubMed] [Google Scholar]
Лян С., Ли Дж., Гоу Х., Чен Д. Блокирование мишени рапамицина у млекопитающих снижает гиперактивность мочевого пузыря и боль у крыс с циститом. Мол. Боль. 2016; 12: 1–8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Луи Э., Либиул К., Ринарс К., Белайш Дж., Жорж М. Генетика язвенного колита: возвращение интерлейкина 10. Gut. 2009. 58: 1173–1176. [PubMed] [Google Scholar]
Matsuda T., Muromoto R., Sekine Y., Togi S., Kitai Y., Кон С., Оритани К. Сигнальный преобразователь и активатор регуляции транскрипции 3 новыми партнерами по связыванию. Мир J. Biol. Chem. 2015; 6: 324–332. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Meimetis L.G., Nodwell M., Yang L., Wang X., Wu J., Harwig C., Stenton G.R., Mackenzie L.F., Macrury T., Patrick B.O. Синтез SHIP1-активирующих аналогов губчатого меротерпеноида пелорола. Евро. J. Org. Chem. 2012; 2012: 5195–5207. [Google Scholar]
Мюррей П.Дж. Основным механизмом противовоспалительного ответа, регулируемого IL-10, является избирательное подавление транскрипции.Proc. Natl. Акад. Sci. США. 2005; 102: 8686–8691. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Мюррей П.Дж. STAT3-опосредованная противовоспалительная передача сигналов. Biochem. Soc. Пер. 2006; 34: 1028–1031. [PubMed] [Google Scholar]
Мюррей П.Дж. Понимание и использование эндогенного противовоспалительного ответа, опосредованного интерлейкином-10 / STAT3. Curr. Opin. Pharmacol. 2006. 6: 379–386. [PubMed] [Google Scholar]
Никель Дж. К., Эгерди Б., Дэвис Э., Эванс Р., Маккензи Л., Шрусбери С.B. Исследование фазы II эффективности и безопасности нового перорального активатора SHIP1 AQX-1125 у субъектов с умеренным и тяжелым интерстициальным циститом / синдромом боли в мочевом пузыре. J. Urol. 2016; 196: 747–754. [PubMed] [Google Scholar]
Nickel JC, Moldwin R., Hanno P., Dmochowski R., Peters KM, Payne C., Wein A. Нацеливание на путь SHIP1 не дает результатов лечения интерстициального цистита / синдрома боли в мочевом пузыре : уроки, извлеченные из оценки потенциально эффективных методов лечения этого загадочного синдрома.J. Urol. 2019; 202: 301–308. [PubMed] [Google Scholar]
Онг CJ, Ming-Lum A., Nodwell M., Ghanipour A., Yang L., Williams DE, Kim J., Demirjian L., Qasimi P., Ruschmann J. Small- Молекулярные агонисты SHIP1 ингибируют фосфоинозитид-3-киназный путь в гемопоэтических клетках. Кровь. 2007; 110: 1942–1949. [PubMed] [Google Scholar]
Оуян У., О’Гарра А. Цитокины семейства IL-10 IL-10 и IL-22: от фундаментальных наук до клинического перевода. Иммунитет. 2019; 50: 871–891. [PubMed] [Google Scholar]
Оуян В., Rutz S., Crellin N.K., Valdez P.A., Hymowitz S.G. Регуляция и функции цитокинов семейства IL-10 при воспалении и болезнях. Анну. Rev. Immunol. 2011; 29: 71–109. [PubMed] [Google Scholar]
Паулс С.Д., Маршалл А.Дж. Регулирование передачи сигналов иммунных клеток с помощью SHIP1: фосфатазы, каркасного белка и потенциальной терапевтической мишени. Евро. J. Immunol. 2017; 47: 932–945. [PubMed] [Google Scholar]
Цяо З., Ся К., Шен С., Корвин Ф.Д., Лю М., Гуань Р., Грайдер Дж. Р., Цяо Л.Y. Подавление пути PI3K in vivo снижает вызванную циститом гипертрофию мочевого пузыря и восстанавливает емкость мочевого пузыря, исследованную с помощью магнитно-резонансной томографии. PLoS One. 2014; 9: e114536. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Сайренджи Т., Коллинз К.Л., Эванс Д.В. Обновленная информация о воспалительном заболевании кишечника. Prim. Забота. 2017; 44: 673–692. [PubMed] [Google Scholar]
Samiea A., Yoon J.S.J., Cheung S.T., Chamberlain T.C., Mui A.L. Интерлейкин-10 участвует в передаче сигналов PGE2 посредством активации EP4 через SHIP1 и STAT3.PLoS One. 2020; 15: e0230427. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Шувал Дрор С., Бисвас А., Геттель Джереми А., Макканн К., Конавей Э., Редху Нареш С., Масканфрони Иван Д., Аль Адхам З. , Lavoie S., Ibourk M. Передача сигналов рецептора интерлейкина-10 в клетках врожденного иммунитета регулирует иммунную толерантность слизистой оболочки и функцию противовоспалительных макрофагов. Иммунитет. 2014; 40: 706–719. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Shouval D.S., Ouahed J., Biswas A., Goettel J.A., Horwitz B.Х., Кляйн К., Муиз А.М., Снаппер С.Б. Глава пятая — Передача сигналов рецептора интерлейкина 10: главный регулятор гомеостаза слизистой оболочки кишечника у мышей и людей. В: Альт Ф.В., редактор. Успехи иммунологии. Академическая пресса; 2014. С. 177–210. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Stenton GR, Mackenzie LF, Tam P., Cross JL, Harwig C., Raymond J., Toews J., Chernoff D., Macrury T., Szabo C. Характеристика AQX-1125, низкомолекулярного активатора SHIP1: Часть 2. Исследования эффективности на моделях аллергического и легочного воспаления in vivo.Br. J. Pharmacol. 2013; 168: 1519–1529. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Stenton GR, Mackenzie LF, Tam P., Cross JL, Harwig C., Raymond J., Toews J., Wu J., Ogden N., Macrury T. , Сабо С. Характеристика AQX-1125, низкомолекулярного активатора SHIP1: Часть 1. Влияние на активацию воспалительных клеток и хемотаксис in vitro и фармакокинетические характеристики in vivo. Br. J. Pharmacol. 2013; 168: 1506–1518. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Сидора Б.К., Тавернини М.М., Весслер А., Джуэлл Л.Д., Федорак Р.Н. Недостаток интерлейкина-10 приводит к воспалению кишечника независимо от времени, когда происходит микробная колонизация просвета. Воспаление. Кишечник. 2003; 9: 87–97. [PubMed] [Google Scholar]
Takeda K., Clausen BE, Kaisho T., Tsujimura T., Terada N., Forster I., Akira S. Повышенная активность Th2 и развитие хронического энтероколита у мышей, лишенных Stat3 в макрофагах и нейтрофилы. Иммунитет. 1999; 10: 39–49. [PubMed] [Google Scholar]
Verstockt B., Смит К.Г., Ли Дж.К. Исследования ассоциации генома при болезни Крона: прошлое, настоящее и будущее. Clin. Transl Immunol. 2018; 7: e1001. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Weaver B.K., Bohn E., Judd B.A., Gil M.P., Schreiber R.D. ABIN-3: молекулярная основа расхождения видов в противовоспалительных действиях, вызванных интерлейкином-10. Мол. Cell Biol. 2007. 27: 4603–4616. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
Ясукава Х., Охиси М., Мори Х., Мураками М., Чинен Т., Aki D., Hanada T., Takeda K., Akira S., Hoshijima M. IL-6 вызывает противовоспалительную реакцию в отсутствие SOCS3 в макрофагах. Nat. Иммунол. 2003. 4: 551–556. [PubMed] [Google Scholar]
Zigmond E., Bernshtein B., Friedlander G., Walker CR, Yona S., Kim K.-W., Brenner O., Krauthgamer R., Varol C., Müller W. Юнг С. Ограниченный макрофагами дефицит рецепторов интерлейкина-10, но не дефицит ИЛ-10, вызывает тяжелый спонтанный колит.