Смеси лечебно профилактические: 1.Лечебные и профилактические смеси для питания детей первого года жизни.

Helicobacter pylori — широко распространенный грамотрицательный патоген спиралевидной формы. Это основной возбудитель хронического гастрита и язвенной болезни, а также фактор риска злокачественных новообразований желудка (Patel et al., 2014). Штаммы пробиотиков могут снижать частоту появления H. pylori на 5–10%, и было обнаружено, что они успешно справляются с ремиссией связанных побочных эффектов (Alvi et al., 2016). Результаты двойного слепого плацебо-контролируемого исследования показали, что S.boulardii и Lactobacillus johnsonii La1 может снизить нагрузку на H. pylori , но не может вызвать полную ликвидацию патогена (Homan, Orel, 2015). Кроме того, было доказано, что S. boulardii улучшает скорость эрадикации в сочетании со стандартным терапевтическим протоколом эрадикации H. pylori . В случае Lactobacillus reuteri необходимы дальнейшие исследования, поскольку могут быть достигнуты хорошие результаты (Homan and Orel, 2015).Различные исследования показали, что скорость эрадикации H. pylori может быть улучшена путем предварительной обработки йогуртом, содержащим бифидобактерии, в течение 4 недель (Sheu et al., 2006). Кроме того, сетевой метаанализ из 140 исследований показал, что уровень эрадикации в контрольной (только стандартная терапия) и в группе, принимавшей пробиотики, составлял 70,5 и 84,1% соответственно. Напротив, частота нежелательных явлений составила 30,1 и 14,4% соответственно (Wang et al., 2017). Существуют убедительные доказательства в пользу использования пробиотиков в сочетании с антибиотиками для лечения H.pylori инфекция. Тем не менее, оптимальный пробиотический штамм, доза и продолжительность лечения еще не определены (Болтин, 2016).

Заболевания других отделов тела, кроме ЖКТ

Инфекции дыхательных путей

Инфекции дыхательных путей (ИРО) — часто встречающееся заболевание у людей, и большое количество этиологических агентов затрудняет разработку эффективных методов лечения. Недавние исследования показывают, что пробиотики могут снизить риск или продолжительность симптомов ИРО.Однако противовирусные механизмы пробиотиков еще не ясны (Lehtoranta et al., 2014).

Штамм-специфические эффекты пробиотиков против ИРТ до сих пор не имеют достаточных подтверждающих данных. Это очевидно из метаанализа Laursen и Hojsak (2018) 15 РКИ, в которых LGG и B. animalis subsp. lactis BB-12 перорально вводили детям дневного ухода. LGG значительно снизил ИРТ, а BB-12 не показал заметных результатов. Дальнейшие данные об эффективности пробиотического штамма BB-12 для лечения ИРО у детей не показали значительного профилактического эффекта (Hojsak et al., 2016). Однако Rautava et al. (2008) сообщили, что BB-12 в сочетании с LGG существенно снижает количество рецидивов ИРО у детей. В другом открытом клиническом исследовании РКИ йогурт с добавлением пробиотика Lactobacillus paracasei N1115, вводимый перорально в течение 12 недель людям среднего и пожилого возраста, оказался эффективным для смягчения ИРТ за счет увеличения количества Т-клеток (CD3 +), которые модулируют собственная иммунная система (Pu et al., 2017). Напротив, метаанализ 21 рандомизированного контролируемого испытания сообщил о недостаточных доказательствах, подтверждающих терапевтический эффект пробиотиков против ИРО, за исключением пробиотика L.casei LCA (Amaral et al., 2017).

Инфекции мочевыводящих путей

Инфекции мочевыводящих путей (ИМП) чаще встречаются у женщин, чем у мужчин, и часто повторяются. E. coli , Proteus , Klebsiella и Staphylococcus spp. являются кишечными уропатогенами, которые обычно считаются возбудителями. Пополнение вагинальных лактобацилл может быть полезным, поскольку истощение может привести к более высокому риску ИМП (Fontana et al., 2013).Было замечено, что высокий уровень колонизации влагалища пробиотиком Lactobacillus crispatus связан со значительным снижением частоты рецидивов ИМП (Stapleton et al., 2011). Метаанализ, сравнивающий частоту рецидивов ИМП у 294 взрослых женщин-пациентов в пяти исследованиях, не показал статистически значимой разницы в риске рецидива ИМП у пациентов, получавших пробиотические лактобациллы, по сравнению с контрольной группой. Однако при неэффективном удалении штаммов было обнаружено статистически значимое снижение у пациентов с рецидивирующими ИМП, получавших пробиотические лактобациллы (Grin et al., 2013). Wolff et al. (2019) провели двойное слепое РКИ, чтобы оценить, могут ли пероральные пробиотики вызывать изменения в соотношении уропатогенов / Lactobacillus (Ед / л) среди здоровых молодых женщин в пременопаузе. Пероральное введение L. rhamnosus GR-1 и L. reuteri RC-14 не вызывало значительных изменений в соотношении Е / л у здоровых женщин. Садеги-Бойд и др. (2020) провели РКИ среди здоровых детей, выздоровевших после первой лихорадочной ИМП. Пероральное вмешательство с пробиотической смесью л.acidophilus , L. rhamnosus , Bifidobacterium bifidum и Bifidobacterium lactis давали в течение 18 месяцев. Результаты показали, что E. coli и Klebsiella pneumoniae были двумя основными агентами, ответственными за рецидив ИМП у детей, в то время как пробиотики снижали риск рецидива ИМП. Аналогичные результаты были также получены Koradia et al. (2019) в двойном слепом плацебо-контролируемом пилотном исследовании эффективности, основанном на применении Bio-Kult Pro-Cyan (комбинация экстракта клюквы и двух штаммов лактобацилл) против рецидива ИМП у зрелых женщин в пременопаузе.26-недельное вмешательство продемонстрировало значительное профилактическое действие Bio-Kult Pro-Cyan при риске рецидива ИМП.

Хроническая болезнь почек

Хроническая болезнь почек (ХБП) — это глобальный летальный синдром, также называемый «тихой болезнью», характеризующийся прогрессирующим снижением функции почек, началом инфекции почек и преждевременной смертью. Заболеваемость сахарным диабетом, ожирением и гипертонией в значительной степени способствовала распространенности ХБП (Fagundes et al., 2018). Wang et al.(2015) сообщили о профилактических и терапевтических эффектах Lactobacillus и Bifidobacterium spp. у пациентов на перитонеальном диализе. Пероральный прием пробиотиков в течение 6 месяцев значительно снижает уровень эндотоксинов и провоспалительных цитокинов в сыворотке крови, фактор некроза опухоли альфа (TNF-α), интерлейкин (IL) -6 и IL-5, а также улучшает противовоспалительную активность цитокина IL-10. Сообщалось о значительных различиях в структуре и функциональности кишечной микробиоты у людей и животных с тяжелой ХБП.Наиболее очевидный эффект — снижение соотношения Bifidobacterium / Enterobacteriaceae . Кроме того, многие исследования утверждали, что ХБП связана с более низким количеством Bifidobacterium и Lactobacillus spp. В сочетании с распространенностью Enterobacteriaceae в кишечнике (Sircana et al., 2019).

Guida et al. (2017) исследовали симбиотический эффект пробиотиков на концентрацию пара-крезола в плазме (токсин уремии) у реципиентов почечного трансплантата в рандомизированном исследовании in vivo .Месячное испытание продемонстрировало, что пробиотики могут снижать концентрацию токсина уремии. Jia L. et al. (2018) провели метаанализ рандомизированных контролируемых вмешательств, чтобы оценить эффективность пробиотических добавок у взрослых пациентов с ХБП. Терапия пробиотиками может снизить уровень пара-крезилсульфата, повысить уровень IL-6 и улучшить барьерную функцию кишечника. Однако концентрации азота мочевины в крови, гемоглобина и сывороточного креатинина оставались постоянными независимо от размера выборки и небольшого количества исследований.Точно так же другой метаанализ пробиотиков в борьбе с ХБП, основанный на РКИ, показал более многообещающие результаты в отношении контроля уровня мочевины у недиализных пациентов с ХБП. С другой стороны, не было обнаружено значительного изменения скорости клубочковой фильтрации, концентрации мочевой кислоты, сывороточного креатинина и С-реактивного белка (Tao et al., 2019).

Бактериальный вагиноз

Бактериальный вагиноз (БВ) — это преобладающая вагинальная инфекция, которая в основном встречается у женщин раннего возраста, основным симптомом которых являются непрерывные нерегулярные выделения из влагалища не совсем белого цвета.Падение роста видов Lactobacillus и резкое разрастание вагинальных анаэробных грамотрицательных бактерий, то есть Gardnerella vaginalis , приводят к дисбалансу в микроэкологии влагалища (Masoudi et al., 2016). Патологическая тяжесть БВ связана с повышенным риском преждевременных родов, резкого аборта, воспаления тазовых органов и эндометрита. G. vaginalis — основной патоген, продуцирующий полимикробную биопленку, которая действует как связывающий агент против вагинальных эпителиальных клеток (Sabbatini et al., 2018).

Lactobacillus , Bifidobacterium и Saccharomyces spp. потенциально могут влиять на патологическую картину БВ. Sabbatini et al. (2018) продемонстрировали ингибирующий ответ пробиотика S. cerevisiae против инфекции G. vaginalis в испытаниях in vivo . Такие профилактические эффекты были основаны на различных действиях, таких как улучшение воспалительных цитокинов, замедление активности фермента сиалидазы и снижение на G.vaginalis связывается с эпителиальными клетками влагалища. Кроме того, в недавнем тесте на мышах пробиотический штамм Clostridium butyricum WZ001 не только подавлял рост G. vaginalis и снижал воспалительные цитокины, но также улучшал рост лактобацилл для нормализации микроэкологического баланса влагалища (Zhou et al., 2019). Мета-анализ РКИ на основе пробиотиков для лечения ВБ показал, что в настоящее время комбинированные методы лечения, то есть пробиотики плюс антибиотики, более эффективны, чем одноразовое применение обоих.Более того, пробиотики полезны и эффективны против инфекции BV, но эффективность не ясна из-за качества и гетерогенности клинических испытаний (Li et al., 2019b).

Андрогенетическая алопеция

В нормальных условиях с человека ежедневно выпадает 50–100 волос. Однако, если выпадение волос составляет> 100 волос в день, то это симптом алопеции. Выпадение волос — это многофакторное заболевание, вызванное гормональными нарушениями, психологической нестабильностью (деменция, депрессия и стресс), плохим питанием, проблемой перхоти и химиотерапией (Choi et al., 2015). Ингибиторы 5-α-редуктазы обычно используются для лечения этого расстройства, особенно у мужчин. Однако различные исследования моделей доклинических и клинических вмешательств указали на потенциальную терапевтическую роль пробиотических добавок против андрогенетической алопеции за счет улучшения периферического кровообращения (Poller et al., 2017).

В испытании in vivo , Song et al. (2012) сообщили, что L. rhamnosus может оказывать стимулирующее влияние на рост волос. Ферментированные эссенции, приготовленные с использованием backryeoncho ( Opuntia ficus indica var.saboten) и L. rhamnosus показали значительные результаты в увеличении глубины и количества волосков у мышей без каких-либо побочных эффектов на массу тела и потребление пищи. Недавно Park et al. (2020) исследовали влияние обогащенных пробиотиками кимчи и чхонгукчан (традиционный корейский ферментированный соевый продукт), а именно двух ферментированных овощных продуктов, на андрогенную алопецию. В этом клиническом исследовании 4-месячное употребление продуктов, обогащенных пробиотиками, значительно увеличило количество и толщину волос за счет улучшения кровотока без каких-либо побочных эффектов со стороны кишечника, таких как диарея.

Кариес зубов

Мутанты Streptococcus — это микроорганизм, в основном вызывающий кариес зубов. Постепенное развитие биопленки полости рта поддерживается различными патогенными бактериями полости рта, при этом мутантов S. способствуют пролиферации за счет секреции экзополисахаридов (Lee and Kim, 2014). Lactobacillus и Bifidobacterium spp. являются основными пробиотиками, способствующими деминерализации зубов с максимальным повышением кислотности зубного налета. Однако регулярный прием пробиотиков быстро снижает уровень S.распространение мутантов (Hasslöf and Stecksén-Blicks, 2020). LGG использовался для подавления колонизации полости рта кариесогенными микроорганизмами, тем самым снижая частоту кариеса у детей (Twetman and Keller, 2012).

По данным López-López et al. (2017), обитатели полости рта более активно влияют на состояние здоровья полости рта по сравнению с комменсальной микробиотой кишечника. Об этом свидетельствует активность Streptococcus dentisani у здоровых субъектов с зубным налётом. Такая бактерия подавляет размножение нескольких патогенов полости рта, включая Streptococcus sobrinus и S.mutans , путем производства бактериоцинов. В Чили рандомизированное контролируемое исследование, проведенное с участием детей 2–3 лет в течение 10 месяцев, показало, что длительное и регулярное потребление молока с добавкой пробиотика L. rhamnosus SP1 значительно снижает развитие кариеса у детей дошкольного возраста (Rodríguez et al. , 2016). Точно так же 90-дневный прием пробиотика Streptococcus salivarius M18 детям обеспечил многообещающие результаты в отношении снижения кариеса зубов из-за способности штамма продуцировать бактериоцины.Более того, такой пробиотический штамм синтезирует ферменты декстраназы и уреазы, которые компенсируют зубной налет и кислотность слюны за счет колонизации слизистой оболочки полости рта (Di Pierro et al., 2015). Stensson et al. (2014) оценили, что регулярный и длительный прием L. reuteri ATCC 55730 может предотвратить кариес и гингивит у детей в течение первого года жизни.

Остеопороз

Остеопороз — это сложное метаболическое заболевание костей, при котором низкая костная масса, ухудшенные костные ткани и более высокая пористость костей приводят к потере плотности и прочности костей (Behera et al., 2020). Ремоделирование костей — это динамичный и естественный процесс, позволяющий справиться с повреждениями костей. Остеопороз также может возникать из-за дисбаланса ремоделирования костей (Collins et al., 2018). Микробиота кишечника играет ключевую роль в развитии остеопороза, поскольку дисбаланс кишечной микробиоты, особенно увеличение популяций фирмикутов, протеобактерий и бактероидетов, является одной из основных причин остеопороза. Этот систематический дисбаланс вызван различными возможными синдромами, включая ВЗК, синдром короткой кишки, систематическое воспаление, гипертиреоз, окислительный стресс, аномальный профиль соматостатина, неалкогольную жировую болезнь, глютеновую болезнь и сахарный диабет (Nath et al., 2018). Некоторые препараты, включая ингибиторы протеинкиназы, гепарин (антикоагулянты), глюкокортикоиды, фенобарбитал, циклоспорин, тиазолидиндион, цинакальцет, рифампицин и доксорубицин, также отрицательно связаны с остеопорозом. Такие препараты вызывают мальабсорбцию кальция, фосфора и витамина D (Aggarwal et al., 2019). Лю и др. (2019) подчеркнули многообещающую роль LGG в борьбе с потерей костной ткани нижней челюсти, вызванной тенофовиром, в исследованиях in vivo . В частности, LGG подавлял воспаление мезенхимальных стволовых клеток нижних челюстей и остеогенез.

Nath et al. (2018) продемонстрировали эффективное симбиотическое применение пребиотиков и пробиотиков на основе лактозы для замедления остеопороза за счет улучшения поглощения минералов через эпителий кишечника. Более того, преобразование нерастворимых неорганических солей в растворимые формы, защита участков всасывания минералов в кишечнике, запуск модуляции кальций-связывающих белков и минимизация взаимодействия минералов с фитиновыми кислотами являются основными действиями, о которых сообщается (Nath et al., 2018). Сравнительное исследование in vivo , проведенное для оценки эффективности пяти различных штаммов пробиотиков ( L. acidophilus , L. reuteri , L. casei , B. longum и B. coagulans ) против Медикаментозная потеря костной ткани после овариэктомии показала, что эффективность пробиотиков в основном зависит от штамма, и в целом более высокая эффективность была зарегистрирована для штаммов L. acidophilus и L. casei . Оба пробиотика были связаны с высокой концентрацией костного мозга, минеральной плотностью костной ткани и площадью кости (глобальная, бедренная, позвоночник и большеберцовая кость) (Montazeri-Najafabady et al., 2019). Аналогичные результаты были получены Collins et al. (2018) также: LGG и VSL3 # подавляли биомаркеры воспаления, то есть TNF-α, IL-17 и активатор рецептора лиганда ядерного фактора каппа-B (RANKL).

Болезнь рук, ног и рта

Заболевания рук, ног и рта (HFMD) — это вирусная инфекция, часто встречающаяся у детей. Энтеровирус A, то есть вирус Коксаки-A16 (CV-A16) и энтеровирус-A71 (EV-A71), несут ответственность за такое заболевание. Основные симптомы включают язвы во рту, лихорадку и поражения пузырьков на руках, ногах и бедрах (Xu et al., 2019). Патологически HFMD считается легкой формой, даже если она может спорадически вызывать миокардит, менингит, отек легких, энцефалит и летальные проблемы со стороны центральной нервной системы, такие как острый вялый паралич (Zhou et al., 2016). Вирус HFMD уязвим в кислых условиях. Fu et al. (2015) определили эффективную противовирусную активность HFMD чайного гриба благодаря его симбиотическому составу пробиотиков, то есть Saccharomyces pastorianus и Acetobacter xylinum , которые проявляют очень высокую кислотную активность. In vitro и in vivo интервенционных исследований, основанных на применении чайного гриба, предложили его использование в качестве потенциального лекарства против HFMD. Zhu et al. (2017) оценили эффективность кишечного пробиотического препарата «Golden Bifid» против тяжелой формы HFMD у детей. Пероральный прием Golden Bifid в течение 2 недель 63 пациентам с тяжелой формой HFMD дал впечатляющие результаты. Благодаря модуляции кишечного иммунитета, противовоспалительного профиля (IL-13, IL-4 и IL-10) и барьерной функции кишечника кишечные пробиотики могут обеспечить эффективную биотерапию при тяжелой HFMD.

Нарушения иммунитета

Облегчение симптомов пищевой аллергии

В последние несколько десятилетий заболеваемость аллергическими заболеваниями прогрессивно росла во всем мире, причем чаще в западных странах (Fishbein and Fuleihan, 2012). Развитие оральной толерантности требует связи с микробами. Фактически, плохое биоразнообразие кишечника в течение первых месяцев жизни было связано с развитием атопической экземы. Фактически, более низкие популяционные уровни лактобацилл и бифидобактерий были зарегистрированы в ЖКТ младенцев, у которых позже развились аллергии (Kuitunen, 2013).Аллергические заболевания — это расстройства, в основном характеризующиеся чрезмерным иммунным ответом Th3 и ненужной воспалительной активацией клеток врожденного иммунитета. Предполагается, что повышенная частота аллергических реакций на некоторые пищевые продукты является результатом относительного снижения индукции микробов в кишечной иммунной системе в младенчестве и детстве (Castellazzi et al., 2013). Пробиотики могут улучшить симптомы, связанные с аллергией, за счет активации про-Т-хелперов 1 типа после контакта с бактериями.Однако для оптимизации результатов необходимо определить типы пробиотиков, время введения, индивидуальную микробиоту и диету (Hajavi et al., 2019).

Исследование пероральной иммунотерапии арахиса показало, что участники, получавшие LGG, были десенсибилизированы по сравнению с контрольной группой. В частности, терапевтический эффект пробиотиков был сосредоточен на стимулировании Т-регуляторных клеток (Tang et al., 2015). Согласно метаанализу, охватывающему 17 исследований, пробиотики могут значительно снизить риск детской экземы, что свидетельствует о новом потенциальном показании для использования пробиотиков при беременности и младенчестве (Zuccotti et al., 2015). Недавно было доказано, что L. rhamnosus Lr-0601 может модулировать баланс Th2 / Th3 и Treg / Th27 у мышей, сенсибилизированных овальбумином (Song et al., 2020). На модели мышей с FA, индуцированной овальбумином, Li N. et al. (2020) наблюдали аномальный бактериальный состав кишечника, сопровождающийся повышенным уровнем иммуноглобулина G, иммуноглобулина E и интерлейкина-4 / интерферона-гамма. По мнению авторов, Bifidobacterium breve M-16V может изменять микробиоту кишечника, тем самым облегчая симптомы аллергии за счет передачи сигналов IL-33 / ST2.

Аутоиммунные заболевания

Аутоиммунные заболевания связаны с потерей устойчивости иммунной системы, что приводит к патологическим иммунным ответам. У аутоиммунных субъектов более высокая генетическая предрасположенность к аутореактивности. Диабет 1 типа (T1D), рассеянный склероз (MS), ревматоидный артрит (RA) и системная красная волчанка (SLE) являются наиболее распространенными аутоиммунными заболеваниями (Davidson and Diamond, 2010). Различные аутоиммунные заболевания имеют более высокую тенденцию к женскому полу; некоторые исследования на животных демонстрируют влияние кишечного метаболизма на гормональный статус и гендерные предубеждения при аутоиммунных заболеваниях.Микробиота кишечника может быть основным фактором регулирования иммунных ответов и аутоиммунных заболеваний с помощью различных стратегий (Yousefi et al., 2019). РА поражает суставы тела, вызывая эрозию хрящей, костей и, в конечном итоге, деформации суставов. Согласно недавнему метаанализу РКИ терапевтического эффекта пробиотиков на РА, пробиотики могут подавлять провоспалительный цитокин ИЛ-6 — биомаркер РА, но клиническое воздействие конкретного пробиотика до сих пор неизвестно (Mohammed et al., 2017). Ежедневный пероральный прием пробиотических капсул ( л.acidophilus , L. casei и B. bifidum ) у 30 пациентов с РА в течение 8 недель значительно снизили уровень инсулина, концентрацию С-реактивного белка и показатель активности заболевания 28 суставов (Zamani et al., 2016 ).

Рассеянный склероз — это хроническое неврологическое заболевание, которое поражает центральную нервную систему из-за отека и повреждения нервной ткани. Пробиотики могут играть ключевую роль в восстановлении микробного и иммунного баланса у субъектов с РС (Sales-Campos et al., 2019). Клинических исследований, посвященных лечению рассеянного склероза пробиотиками, сравнительно меньше по сравнению с исследованиями других аутоиммунных заболеваний. Вмешательство с пробиотическими капсулами ( L. acidophilus , L. casei , B. bifidum и Lactobacillus fermentum ) у 60 пациентов с РС снизило воспалительные маркеры, такие как С-реактивный белок и метаболиты оксида азота в плазме. Неожиданно эта пробиотическая смесь также снизила уровень инсулина в крови, функцию β-клеток и общее соотношение липопротеинов высокой плотности (Kouchaki et al., 2017).

T1D связан с разрушением В-клеток поджелудочной железы, то есть основных продуцентов инсулина. Этот недостаток выработки инсулина напрямую влияет на уровень глюкозы в крови (Sales-Campos et al., 2019). В одном из комплексных когортных исследований, озаглавленных «Экологические детерминанты диабета у молодежи (TEDDY)», 7 473 финских ребенка из Германии, Швеции и США в возрасте от 4 до 10 лет с высоким генетическим риском СД1 были обследованы. подвергается добавлению пробиотиков. Результаты показали, что прием пробиотиков может снизить частоту возникновения островкового аутоиммунитета (Uusitalo et al., 2016).

Распространенность почечных и сердечно-сосудистых заболеваний у пациентов с СКВ выше, чем в общей популяции. Несмотря на убедительные доказательства положительного влияния пробиотиков на развитие аутоиммунитета при СКВ, профилактические эффекты пробиотиков при почечных и сердечно-сосудистых заболеваниях у людей еще не установлены (de la Visitación et al., 2019).

Нарушения обмена веществ

Противораковые эффекты

Рак — вторая причина смерти среди неинфекционных хронических заболеваний.Это приводит к потере естественного апоптотического клеточного цикла из-за спонтанного накопления различных мутагенов в процессе репликации ДНК (Tomasetti and Vogelstein, 2015). В настоящее время лечение рака основано на химиотерапии, лучевой терапии и иммунотерапии. Однако такие терапевтические методы лечения подвергают онкологических больных более чем одному серьезному побочному эффекту для здоровья. Клинические и доклинические исследования были проведены с целью оценки эффективности введения пробиотиков для лечения рака путем улучшения кишечного эубиоза (Vivarelli et al., 2019) (). Противораковая активность пробиотиков заключается в стабилизации микрофлоры кишечника, укреплении слизистого барьера ЖКТ, усилении противовоспалительного ответа и задержке пролиферации раковых клеток и развития метастазов (Eslami et al., 2019). Даже если пробиотики в целом признаны безопасными, все же существует потенциальный риск для больных раком с ослабленным иммунитетом пострадать от возможных инфекций (Vivarelli et al., 2019).

ТАБЛИЦА 3

In vitro и in vivo действие пробиотиков против рака.

LGG в настоящее время является одним из наиболее широко исследуемых штаммов для улучшения побочных эффектов, связанных с онкологической терапией. Антипролиферативные или антиметастатические эффекты LGG были всесторонне оценены на in vitro моделях рака груди, печени, яичников и колоректального рака. Помимо этого, LGG модулирует иммунную систему, способствуя подавлению роста опухолевых клеток (Behzadi et al., 2017; Mendes et al., 2018). Воспаление провоцирует рост рака через различные воспалительные клеточные пути в эпителиальных клетках.Противовоспалительный потенциал пробиотиков может противодействовать развитию рака различными путями, такими как повышенная секреция уровней иммуноглобулина A (IgA), регуляция циклооксигеназы-2 и модуляция ядерного фактора каппа B (NF-kB) и гамма-интерферона. (IFN-γ) (Shamekhi et al., 2020). Кроме того, подавление онкогенеза пробиотиками может быть связано с производством SCFA, ингибированием кишечных патогенов, активацией кишечных ферментов, вторичным снижением желчных кислот и потенциальным захватом канцерогенных молекул (Chong, 2014).Недавно Lagier et al. (2019) идентифицировали 11 пробиотических штаммов на основе микробиоты человека, способных вызывать противоопухолевый и противоинфекционный иммунитет. Более того, по-видимому, задействован специфический механизм колонизации слизистой оболочки слепой и толстой кишки и модуляция дендритных клеток CD103 + слизистой оболочки.

Ожирение

Ожирение считается глобальной эпидемией, приводящей к аномальному или чрезмерному накоплению жира, что может быть вредным для здоровья человека. Его этиология в основном связана с энергетическим дисбалансом наряду с другими факторами, включая генетические, экологические, гормональные и инфекционные агенты (Mirmiran et al., 2015). Дисбаланс кишечной микробиоты напрямую влияет на метаболические механизмы, что в конечном итоге приводит к нескольким метаболическим нарушениям, включая ожирение (León et al., 2019). Bifidobacterium и Lactobacillus spp. были связаны с улучшением целостности барьера. Krumbeck et al. (2018) описали симбиотическое влияние галактоолигосахаридов и штаммов Bifidobacterium на улучшение кишечной барьерной функции, но о синергических эффектах не сообщалось.Напротив, Ipar et al. (2015) продемонстрировали симбиотический эффект L. acidophilus , L. rhamnosus , B. bifidum , B. longum , E. faecium , плюс фруктоолигосахариды у детей с ожирением (). Через 4 недели у детей, получавших пробиотики, наблюдалось значительное снижение общего холестерина, холестерина липопротеинов низкой плотности и уровней окислительного стресса. По данным Кобыляк и соавт. (2018), комбинация пробиотиков и омега-3-жирных кислот доказала свою эффективность в борьбе с ожирением в исследовании in vivo .Недавнее исследование показало, что воздействие пробиотиков на ожирение зависит от штамма (Brusaferro et al., 2018). Различные исследования in vitro и in vivo продемонстрировали, что пробиотики, в частности L. casei , L. rhamnosus , L. gasseri , L. plantarum и Bifidobacterium , т. Е. B. longum , B. breve и B. animalis широко связаны со снижением веса и индекса жировой массы (Ejtahed et al., 2019). Что касается контроля веса, то наиболее многообещающими пробиотиками следующего поколения, вероятно, будут штаммы Akkermansia muciniphila . Эта грамотрицательная бактерия, разлагающая муцин, составляет от 3 до 5% микробного сообщества здоровых людей и обратно коррелирует с массой тела как у людей, так и у грызунов (Mazloom et al., 2019).

ТАБЛИЦА 4

In vitro и in vivo эффекты пробиотиков против метаболических нарушений.

Гиперхолестеринемия

Гиперхолестеринемия — это метаболический синдром, опосредованный аномальным уровнем холестерина в сыворотке и клетках (Kumar et al., 2012). Холестерин является важным биологическим воскообразным и жироподобным соединением, связанным с липопротеинами. Высокий уровень холестерина в сыворотке крови может иметь прямое отношение к возникновению многих тяжелых нарушений здоровья, например, ишемической болезни сердца, диабета II типа, гипертонии и атеросклероза (Chien et al., 2010).Кроме того, считается, что гиперхолестеринемия предрасполагает к неалкогольным жировым заболеваниям печени (Wang et al., 2019). В последнее время пробиотики, особенно лактобациллы и бифидобактерии, рассматриваются как новый терапевтический подход против гиперхолестеринемии (Pavloviæ et al., 2012). В механизмах снижения уровня холестерина пробиотиками наиболее важным считается фермент гидролаза желчных солей (BSH). В энтерогепатической циркуляции фермент BSH деконъюгирует соли желчных кислот, которые приводят к гидроксилированию конъюгированных гликодезоксихолевой и тауродезоксихолевой кислот.Этот метаболический механизм приводит к высвобождению глико- и тауробильных кислот (Anandharaj et al., 2020). Помимо активности BSH, предполагаемыми путями являются 3-гидрокси-3-метилглутарил-КоА-редуктаза, 7-α- и 27-α-гидроксилазы и белок Ниманна-Пика C1-подобный 1, но полное понимание все еще отсутствует (Hassan et al. , 2019).

Kim et al. (2017) исследовали эффективность пробиотической смеси Bifidobacterium ( B. longum , B. lactis и B.breve ) и Lactobacillus ( L. reuteri и L. plantarum ) у крыс с гиперхолестеринемией. Результаты показали значительное снижение общего холестерина и триацилглицерина и повышение уровня холестерина липопротеинов высокой плотности. Кроме того, в печени пробиотики снижали холестерин-опосредованные белки, включая белок 1, связывающий регуляторный элемент стерола, синтазу жирных кислот и ацетил-КоА-карбоксилазу (). Аналогичным образом Wang et al. (2019) сравнили in vivo с активностью BSH L.casei pWQH01, L. plantarum AR113 и L. casei LC2W. Штаммы AR113 и pWQH01 вызывали существенное снижение общего холестерина в сыворотке крови, массы тела, уровней холестерина липопротеинов низкой плотности и индекса атерогенности. Группа, получавшая пробиотический штамм LC2W, показала неудовлетворительные результаты. Согласно недавнему метааналитическому исследованию, потребление пробиотического йогурта вызывает значительное снижение общего уровня холестерина и холестерина низкой плотности у пациентов с легкой или умеренной гиперхолестеринемией.С другой стороны, пробиотический йогурт не оказал какого-либо ценного влияния на уровень холестерина липопротеинов высокой плотности (Pourrajab et al., 2020).

Сахарный диабет 2 типа

Сахарный диабет 2 типа (СД2) является четвертым по распространенности нетрансмиссионным заболеванием. Частая потеря веса, учащенное мочеиспускание, жажда и плохое заживление поражений стопы являются наиболее распространенными симптомами, которые впоследствии могут привести к осложнениям, таким как ишемическая болезнь сердца, ожирение, ретинопатия, сексуальная слабость, почечная недостаточность и атеросклероз (Sun J.и др., 2020). СД2 имеет многофакторные корни, включая физиологические, психологические, генетические факторы и факторы окружающей среды (Ardeshirlarijani et al., 2019). Недавние исследования показали, что микробиота кишечника играет решающую роль в возникновении и лечении СД2 (Vallianou et al., 2018). Пробиотики могут регулировать секрецию инсулина и гормональную секрецию кишечника. В основном глюкагоноподобный пептид 1 и пептид YY могут снижать накопление жира в клетках печени за счет модуляции L-клеток (Will et al., 2017).Более того, терапевтический потенциал пробиотиков против СД2 основан на улучшении барьерной функции кишечника, повышении чувствительности к инсулину и уровнях критинов, снижении уровней липополисахаридов в сыворотке крови, а также уменьшении стресса окислительного и эндоплазматического ретикулума. L. acidophilus KLDS1.0901 — новый многообещающий противодиабетический пробиотический штамм, что продемонстрировано ингибирующей активностью in vitro дипептидилпептидазы IV наряду с повышенным балансом уровня глюкозы в крови и замедленной инсулинорезистентностью и окислительным стрессом (Yan et al., 2020).

Zhang et al. (2020) проверили эффективность in vitro трех штаммов ( L. paracasei 1F-20, L. fermentum F40-4 и B. animalis subsp. lactis F1-7), чтобы понять механизм инсулинорезистентности. Все пробиотические штаммы хорошо выжили и гармонизировались с желудочно-кишечной средой, вызывая генетическую модификацию для увеличения секреции глюкагоноподобного пептида 1 и гормонов пептида YY, уменьшая накопление жира в клетках печени, улучшая уровень захвата глюкозы и замедляя воспалительную реакцию. через снижение уровней TNF-α и IL-6. In vivo исследование пробиотиков с дрожжами S. boulardii дало многообещающие результаты в контроле уровня гликемии и снижении воспалительных реакций и сердечно-сосудистых заболеваний (Brandão et al., 2018). В другом исследовании in vivo пробиотики л . rhamnosus , L. acidophilus и B. Bifidum положительно повлияли на популяцию Bacteroidetes , тогда как популяция Firmicutes сократилась.Кроме того, было доказано, что высококалорийная диета оказывает негативное влияние на микробиоту кишечника, снижая толерантность к глюкозе и увеличивая воспаление и проницаемость кишечника (Bagarolli et al., 2017). Kesika et al. (2019) объяснили, что общая эффективность РКИ не ясна из-за некоторых ограничений, которые включают размер выборки, подготовку добавок, мониторинг вмешательства, стратегии выборки, несогласованность в измерениях и систематическую ошибку анкеты. Авторы подчеркнули, что необходимы дальнейшие хорошо спланированные исследования, чтобы понять связь между ролью микробиома, взаимодействием пробиотиков с микробиотой хозяина и гликемическим контролем.

Нейродегенеративные расстройства

Психические заболевания называют когнитивными, эмоциональными и поведенческими нарушениями. Центральная нервная система и мозг в основном координируют друг друга для нормальных когнитивных функций. Однако любое нарушение этой координации приводит к нейродегенеративным расстройствам, таким как шизофрения, эпилепсия, деменция, аутизм, болезнь Паркинсона (БП) и болезнь Альцгеймера (БА). Воспаление и окисление — два фундаментальных фактора, которые вызывают нейродегенерацию из-за нарушения нормальных физиологических функций (Westfall et al., 2017). В настоящее время нет прямых лекарств от деменции, но медикаментозное лечение может отсрочить это расстройство (Li W. et al., 2020).

Болезнь Паркинсона

Болезнь Паркинсона является вторым наиболее распространенным осложненным нейродегенеративным заболеванием и возникает из-за дисфункции двигательной системы, которая вызывает повреждение дофаминергических нейронов в черной субстанции. Основными симптоматическими признаками БП являются изменчивость осанки и ригидность мышц. Однако были выявлены и немоторные проявления, включая дисбактериоз желудочно-кишечного тракта, обонятельные нарушения, эмоциональную и сенсорную нестабильность (Gazerani, 2019).Леводопа — наиболее часто применяемый препарат против БП; однако это лекарство имеет определенные ограничения в отношении дисбактериоза желудочно-кишечного тракта и дегенерации дофаминергических нейронов. Эти побочные эффекты повысили интерес к другим потенциальным биологическим методам лечения, таким как генная терапия, клеточная терапия и глубокая модуляция мозга. В последнее время GIT считается центром внимания из-за его центральной координации в разработке PD (Gazerani, 2019). У пациентов с БП наблюдалась более высокая проницаемость кишечного барьера, а также накопление кишечного α-синуклеина из-за усиления воспаления и окислительного стресса в кишечнике (Forsyth et al., 2011).

Доклинические и клинические интервенционные исследования полезных свойств пробиотиков пока еще ограничены. Воспаление, периферическая иммуномодуляция и окисление активными формами кислорода являются жизненно важными патологическими признаками БП. Magistrelli et al. (2019) провели интервенционное исследование in vitro с использованием штаммов пробиотиков Bifidobacterium и Lactobacillus на изолированных мононуклеарных клетках периферической крови, полученных от пациентов с БП.Сообщалось о многообещающих и эффективных результатах за счет снижения окислительного стресса и воспаления, а также улучшения барьерной функции кишечника. Кроме того, наблюдалось достаточное снижение роста кишечных патогенных микроорганизмов, то есть E. coli и K. pneumonia без ограничения уровней леводопы. Совсем недавно Hsieh et al. (2020) in vivo оценивал нейропротекторную эффективность ежедневного и длительного потребления пробиотиков на дофаминергические нейроны.Результаты показали, что регулярный прием пробиотиков существенно снизил двигательные нарушения в модели походки, функции равновесия и координации движений. Пробиотики могут защитить дофаминовые нейроны и предотвратить двигательную дисфункцию. Аналогичным образом, новый состав SLAB51, комбинация восьми различных штаммов Lactobacillus , Bifidobacterium и Streptococcus , был способен противодействовать пагубному влиянию 6-гидроксидофамина in vitro на моделях и in vivo . PD (Castelli et al., 2020).

Болезнь Альцгеймера

Болезнь Альцгеймера — наиболее распространенная нейродегенеративная форма деменции, характеризующаяся постепенным ухудшением памяти, мышления и реакции рассудка. Точный патологический механизм БА еще не подтвержден, но есть несколько факторов, участвующих в систематическом патогенезе. К ним относятся повышенная проницаемость кишечного барьера, повышенная продукция провоспалительных цитокинов и нарушение функциональности митохондрий, что приводит к чрезмерному количеству активных форм кислорода и окислению (Ton et al., 2020).

Обширные научные исследования показывают, что микробиота кишечника играет решающую роль в нейродегенеративном механизме БА. Нейроактивные соединения, такие как дофамин, мелатонин, серотонин и γ-аминомасляная кислота (ГАМК), производятся микробиотой кишечника (Szczechowiak et al., 2019). Однако некоторые кишечные бактерии синтезируют вредные липополисахариды и амилоидные пептиды, вызывая воспаление у пациентов с БА. Нестабильность кишечной барьерной функции также способствует нейровоспалению из-за контакта кишечной микробиоты с лимфоидными тканями (Jiang et al., 2017). Недавно исследований in vivo указали на положительное влияние пероральной бактериотерапии на модификацию кишечной микробиоты, что косвенно улучшает нейронные функции. Этот систематический механизм основан на улучшении генетической конфигурации, которое в дальнейшем отвечает за воспаление и нервную дисфункцию (Sochocka et al., 2019).

Наиболее распространенным признаком БА является когнитивный дефицит, который можно улучшить с помощью введения лактобацилл и видов бифидобактерий, как показано в недавнем исследовании in vivo (Mancuso and Santangelo, 2018).Однако Sun Z. et al. (2020) провели всестороннее исследование in vivo с использованием пробиотика C. butyricum для замедления нейровоспаления. Пробиотическое вмешательство в значительной степени предотвратило когнитивные нарушения, нейродегенерацию, стимуляцию микроглии, накопление Aβ и продукцию опухолевых биомаркеров (TNF-α и IL-1β). Модуляции кишечной микробиоты и метаболического бутирата также являются ключевыми явлениями, наблюдаемыми в этом исследовании. Что касается клинических испытаний, Ton et al. (2020) оценили эффективность кефирного вмешательства на основе пробиотиков в течение 3 месяцев у пациентов с БА с когнитивными нарушениями.Основными биомаркерами были уровни окислительного стресса, уровни цитокинов, когнитивные нарушения и повреждение клеток крови. Результаты показали удовлетворительное улучшение памяти и основных когнитивных функций у пациентов с БА за счет уменьшения воспаления, окисления и повреждения клеток.

Abraham et al. (2019) предложили комбинированную стратегию упражнений и добавок пробиотиков, то есть B. longum , L. acidophilus лизатов, витаминов и омега-3 жирных кислот против AD. В таком исследовании in vivo снижение когнитивного дефицита было связано с регуляцией кишечной микробиоты, улучшением бутирогенеза и снижением уровня бета-амилоидных бляшек.Было доказано, что церебральное поглощение глюкозы и нарушение метаболизма тесно связаны с патогенезом БА. Этот механизм был недавно обнаружен на мышах. Пероральное введение SLAB51 вызвало быструю модификацию кишечной микробиоты в отношении энергетического метаболизма и цикла гликолиза посредством модуляции переносчиков глюкозы и рецептора фактора роста-1 инсулина β. Улучшение когнитивных нарушений поддерживалось модуляцией протеолитического цикла, уменьшением β-амилоидных бляшек и увеличением концентрации нейропротекторных гормонов кишечной микробиоты (Abraham et al., 2019).

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Высокая профилактическая и терапевтическая эффективность рекомбинантного человеческого ACE2-Fc против инфекции SARS-CoV-2 in vivo

Экспрессия hACE2-Fc и мутантного hACE2-Fc

Fc-домен-слияние может продлить период полужизни и улучшить растворимость и стабильность интересующего белка ³⁵ . На основе аминокислотной последовательности hACE2, депонированной в GenBank, оптимизированные ECD последовательностей hACE2 лигировали с последовательностью ДНК Fc-сегмента человеческого IgG1 и вставляли в экспрессионную плазмиду.Рекомбинантные слитые белки hACE2-Fc экспрессировали клетками Expi293 (Thermo) и очищали с помощью магнитных шариков с протеином А. Кроме того, инактивированный hACE2 (мутированная форма, мутации h474N и h478N) также был получен, как описано выше, и назван мутантом hACE2-Fc. Очищенные белки анализировали с помощью SDS-PAGE, и концентрацию белка определяли с помощью анализа белка BCA.

Кинетика и определение сродства с помощью анализа SPR

Сродство связывания и кинетика мутанта hACE2-Fc и hACE2-Fc были выполнены методом SPR с использованием Biacore 8 K (GE healthcare).Иммобилизация белков SARS-CoV-2 RBD и SARS-CoV-2 spike ECD (внеклеточные домены, 16–1213 а.о.) выполнялась при 25 ° C, а HBS-EP использовался в качестве рабочего буфера. Поверхность сенсорного чипа проточных ячеек 1 и 2 активировали свежей смесью 50 ммоль / л N-гидроксисукцинимида (NHS) и 200 ммоль / л гидрохлорида 1-этил-3- (3-диметиламинопропил) карбодиимида (EDC) в течение 200 с ( 10 мкл / мин). Затем в проточную кювету 2 вводили RBD или спайковые белки ECD, разведенные в 10 ммоль / л NaAC (pH 4,5) для достижения конъюгации соответствующей единицы ответа, соответственно, в то время как проточная кювета 1 была установлена ​​как холостая.После реакции аминового связывания оставшиеся активные сайты связывания на поверхности чипа блокировали 200-секундной инъекцией 1 моль / л гидрохлорида этаноламина. Затем разбавленный hACE2-Fc вводили по поверхности в качестве фазы ассоциации с последующей инъекцией рабочего буфера в качестве фазы диссоциации.

ELISA-анализ.

ELISA использовали для определения EC ₅₀ s hACE2 против белков spike или RBD. Спайковые белки ECD SARS-CoV-2 RBD и SARS-CoV-2 покрывали 96-луночным планшетом (0.5 мкг / мл) при 4 ° C в течение ночи. После блокирования в течение 2 часов 10% фетальной бычьей сывороткой при 37 ° C добавляли серийно разведенный hACE2-Fc и инкубировали в течение 2 часов. После отмывки в качестве вторичного антитела использовали конъюгированные с HRP мышиные антитела против человеческого IgG (H + L) (Jackson ImmunoResearch). Наконец, после тщательной промывки в планшеты добавляли ТМБ в качестве раствора субстрата. Значение OD ₄₅₀ было получено с использованием устройства для считывания микропланшетов (BioTek instruments, Inc).

Тест нейтрализации на основе псевдотипированного вируса SARS-CoV, SARS-CoV-2 и HCoV-NL63 (pp)

SARS-CoV pp и SARS-CoV-2 pp были созданы лентивирусной псевдотипной системой, как описано ранее ^{66, 67} .Вкратце, клетки HEK293 котрансфицировали репортерной плазмидой plenti-GFP-luc, упаковывающей плазмидой psPAX2 и представляющей интерес плазмидой с шипом коронавируса (pcDNA3.1-SARS-CoV-S, pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S , pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S-D614G, pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S-V367F, pcDNA3.1-B.1.1.7-S, pcDNA3.1-B.1.351-S , pcDNA3.1-B.1.351-S, pcDNA3.1-B.1.617.1-S и pcDNA3.1-B.1.617.2-S) липофектамином 2000 (Thermo). Вирусный супернатант собирали и использовали для теста нейтрализации через 48 часов после трансфекции. HCoV-NL63 pp был создан псевдотипированной системой вируса везикулярного стоматита (VSV) ³³ .Спайк-плазмиду HCoV-NL63 (pcDNA3.1-HCoV-NL63-S) трансфицировали в Т-клетки 293, через 24 часа трансдуцированные клетки-мишени инфицировали rVSV-ΔG-luc, и вирусный супернатант собирали через 24 часа после трансдукции. Lenti-X p24 Rapid Titer Kit использовали для титрования лентивирусов на основе ВИЧ-1 (Takara Bio, Cat. No. 632200). Вкратце, захватывающее антитело против ВИЧ-1 p24 было нанесено на 96-луночный планшет для ELISA, а затем были добавлены серийно разведенные тестовые образцы и стандарты. Специфически связанный p24 детектировали в типичном формате сэндвич-ELISA с использованием биотинилированного вторичного антитела против p24, конъюгата стрептавидин-HRP и субстрата, продуцирующего окраску.Песудотипированный вирус SARS-CoV-2 WT и его варианты были нормализованы на основе результата набора для ELISA p24, и для заражения использовали идентичную множественность инфекции (MOI). Анализ нейтрализации SARS-CoV-pp и SARS-CoV-2-pp выполняли на клетках HEK293 с избыточной экспрессией ACE2 (клетка HEK293-ACE2) в 96-луночном микропланшете ⁶⁸ , тогда как анализ нейтрализации pp HCoV-NL63 проводили на Huh7. ячейка, как описано ранее ³³ . Вкратце, 50 мкл серийно разведенных гибридных белков добавляли к равному объему коронавируса pp и инкубировали в течение 60 мин при 37 ° C, затем 100 мкл смеси добавляли в 96-луночный планшет, который засевали клетками-мишенями (HEK293- Клетки ACE2 или Huh7) при соответствующей плотности за 18 ч до заражения.Клетки инкубировали 40 ч при 37 ° C, а затем лизировали. Люциферазную активность измеряли с использованием системы анализа устойчивой люциферазы Glo (Promega).

Анализ формирования фокуса (FFA) для количественной оценки SARS-CoV-2

Все эксперименты по заражению SARS-CoV-2 проводились в лаборатории с уровнем биобезопасности 3. Клетки Vero E6 высевали на 96-луночные планшеты в течение ночи и выращивали в конфлюэнтные монослои. Пятьдесят микролитров 10-кратно разведенного исходного материала SARS-CoV-2 или супернатанта гомогената легких добавляли в 96-луночный планшет и адсорбировали при 37 ° C в течение 1 часа с покачиванием каждые 10 минут.Затем вирус или супернатант гомогената легких удаляли и покрывали 100 мкл минимальной необходимой среды (MEM), содержащей 1,2% карбоксиметилцеллюлозы (1,2% CMC). Через 24 часа после заражения верхний слой удаляли, а клеточный монослой фиксировали 4% раствором параформальдегида в течение 2 часов при комнатной температуре (RT). После пермеабилизации 0,2% Triton X-100 в течение 20 минут при комнатной температуре планшеты последовательно окрашивали перекрестно-реактивным кроличьим анти-SARS-CoV-N IgG (Sino Biological Inc) в качестве первичного антитела и конъюгированным с HRP козьим анти-кроличьим антителом. IgG (H + L) (Jackson ImmunoResearch) в качестве вторичного антитела при 37 ° C в течение 1 часа соответственно.Реакции были разработаны с субстратами пероксидазы KPL TrueBlue. Количество очагов SARS-CoV-2 рассчитывали с помощью считывателя CTL ImmunoSpot S6 Ultra (Cellular Technology Ltd).

Тест нейтрализации уменьшения фокуса (FRNT) SARS-CoV-2

FRNT использовался для оценки эффекта нейтрализации hACE2-Fc. Клетки Vero E6 высевали в 96-луночный планшет за день до заражения. На следующий день серийно разведенные белки hACE2-Fc и SARS-CoV-2 (80–100 FFU, Focus-формирующая единица) были объединены в DMEM (среда Игла, модифицированная Дульбекко), содержащей 2% фетальной бычьей сыворотки, и инкубированы при 37 ° C в течение 1 дня. часЗатем смесь по пятьдесят микролитров добавляли в 96-луночный планшет, засеянный клетками Vero E6, и инкубировали при 37 ° C в течение 1 часа. Следующие шаги были такими же, как и метод FFA, упомянутый выше. IC ₅₀ s определяется тестовыми титрами нейтрализации уменьшения фокуса на 50% (FRNT ₅₀ ), которые использовали для оценки эффективности hACE2-Fc в ингибировании репликации SARS-CoV-2.

Анализ ингибирования слияния клетки-клетки

Анализ слияния клетки-клетки проводили, как описано ранее ⁶⁸ .Вкратце, плазмиды, кодирующие спайковый белок SARS-CoV-2 и pEGFP, котрансфицировали в клетку HEK293T. Через 48 часов после трансфекции эффекторные клетки (трансфицированные клетки HEK293T) собирали и инкубировали с серийно разведенным hACE2-Fc WT или мутантом при 37 ° C в течение 1 часа. Эффекторные клетки и клетки-мишени (клетки Huh7) смешивали 1: 1 с общей плотностью клеток 5 × 10 ⁴ в 96-луночных планшетах. Через 24 ч планшеты проверяли на образование синцитий под флуоресцентным микроскопом (цифровой инвертированный микроскоп EVOS, Invitrogen).

Анализ ускользающего мутанта SARS-CoV-2

Штамм SARS-CoV-2 (изолированный SARS-CoV-2 / human / CHN / IQTC01 / 2020, GenBank: MT123290.1), выделенный от инфицированного пациента, был пассирован в Клетки Vero E6 и культуры клеток Calu-3 с добавлением увеличивающейся концентрации серийно разведенного hACE2-Fc WT, в то время как тот же штамм SARS-CoV-2, пассированный без существования hACE2-Fc, использовали в качестве контроля. Пассажи проводились при MOI инфекции в диапазоне от 0,01 до 0,05 и концентрации hACE2-Fc в диапазоне от 0.От 4 × до 4 × IC ₅₀ (определено анализом нейтрализации аутентичного вируса SARS-CoV-2 в клетках Vero E6). Супернатант клеток Vero E6 собирали через 72 часа после заражения для следующего раунда пассажа с более высокой концентрацией hACE2-Fc, когда цитопатический эффект клеток достигал 50-60%, тогда как супернатант клеток Calu-3 собирали через 48 часов после заражения. Для выявления изменений в RBD, связанных с ускользанием hACE2-Fc, вирусная РНК была извлечена для секвенирования следующего поколения для определения мутантных сайтов. Последовательности анализировали с использованием CLC Genomics Workbench версии 11 (Qiagen) и MEGA 5.10.

Инфекция SARS-CoV-2 и иммунофлуоресцентное окрашивание обработанных hACE2-Fc HBE

HBE-клетки были получены с помощью волоконно-оптической бронхоскопии и чистки стенок дыхательных путей от здоровых доноров и культивированы на границе раздела воздух-жидкость (ALI) на трансвеллерах. как описано ^50,51 . Клетки поддерживали и размножали (один пассаж) в колбах Т75 в среде для размножения эпителиальных клеток дыхательных путей человека (PneumaCult-Ex Plus Medium Kit, Stemcell, № по каталогу 05040) при 37 ° C в инкубаторе с 5% CO ₂ .При 80% слиянии клетки отделяли 0,05% трипсин-ЭДТА (Gibco) и высевали на мембранные подложки (культуральные вставки Transwell 12 мм, размер пор 0,4 мкм, Costar), покрытые 0,05 мг коллагена из кожи теленка (Sigma-Aldrich) в среда для роста эпителиальных клеток дыхательных путей. Клетки HBE культивировали в течение двух дней до полного слияния. Затем удаляли апикальную среду, а базальную среду заменяли средой для эпителиальных клеток дыхательных путей человека, культивируемых на границе раздела воздух-жидкость (PneumaCult-ALI Medium Kit, Stemcell, № по каталогу 05001).Культуры поддерживали в условиях границы раздела воздух – жидкость, меняя среду в камере базального фильтра каждые 48 ч. Для заражения SARS-CoV-2 эпителиальные клетки культивировали в среде для дифференцировки, содержащей SARS-CoV-2, при 37 ° C в инкубаторе с 5% CO ₂ с 14 по 15 день перед сбором для анализа. Хорошо дифференцированные клетки HBE в проницаемых транслунцах достигают плотности 3,5–4,0 × 10 ⁵ клеток на лунку до инфицирования. Разбавленный hACE2-Fc WT / мутант (в концентрации 20 × или 2 × IC ₅₀ в аутентичном анализе нейтрализации клеток Vero E6, инфицированных SARS-CoV-2) и SARS-CoV-2 (MOI = 0.2) объединяли в среде для культивирования клеток HBE и инкубировали при 37 ° C в течение 1 часа. После промывки апикальной и базолатеральной поверхностей трансвеллеров фосфатно-солевым буфером Дульбекко (DPBS) к каждой из апикальных и базолатеральных поверхностей клеток HBE в трансвеллерах при 37 ° C в течение 1 часа добавляли смеси по пятьсот микролитров. Через 24 часа после инфицирования культуру клеток собирали для определения титра вируса, клетки HBE фиксировали 4% раствором параформальдегида в течение 2 часов при комнатной температуре. Мембраны инкубировали с 0,2% Triton X-100 в течение 10 мин, затем окрашивали моноклональным антителом J2 против дцРНК мыши (SCICONS, 10010200) и моноклональным антителом против MUC5AC кролика (Abcam, ab198294) в качестве первичных антител при 4 ° C в течение ночи.После окрашивания вторичными антителами козьего анти-мышиного IgG Alex Fluor 488 и вторичных антител козьего анти-кроличьего IgG Alex Fluor 568 и инкубации с окрашивающим ядром красителем (DAPI, Sigma – Aldrich LLC, D9542) в темноте мембраны вырезали из лунки и установлен на предметном стекле для визуализации (конфокальный микроскоп LSM 880, Zeiss).

Трансдукция Ad5-hACE2, введение hACE2-Fc и инфицирование SARS-CoV-2 мышей BALB / c

Ad5-hACE2-сенсибилизированные мыши полезны для оценки противовирусной терапии, как мы ранее описали ⁵ .Здесь мы использовали эту животную модель для оценки профилактической и терапевтической эффективности hACE2-Fc против инфекции SARS-CoV-2 in vivo. Вкратце, специфических свободных от патогенов 5-6-недельных самок мышей BALB / c (~ 15 г) слегка анестезировали изофлураном и трансдуцировали 2,5 × 10 ⁸ FFU Ad5-hACE2 за 5 дней до интраназального введения 1 × 10 ⁵ ФФУ SARS-CoV-2. В профилактической группе мышам вводили 50 мг / кг (750 мкг каждой) hACE2-Fc i.p. За 1 день до заражения.В терапевтической группе мышей лечили hACE2 через один день после внутрибрюшинного инфицирования. Ежедневно наблюдали за мышами на предмет потери веса. Легкие удаляли в PBS в указанные моменты времени и гомогенизировали. Титры вирусов в осветленных супернатантах анализировали в клетках Vero E6 и выражали как FFU на грамм ткани. Вся работа с SARS-CoV-2 проводилась в лаборатории технологического центра таможенного округа Гуанчжоу, уровень биобезопасности 3 (BSL-3).

Гистологический анализ

Через четыре дня после заражения мышей анестезировали и транскардиально перфузировали PBS с последующим введением цинкового формалина.Легкие удаляли, фиксировали в формалине цинка, заливали парафином и делали срезы толщиной 4 мкм. Срезы окрашивали гематоксилином / эозином для гистологического анализа. Фотомикрофотографии получали с помощью PRECICE 500B (UNIC TECHNOLOGIES, INC). Отек, некротические клеточные остатки и мононуклеары оценивались по следующим критериям: 0 — нет; 1 — нечастое обнаружение в <5% легочных полей; 2 - обнаруживается до 33% полей легких; 3 - обнаруживается в 33–66% легочных полей; 4 - обнаруживается в> 66% полей легких.Инфильтрацию нейтрофилов оценивали по следующим критериям: 0 — в пределах нормы; 1 — рассеянные PMN, секвестированные в перегородках; 2 — №1 плюс одиночные PMN выходят в воздушное пространство; 3— №2 плюс мелкие агрегаты на судне и в воздушном пространстве ⁵ .

Секвенирование РНК и анализ данных

Тотальную РНК экстрагировали из легких инфицированных мышей с использованием реагента Trizol (invitrogen). Рибосомную РНК удаляли с помощью набора для удаления рРНК EpicentreRibo-Zero (illumina, США). Согласно предыдущим отчетам ⁵ , процедуры секвенирования были выполнены следующим образом.Вкратце, очищенные РНК фрагментировали примерно до 200 п.н., а собранные РНК подвергали синтезу кДНК. Библиотеки секвенировали по парным концам (PE150, 2 × 150 п.н.) с использованием платформы IlluminaHiSeq 3000. Чистые данные были сопоставлены с эталонным геномом мыши (мм10) с помощью программного обеспечения HISAT2 ⁶⁹ . HTSeq v0. 6.0 использовали для подсчета числа считываний, сопоставленных с каждым геном ⁷⁰ . Уровни экспрессии для всего образца были представлены в виде транскриптов на килобазу модели экзона на миллион отображенных считываний (TPM), что является наиболее часто сообщаемыми значениями экспрессии гена RNA-seq.Статистически значимые гены DE были получены с помощью скорректированного порогового значения P <0,05 и log2 (кратное изменение)> 1 с использованием программного обеспечения DEGseq ⁷¹ . Наконец, был проведен иерархический кластерный анализ с использованием gplots языкового пакета R в соответствии со значениями TPM дифференциальных генов в разных группах. И цвета представляют различную информацию о кластеризации, такую ​​как аналогичный образец экспрессии в одной и той же группе, включая аналогичные функции или участие в одном и том же биологическом прогрессе ⁷² .Все основные серии данных были представлены в NCBI SRA с регистрационным номером SRP286817 (BioProject: PRJNA667999).

Фармакокинетические свойства hACE2-Fc у мышей.

Мышам BALB / c, специфичным для дикого типа, свободным от патогенов, вводили внутрибрюшинно. с 50 мг / кг (750 мкг каждого) hACE2-Fc. Образцы сыворотки были собраны у мышей ( n = 12, всего) через 0 минут, 15 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 10 часов, 24 часа, 2 дня, 3 дня, 6 дней, 9 дней, 12 дней. d, 16 d и 22 d почтовое администрирование. Концентрацию hACE2-Fc в сыворотке анализировали путем обнаружения IgG-Fc с помощью ELISA.Вкратце, 96-луночный планшет был покрыт спайковым белком SARS-CoV-2. hACE2-Fc определяли с помощью конъюгированного с HRP мышиного антитела против человеческого IgG-Fc и TMB. Индивидуальные параметры PK оценивали с использованием метода некомпартментного анализа (NCA) с WinNonlin (версия 8.1). Были рассчитаны или определены следующие параметры: площадь под кривой (AUC), максимальная концентрация в плазме (C _max ), время достижения максимальной концентрации в плазме (T _max ), конечный период полувыведения (t _1/2 ). ), AUC от нуля до бесконечности (AUC _inf ) и среднее время пребывания (MRT).

Номера доступа

Данные RNA-seq, подтверждающие открытие в этом исследовании, были депонированы в NCBI SRA с регистрационным номером SRP286817 (BioProject: PRJNA667999).

Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием программного обеспечения Graphpad Prism, версия 8.00. Тест Стьюдента t использовался для анализа различий в средних значениях между группами. Логарифм (ингибитор) в зависимости от ответа — для определения IC ₅₀ использовали тест с переменным наклоном (четыре параметра).Для корреляционного анализа использовалась линейная регрессия (анализ Пирсона). Для статистического анализа были выполнены множественные сравнения после однофакторного дисперсионного анализа и теста Краскела – Уоллиса. Поправка Бонферрони использовалась, чтобы избежать увеличения экспериментальной ошибки типа I. P -значения <0,05 были статистически значимыми. (* P ≤ 0,05, ** P ≤ 0,01, *** P ≤ 0,001, **** P ≤ 0,0001). Все значения представлены как среднее ± SEM.

Терапевтическое использование магния — Американский семейный врач

2.Алаймо К, Макдауэлл, Массачусетс, Брифель РР, и другие. Диетическое потребление витаминов, минералов и клетчатки людьми в возрасте 2 месяцев и старше в Соединенных Штатах: Третье национальное обследование здоровья и питания, фаза 1, 1988–91 Adv Data . 1994; (258): 1–28.

3. Marier JR. Содержание магния в продуктах питания в современном мире. Магний . 1986; 5 (1): 1–8.

4. Томас Д. Исследование истощения запасов полезных ископаемых в пищевых продуктах, доступных нам как нации, в период с 1940 по 1991 год. Nutr Health . 2003. 17 (2): 85–115.

5. LaValle JB. Скрытые нарушения метаболического синдрома: вызванное лекарствами истощение питательных веществ как путь к ускоренной патофизиологии метаболического синдрома. Альтернативная медицина Ther Health . 2006. 12 (2): 26–31.

6. Герреро-Ромеро Ф, Родригес-Моран М. Гипомагниемия связана с низким уровнем холестерина ЛПВП в сыворотке крови независимо от уровня глюкозы в сыворотке. J Осложнения диабета . 2000. 14 (5): 272–276.

7. Gropper SS, Смит JL, Groff JL. Магний. Продвинутое питание и метаболизм человека . 4-е изд., Бельмонт, Калифорния:: Издательство Уодсворта; 2005

8. Совет по пищевым продуктам и питанию, Институт медицины. Нормы потребления кальция, фосфора, магния, витамина D и фторида с пищей . Вашингтон, округ Колумбия: Национальная академия прессы; 1997.

9. Elin RJ. Магний: пятый, но забытый электролит. Ам Дж. Клин Патол . 1994. 102 (5): 616–622.

10. Такая Дж., Хигашино Х, Кобаяши Ю. Внутриклеточный магний и инсулинорезистентность. Magnes Res . 2004. 17 (2): 126–136.

11. Ньюхаус Ай Джей, Finstad EW. Влияние добавок магния на физическую работоспособность. Clin J Sport Med . 2000. 10 (3): 195–200.

12. Бол. Volpe SL. Магний и упражнения. Crit Rev Food Sci Nutr .2002. 42 (6): 533–563.

13. Грубый РК, Shils ME. Магний. В: Shils ME, Шике М, Росс AC, Кабальеро Б, Кузинс Р.Дж. , ред. Современное питание в условиях здоровья и болезней . 10-е изд. Филадельфия, Пенсильвания: Lippincott Williams & amp; Уилкинс; 2005: 223–248.

14. Чубанов В, Гудерманн Т, Schlingmann KP. Существенная роль TRPM6 в эпителиальном транспорте магния и гомеостазе магния в организме. Арка Пфлюгерса . 2005. 451 (1): 228–234.

15. Паолиссо Г, Барбагалло М. Гипертония, сахарный диабет и инсулинорезистентность: роль внутриклеточного магния. Am J Hypertens . 1997. 10 (3): 346–355.

16. Барбагалло М, Домингес Л.Дж., Галиото А, и другие. Роль магния в действии инсулина, диабете и кардиометаболическом синдроме X. Mol Aspect Med . 2003. 24 (1–3): 39–52.

17. Суарес А, Пулидо Н, Касла А, Казанова Б, Арриета Ф.Дж., Ровира А. Нарушение тирозинкиназной активности мышечных рецепторов инсулина крыс с гипомагниемией. Диабетология . 1995. 38 (11): 1262–1270.

18. Ю. Ю., Ли СК, Ян С.Д. Влияние концентраций Mg2 + на фосфорилирование / активацию киназы фосфорилазы b cAMP / Ca (2 +) — независимой, зависимой от аутофосфорилирования протеинкиназой. J Protein Chem . 1995. 14 (8): 747–752.

19. Арнер П., Pollare T, Лителл H, Ливингстон Дж. Н. Дефектная тирозинкиназа рецептора инсулина в скелетных мышцах человека при ожирении и сахарном диабете 2 типа (инсулиннезависимый). Диабетология . 1987. 30 (6): 437–440.

20. Witlin AG, Сибай БМ. Терапия сульфатом магния при преэклампсии и эклампсии. Акушерский гинекол . 1998. 92 (5): 883–889.

21. Дулей Л., Хендерсон-Смарт Д. Сульфат магния против фенитоина при эклампсии. Кокрановская база данных Syst Rev . 2003; (4): CD000128.

22. Дулей Л., Гюльмезоглу AM. Сульфат магния против литического коктейля при эклампсии. Кокрановская база данных Syst Rev . 2001; (1): CD002960.

23. Белфорт М.А., Энтони Дж, Сааде Г.Р., Аллен Дж. К. Младший, для исследовательской группы нимодипина. Сравнение сульфата магния и нимодипина для профилактики эклампсии. N Engl J Med . 2003. 348 (4): 304–311.

24. Дулей Л., Гюльмезоглу А.М., Хендерсон-Смарт Диджей. Сульфат магния и другие противосудорожные препараты для женщин с преэклампсией. Кокрановская база данных Syst Rev . 2003; (2): CD000025.

25. Альтман Д., Карроли Дж., Дулей Л., и другие. Польза от сульфата магния для женщин с преэклампсией и их детей? The Magpie Trial: рандомизированное плацебо-контролируемое исследование. Ланцет . 2002; 359 (9321): 1877–1890.

26. Банай С, Цивони Д. Медикаментозная терапия при пуантах. J Кардиоваск Электрофизиол . 1993. 4 (2): 206–210.

27. Оналан О, Кристалл E, Даула А, Лау С, Кристалл А, Лашевский И. Метаанализ терапии магнием для неотложной помощи при быстрой фибрилляции предсердий. Ам Дж. Кардиол . 2007. 99 (12): 1726–1732.

28.Башир Ы, Снеддон Дж. Ф., Стонтон HA, и другие. Эффект долгосрочной пероральной замены хлорида магния при застойной сердечной недостаточности, вторичной по отношению к ишемической болезни сердца. Ам Дж. Кардиол . 1993. 72 (15): 1156–1162.

29. Rowe BH, Bretzlaff JA, Бурдон С, Бота ГВ, Камарго Калифорния младший Сульфат магния для лечения обострений острой астмы в отделении неотложной помощи. Кокрановская база данных Syst Rev .2000; (2): CD001490.

30. Чеук Д.К., ТЦ Чау, Ли SL. Метаанализ внутривенного введения сульфата магния для лечения острой астмы. Арч Дис Детский . 2005. 90 (1): 74–77.

31. Фогарти А, Льюис С.А., Scrivener SL, и другие. Пероральные добавки магния и витамина С при астме: рандомизированное плацебо-контролируемое исследование в параллельных группах. Clin Exp Allergy . 2003. 33 (10): 1355–1359.

32.Блиц М, Блиц S, Бизели Р, и другие. Ингаляция сульфата магния при лечении острой астмы. Кокрановская база данных Syst Rev . 2005 (4): CD003898.

33. Маускоп А, Альтура БТ, Cracco RQ, Altura BM. Внутривенный сульфат магния снимает кластерные головные боли у пациентов с низким уровнем ионизированного магния в сыворотке крови. Головная боль . 1995. 35 (10): 597–600.

34. Маускоп А, Альтура БТ, Altura BM.Уровни ионизированного магния в сыворотке и соотношение ионизированного кальция / ионизированного магния в сыворотке крови у женщин с менструальной мигренью. Головная боль . 2002. 42 (4): 242–248.

35. Peikert A, Вилимциг С, Кёне-Волланд Р. Профилактика мигрени пероральным приемом магния: результаты проспективного многоцентрового плацебо-контролируемого двойного слепого рандомизированного исследования. Цефалгия . 1996. 16 (4): 257–263.

36. Pfaffenrath V, Уэссели П., Мейер С, и другие.Магний в профилактике мигрени — двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Цефалгия . 1996. 16 (6): 436–440.

37. Бигал М.Э., Бордини CA, Теппер С.Ю., Speciali JG. Внутривенное введение сульфата магния в остром лечении мигрени без ауры и мигрени с аурой. Рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. Цефалгия . 2002. 22 (5): 345–353.

38. Holtmeier W, Хольтманн Г, Каспары ВФ, Weingärtner U.Лечение по требованию острой изжоги антацидным гидротальцитом по сравнению с фамотидином и плацебо: рандомизированное двойное слепое перекрестное исследование. Дж Клин Гастроэнтерол . 2007. 41 (6): 564–570.

39. DeVault KR. Лечение симптомов перемежающегося рефлюкса: не всем подходит один размер [редакционная статья]. Дж Клин Гастроэнтерол . 2007. 41 (6): 546–547.

40. Рамкумар Д., Рао СС. Эффективность и безопасность традиционных методов лечения хронических запоров: систематический обзор. Ам Дж. Гастроэнтерол . 2005; 100 (4): 936–971.

41. Andrews CN, Bharucha AE. Обзор: веские доказательства поддерживают использование полиэтиленгликоля и тегасерода при запорах. ACP J Club . 2005; 143 (2): 47.

42. Стендиг-Линдберг Г, Теппер Р, Лейхтер И. Плотность трабекулярной кости в двухлетнем контролируемом исследовании перорального применения магния при остеопорзе. Magnes Res . 1993. 6 (2): 155–163.

43. Такер К.Л., Ханнан М.Т., Чен Х, Капплс Лос-Анджелес, Уилсон П.В., Кильский DP.Потребление калия, магния, фруктов и овощей связано с большей минеральной плотностью костей у пожилых мужчин и женщин. Am J Clin Nutr . 1999. 69 (4): 727–736.

44. He K, Лю К, Давиглус М.Л., и другие. Потребление магния и частота метаболического синдрома среди молодых людей. Тираж . 2006. 113 (13): 1675–1682.

45. Герреро-Ромеро Ф, Родригес-Моран М. Гипомагниемия, окислительный стресс, воспаление и метаболический синдром. Diabetes Metab Res. Ред. . 2006. 22 (6): 471–476.

46. Молодой Г.Л., Джуэлл Д. Вмешательства при судорогах ног при беременности. Кокрановская база данных Syst Rev . 2002; (1): CD000121.

47. Проктор М.Л., Мерфи PA. Травяные и диетические методы лечения первичной и вторичной дисменореи. Кокрановская база данных Syst Rev . 2001; (3): CD002124.

48. Gums JG. Магний при сердечно-сосудистых и других заболеваниях. Am J Health Syst Pharm . 2004. 61 (15): 1569–1576.

49. Martindale W, Парфит К. , eds Martindale: The Complete Drug Reference . 32-е изд. Лондон: Pharmaceutical Press; 1999.

50. Шилс М.Е., Olson JA. Современное питание в условиях здоровья и болезней . 8-е изд., Филадельфия, Пенсильвания: Lea & amp; Фебигер; 1994.

51. МакКевой Г.К. , изд. Информация о лекарствах AHFS . Bethesda, штат Мэриленд.: Американское общество фармацевтов систем здравоохранения; 1998.

52. ConsumerLab.com. Мультивитаминные / мультиминеральные добавки. http://www.consumerlab.com/results/multivit.asp. По состоянию на 13 января 2009 г.

53. Национальный центр дополнительной и альтернативной медицины. Магний и астма — клинические испытания. http://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00029510?term=%28NCCAM%29+%5BSPONSOR%5D+%28magnesium%29+%5BTREATMENT%5D&rank=1. По состоянию на 13 января 2009 г.

Антикоагулянтная терапия гепарином для госпитализированных пациентов с COVID-19

Категория: Инфекционные болезни и клиническая помощь

3 396 просмотров | 491 загрузки | Опубликовано: 3 сентября 2021 г.

Ключевое сообщение

тяжелобольные

Профилактическая доза низкомолекулярного или нефракционированного гепарина рекомендована тяжелобольным пациентам, госпитализированным с COVID-19.Эти пациенты не должны получать антикоагулянты в терапевтических дозах, если у них нет отдельных показаний для этого лечения. Антикоагулянтная терапия в терапевтических дозах у этой популяции пациентов не снижает потребность в опоре для органов и может увеличивать количество кровотечений по сравнению с профилактической дозой антикоагуляции.

Пациенты средней степени тяжести

Терапевтическая доза низкомолекулярного или нефракционированного гепарина может рассматриваться как профилактическая антикоагулянтная доза у пациентов средней степени тяжести, у которых риск кровотечения низкий.Все остальные пациенты должны получать антикоагулянтные дозы в профилактических дозах, если у них нет отдельного показания для применения антикоагулянтов в терапевтических дозах. Антикоагулянтная терапия в терапевтических дозах может снизить потребность в опоре для органов (включая потребность в высокопроизводительном назальном кислороде) и, по-видимому, снижает тромботические явления у пациентов средней степени тяжести по сравнению с антикоагулянтной терапией более низкой интенсивности. Его преимущества для выживаемости неясны, и он может увеличить частоту кровотечений. Учитывая небольшое абсолютное снижение риска важных для пациента исходов и известный вред, нельзя дать строгую рекомендацию по применению антикоагулянтов в терапевтических дозах для пациентов средней степени тяжести.

Тяжелобольные

Недостаточно доказательств, чтобы дать рекомендацию относительно антикоагулянтной терапии для пациентов с легкими заболеваниями.

Непрофессиональное резюме

Пациенты с COVID-19 могут заболеть из-за сочетания вирусной инфекции и воспаления, вызванного иммунной системой организма в ответ на эту инфекцию. Воспаление может привести к образованию тромбов, которые повреждают легкие, сердце, почки и другие жизненно важные органы.

Как работают низкие молекулярные массы и нефракционированный гепарин

Нефракционированный гепарин — разжижитель крови (также называемый антикоагулянтом).Низкомолекулярные гепарины (включая такие препараты, как далтепарин, эноксапарин и тинзапарин) также являются антикоагулянтами, которые получают из нефракционированного гепарина, который был расщеплен на более мелкие части. Эти антикоагулянты затрудняют свертывание крови и могут применяться в разных дозах для предотвращения образования сгустков (профилактическая доза) или для лечения сгустков (терапевтическая доза). Кроме того, лабораторные эксперименты, не проводившиеся на людях, свидетельствуют о том, что нефракционированные и низкомолекулярные гепарины могут уменьшать воспаление.Другие лабораторные эксперименты показали, что нефракционированный гепарин может предотвратить атаку вируса SARS-CoV-2 на клетки.

Как мы пришли к нашим рекомендациям

Чтобы понять влияние низкомолекулярного и нефракционированного гепарина на пациентов, госпитализированных с COVID-19, мы рассмотрели мультиплатформенное рандомизированное контролируемое исследование (РКИ) — исследование, в котором координировалось три аналогичных РКИ для предоставления информации о большей группе пациентов — и многоцентровое РКИ. В мультиплатформенных и многоцентровых РКИ сравнивали эффекты этих препаратов для лечения (терапевтические дозы) и профилактики (профилактические дозы).В этих исследованиях участвовали тысячи пациентов из самых разных стран. Они наблюдали за пациентами со средней степенью заболевания (которые получали кислород с низким потоком), а также с пациентами с тяжелым заболеванием (которым требовалась поддержка дыхания и / или кровообращения, включая высокий поток кислорода).

Наша рекомендация для пациентов, госпитализированных с COVID-19 с критическими заболеваниями

Пациенты, госпитализированные с тяжелым заболеванием COVID-19, не получают лечебной дозы антикоагулянтов и могут пострадать от сильного кровотечения или необходимости переливания крови.Им не следует получать антикоагулянты в терапевтических дозах, если они не нуждаются в этом при другом заболевании. Этим пациентам следует предложить профилактическую дозу антикоагулянтов.

Наша рекомендация для пациентов, госпитализированных с COVID-19 со средней степенью заболевания

Терапевтическая доза антикоагулянта может быть назначена пациентам, госпитализированным с заболеванием COVID-19 средней степени тяжести, которые, как считается, имеют низкий риск кровотечения, после обсуждения между пациентом и лечащим врачом.Это лечение может сократить количество дней, которые эти пациенты проводят, получая «интенсивную терапию», включая высокие дозы кислорода, аппарат искусственной вентиляции легких и / или лекарства, которые повышают их кровяное давление или помогают их сердцу перекачивать кровь. Антикоагулянтная терапия в терапевтических дозах может снизить смертность, но также может увеличить вероятность сильного кровотечения или необходимость переливания крови. По этим причинам антикоагулянтная терапия в терапевтических дозах может не подходить для всех пациентов. Всем пациентам, не получающим терапевтическую дозу, следует предлагать профилактическую дозу антикоагуляции, чтобы снизить вероятность образования тромбов.

Наша рекомендация для пациентов с COVID-19 с легкими заболеваниями

У нас недостаточно доказательств, чтобы дать рекомендации по антикоагулянтной терапии для пациентов с легкой формой заболевания COVID-19, которых обычно не госпитализируют. Как правило, эти пациенты не получают антикоагулянты, если они не нужны им при другом заболевании.

Побочные эффекты антикоагуляции

Самый частый побочный эффект антикоагулянтов — кровотечение.Более высокие дозы антикоагулянтов с большей вероятностью вызовут кровотечение. У пациентов средней степени тяжести, госпитализированных с COVID-19 и имеющих низкий риск кровотечения, преимущества антикоагуляции в терапевтических дозах могут перевешивать риск кровотечения. Другие пациенты могут получать более низкие профилактические дозы антикоагулянтов.

У тяжелобольных пациентов, госпитализированных с COVID-19, преимущества терапевтических доз антикоагулянтов не перевешивают риски кровотечения. Этим пациентам не помогает более высокая доза антикоагулянтов.Они должны получать более низкие профилактические дозы антикоагулянтов.

Сводка

Фон

тромбозах, связанных с COVID-19, спровоцированных глубоким воспалением и вирусным воздействием на клетки, с первых дней пандемии. ¹ Несмотря на использование профилактических доз антикоагулянтов, венозные и артериальные тромбозы, в том числе in situ тромбоз легких, тромбоз глубоких вен, тромбоэмболия легочной артерии, инфаркт миокарда, инсульт, тромбоз внутривенного катетера и ишемия конечностей, часто встречаются у пациентов с COVID. -19.В метаанализе исследований, в которых использовались различные стратегии тромбопрофилактики, сообщалось о венозной тромбоэмболии у 5,5% госпитализированных некритических больных и 18,7% тяжелобольных пациентов, когда пациенты не проходили скрининг на венозный тромбоз с помощью визуализации, а также у 23% и 45,6% пациентов. пациенты в некритическом и критическом состоянии, соответственно, при использовании рутинного скрининга. ²

Нефракционированные и низкомолекулярные гепарины обычно используются парентеральными антикоагулянтами для профилактики и лечения венозной и артериальной тромбоэмболии.Нефракционированный гепарин представляет собой смесь протеогликанов с различной длиной цепи, которые связываются с антитромбином, подавляя факторы свертывания крови. Низкомолекулярные гепарины, включая далтепарин, эноксапарин и тинзапарин, представляют собой молекулы с меньшей длиной цепи, фракционированные из гепарина, которые также связываются с антитромбином и ингибируют факторы свертывания крови Xa и IIa.

Помимо их антикоагулянтной активности, гепарины обладают противовоспалительным и, возможно, противовирусным действием. Противовоспалительные эффекты проявляются за счет ингибирования активации и функции нейтрофилов, взаимодействия с эндотелием сосудов для предотвращения экспрессии медиатора воспаления, предотвращения пролиферации гладкомышечных клеток сосудов, ³ и антикоагулянтной активности.Исследования in vitro показали, что нефракционированный гепарин может связываться со спайковым белком SARS-CoV-2 и действовать как конкурентный ингибитор проникновения вируса в клетку-хозяин. ⁴ Таким образом, была выдвинута гипотеза, что повышенная доза гепарина у пациентов с COVID-19 может улучшить результаты за счет нескольких механизмов.

Вопросы

Улучшает ли антикоагуляция такие исходы, как смертность, потребность в искусственной вентиляции легких и дни без поддержки органов для пациентов с COVID-19?

Каковы показания для назначения терапевтической и профилактической дозы гепарина пациентам в средней и тяжелой степени?

Каков риск сильного кровотечения у пациентов с тяжелыми и средними заболеваниями?

Выводы

Обзор ключевых испытаний

Многоплатформенная пробная версия , включая ATTACC, ACTIV-4a и REMAP-CAP

Рандомизированное мультиплатформенное исследование, включающее ATTACC, ACTIV-4a и REMAP-CAP, сравнивало терапевтическую антикоагуляцию с обычной тромбопрофилактикой (стандартная профилактическая или промежуточная доза) у госпитализированных пациентов с COVID-19.Набор критически больных когорт был прекращен 19 декабря 2020 года после того, как промежуточный анализ показал, что статистический критерий бесполезности был соблюден. 22 января 2021 года набор некритических больных был прекращен по рекомендации комиссий по мониторингу данных и безопасности после запланированного анализа данных в соответствии с адаптивным дизайном. Статьи с описанием обеих рук были опубликованы 4 августа 2021 года. ^5,6

В мультиплатформенном рандомизированном контролируемом исследовании использовался комбинированный первичный результат, объединяющий внутрибольничную летальность и количество дней без органной поддержки.Этот результат представлял собой порядковую шкалу, объединяющую внутрибольничную смертность (присвоено значение -1) и количество дней без поддержки органов (инвазивная или неинвазивная механическая вентиляция, высокопоточный назальный кислород, вазопрессорная терапия или экстракорпоральная мембранная оксигенация (ЭКМО)). до 21 дня (худший балл -1 и лучший результат 21). Например, пациенту, который умер на 18-й день, будет присвоен балл -1, а пациенту, который выжил и больше не нуждался в поддержке органов на 15-й день, будет присвоен балл 6. В мультиплатформенном РКИ также учитывались другие важные для пациента исходы. такие как выживаемость до выписки из больницы без тромбоза, кровотечения, выживаемость до выписки из больницы, выживаемость без поддержки органов в течение 28 дней и выживаемость без интубации; они считались вторичными исходами.

В испытание в когорте критически больных приняли участие 1089 пациентов в период с 21 апреля 2020 г. по 19 декабря 2020 г. в 10 странах (Великобритания, Ирландия, Нидерланды, Австралия, Новая Зеландия, Саудовская Аравия, Канада, США, Бразилия и Мексика). В исследование когорты умеренно больных приняли участие 2219 пациентов в период с 21 апреля 2020 г. по 22 января 2021 г. в 9 странах (США, Канада, Великобритания, Бразилия, Мексика, Непал, Австралия, Нидерланды и Испания). Существенная часть пациентов в этом мультиплатформенном исследовании не получала других видов лечения с продемонстрированными доказательствами его пользы: только 60% умеренно больных пациентов принимали кортикостероиды (терапия, которая в настоящее время почти повсеместно используется в этой популяции), 0.5% получали тоцилизумаб и 36% — ремдесивир.

RAPID Trial

Рандомизированное многоцентровое исследование RAPID, сравнивающее терапевтическую антикоагуляцию с тромбопрофилактикой (стандартная профилактическая доза) у госпитализированных пациентов с COVID-19 средней степени тяжести, завершило регистрацию 12 апреля 2021 года и было опубликовано в виде препринта 12 июля 2021 года. ⁷

Первичный результат исследования RAPID включал поступление в отделение интенсивной терапии (ОИТ), неинвазивную (двухуровневую или постоянное положительное давление в дыхательных путях) или инвазивную механическую вентиляцию легких или смерть в течение 28 дней.Вторичные исходы включали: смерть от всех причин; совокупность любой механической вентиляции легких или смерти от любой причины; Поступление в отделение интенсивной терапии или смерть по любой причине; дни без вентилятора живы; дни без органной поддержки живы; Дни без интенсивной терапии живы; свободные дни в больнице живы; заместительная почечная терапия; Венозная тромбоэмболия; артериальная тромбоэмболия; и уровень D-димера через 2 дня ± 24 часа после рандомизации.

В исследование было включено 465 пациентов, включенных в период с 29 мая 2020 г. по 12 апреля 2021 г. в 28 центрах в 6 странах 10 стран (Канада, Саудовская Аравия, Бразилия, США, Ирландия и Объединенные Арабские Эмираты).Пациенты должны были иметь уровни D-димера выше верхнего предела нормы (ВГН) местной больницы при наличии насыщения кислородом ≤93% в воздухе помещения или ≥2-кратного ВГН независимо от насыщения кислородом. По сравнению с мультиплатформенным испытанием большее количество пациентов в испытании RAPID получали другие виды лечения с подтвержденными доказательствами его пользы; 77% пациентов принимали стероиды, 5% — тоцилизумаб и 13% — ремдесивир.

Исходы у пациентов средней степени тяжести

Мультиплатформенное исследование показало, что антикоагулянтная терапия в терапевтических дозах увеличивает количество дней без поддержки органов по сравнению с обычной тромбопрофилактикой с апостериорной вероятностью 99.0% (медианное скорректированное отношение шансов 1,29, 95% доверительный интервал (CrI) 1,04–1,61). В общей сложности 76,4% пациентов в группе тромбопрофилактики с обычным уходом дожили до выписки из больницы, не требуя поддержки органов в течение первых 21 дня, по сравнению с 80,2% в группе терапевтических доз. Медиана скорректированного абсолютного улучшения выживаемости без органной поддержки до выписки из больницы составила 4,6% с терапевтической антикоагулянтной терапией (КИ 95% от 0,7 до 8,1). Статистически значимой разницы между группами по вторичной конечной точке — выживаемости до выписки из больницы — не было — 91.8% пациентов, получавших обычную тромбопрофилактику, дожили до выписки из больницы по сравнению с 92,7% в группе терапевтических доз антикоагулянтов (среднее отношение шансов с поправкой на возраст, пол, местонахождение, слой D-димера и временную эпоху включения 1,21, 95% CrI 0,87–1,68).

Исследование RAPID не показало различий в первичном исходе (сочетание госпитализации в ОИТ, неинвазивной или инвазивной искусственной вентиляции легких или смерти до 28 дней) между группами. Этот результат произошел у 16,2% пациентов, получавших терапевтический гепарин, и у 21.9% назначали профилактический гепарин (отношение шансов, 0,69; 95% доверительный интервал [ДИ], от 0,43 до 1,10, p = 0,12). В группе терапевтического гепарина частота летальных исходов была ниже; смерть от любой причины произошла у 4 пациентов (1,8%), получавших терапевтический гепарин, и у 18 (7,6%) пациентов, получавших гепарин профилактически (отношение шансов 0,22; 95% -ный доверительный интервал 0,07–0,65).

Сильное кровотечение произошло в 1.86% в группе терапевтических антикоагулянтов по сравнению с 0,86% в группе тромбопрофилактики с обычным уходом в мультиплатформенном исследовании, со средним скорректированным отношением шансов для вторичной конечной точки отсутствия большого кровотечения с терапевтической антикоагулянтной терапией по сравнению с тромбопрофилактикой обычного ухода 0,56 (95% CrI 0,27–1,11). Явные и симптоматические кровотечения в критической области или органе были редкими: 9 случаев в группе терапевтической антикоагуляции и 1 случай в группе тромбопрофилактики с обычным уходом.Было 3 смертельных кровотечения в группе терапевтической антикоагуляции и 1 смертельное кровотечение в группе тромбопрофилактики с обычным уходом). Сильное кровотечение произошло у 2 пациентов в группе терапевтического гепарина и у 4 пациентов в группе профилактики (отношение шансов 0,52; 95% -ный доверительный интервал от 0,09 до 2,85) в исследовании RAPID. В этом испытании не было случаев смертельного кровотечения и случаев внутричерепного кровоизлияния.

Был проведен метаанализ RAPID и мультиплатформенности для оценки результатов безопасности и эффективности для пациентов с умеренными заболеваниями.Не было значительного снижения смертности от всех причин (отношение шансов 0,74; 95% -ный доверительный интервал 0,54–1,02) при приеме терапевтического гепарина. Наблюдалось значительное сокращение совокупности смерти или инвазивной ИВЛ (отношение шансов 0,77; 95% -ный доверительный интервал от 0,60 до 0,99), смерти или поддержки органов (отношение шансов 0,77; 95% -ный доверительный интервал от 0,63 до 0,93), смерти или серьезное тромботическое событие (отношение шансов, 0,64; 95% -ный ДИ, от 0,48 до 0,86), и серьезные тромботические события (отношение шансов, 0,47; 95% -ный ДИ, от 0,25 до 0,87). Наблюдалось значительное сокращение количества дней жизни без ИВЛ (отношение шансов, 1.30; 95% -CI от 1,05 до 1,61) и дни жизни без поддержки органов (отношение шансов 1,31, 95% от 1,08 до 1,60) с терапевтическим гепарином. Наблюдалось незначительное увеличение большого кровотечения. ⁷

Исходы у тяжелобольных

Мультиплатформенное испытание продемонстрировало, что среднее скорректированное отношение пропорциональных шансов для эффекта терапевтической антикоагуляции в дни без поддержки органов составляло 0,87 (95% CrI 0,70–1,08), что дает апостериорную вероятность бесполезности 99.8% и апостериорная вероятность неполноценности 89,4%. Среднее значение дней без поддержки органов составляло 3 (межквартильный размах -1, 16) у участников, рандомизированных для получения терапевтической антикоагуляции, по сравнению с 5 (межквартильный размах -1, 16) у пациентов, которым была назначена обычная тромбопрофилактика.

Обильное кровотечение произошло у 3,1% пациентов в группе терапевтических антикоагулянтов по сравнению с 2,4% пациентов в группе тромбопрофилактики с обычным уходом в мультиплатформенном исследовании со средним скорректированным пропорциональным отношением шансов для конечной точки безопасности большого кровотечения с терапевтическими антикоагулянтами, как по сравнению с обычной терапией тромбопрофилактики 1.46 (95% CrI 0,61–3,49).

Практические соображения

Низкомолекулярные и нефракционированные гепарины обычно используются при лечении госпитализированных пациентов. Были разработаны протоколы, касающиеся их использования в специализированных группах пациентов (например, с почечной недостаточностью, ожирением). В контексте Онтарио мы считаем, что наши рекомендации не вызывают особого беспокойства по поводу стоимости, предложения в провинции, справедливости, осуществимости или приемлемости.

Следует ли продолжать или начинать терапию антикоагулянтами в терапевтических дозах тяжелобольным пациентам, у которых наблюдается клиническое улучшение и которые в настоящее время считаются умеренно больными?

Мы рекомендуем продолжить профилактическую дозу антикоагуляции у пациентов в критическом состоянии, состояние которых улучшилось и которые могут быть классифицированы как умеренно больные, если у них не появятся другие показания для терапевтических доз антикоагулянтов.Эта стратегия использовалась в протоколе мультиплатформенного исследования и, вероятно, будет воспринята клиницистами как выполнимая и приемлемая. Более того, предполагаемые противовоспалительные эффекты антикоагулянтов в терапевтических дозах, потенциально важные для предотвращения прогрессирования до критического состояния, вероятно, менее важны для пациентов, состояние которых клинически улучшается. В настоящее время недостаточно доказательств, подтверждающих «переход» к терапевтическим дозам антикоагулянтов для пациентов, состояние которых клинически улучшилось от критического до умеренного.

Следует ли продолжать лечение антикоагулянтами в терапевтических дозах умеренно больным пациентам, которые становятся тяжелобольными?

Мы рекомендуем продолжить лечение антикоагулянтами в терапевтических дозах умеренно больным пациентам с низким риском кровотечения и тяжелым заболеванием, если у них не появятся противопоказания. Эта стратегия использовалась в протоколе мультиплатформенного исследования и, вероятно, будет воспринята клиницистами как выполнимая и приемлемая. В настоящее время недостаточно доказательств, подтверждающих «переход» к профилактической дозе антикоагулянтов во время перевода в отделение интенсивной терапии.

Должны ли мы использовать стандартную или усиленную профилактическую дозу низкомолекулярного гепарина или нефракционированного гепарина?

В настоящее время недостаточно данных, чтобы рекомендовать усиленную профилактическую дозу антикоагуляции (также называемую «промежуточной дозой») пациентам, госпитализированным с COVID-19. Многоцентровое РКИ с участием 562 критически больных пациентов в 10 иранских центрах сравнивало стандартную антикоагулянтную дозу с промежуточной дозой (в дозе выше стандартной профилактики, но ниже терапевтической антикоагуляции) не выявило различий в отношении комбинированной конечной точки венозного или артериального тромбоза, лечения с помощью ЭКМО или 30-дневная смертность.Однако сообщалось об очень низкой частоте венозной тромбоэмболии, и исследование было недостаточно мощным. ¹⁴

Должны ли мы использовать гепарин с низкой молекулярной массой или нефракционированный гепарин?

Учитывая большую вариабельность антикоагулянтного ответа, повышенные требования к лабораторному мониторингу и более высокую частоту гепарин-индуцированной тромбоцитопении при применении нефракционированного гепарина по сравнению с низкомолекулярным гепарином, низкомолекулярный гепарин обычно предпочтительнее нефракционированного гепарина. ¹² Внутривенное введение нефракционированного гепарина, однако, может быть рассмотрено у пациентов с тяжелой почечной дисфункцией (клиренс креатинина менее 30 мл / мин), которым будет полезен антикоагулянт более короткого действия (например, тем, у кого высокий риск кровотечения, тем, кому требуется кратковременное лечение). периоды прерывания приема антикоагулянтов) или в ситуациях, когда всасывание лекарств при подкожном введении может быть сниженным или неустойчивым (например, анасарка).

Особенности беременности

В то время как беременные пациентки были исключены из испытаний ACTIV-4a и RAPID (беременность не указана среди критериев исключения в исследованиях ATTACC и REMAP-CAP), беременные пациенты имеют повышенный риск заболеваемости и смертности из-за COVID-19. ¹⁵ Низкомолекулярные и нефракционированные гепарины из-за своего молекулярного размера не проникают через плаценту. ¹⁶ Учитывая обширный опыт и безопасность, связанные с этими антикоагулянтами во время беременности, мы считаем, что рекомендации, изложенные в этом документе, должны применяться к беременным пациентам.

Особенности грудного вскармливания

Нефракционированный гепарин из-за его молекулярного размера не обнаруживается в грудном молоке. Небольшие количества низкомолекулярного гепарина могут проникать в грудное молоко, однако, учитывая их низкую биодоступность, не вызывают у ребенка антикоагулянтного эффекта.Учитывая обширный опыт и безопасность, связанные с обоими этими антикоагулянтами при кормлении грудью, мы считаем, что рекомендации, изложенные в этом документе, должны применяться к кормящим пациентам.

Рекомендации

Пожалуйста, см. Раздел ниже, озаглавленный «Методы, использованные для этого научного обзора», для описания критериев тяжести заболевания COVID-19.

тяжелобольные

Профилактическая доза низкомолекулярного или нефракционированного гепарина рекомендована тяжелобольным пациентам, госпитализированным с COVID-19.Эти пациенты не должны получать антикоагулянты в терапевтических дозах, если у них нет отдельных показаний для этого лечения. Антикоагулянтная терапия в терапевтических дозах у этой популяции пациентов не снижает потребность в опоре для органов и может увеличивать количество кровотечений по сравнению с профилактической дозой антикоагуляции.

Панель специально не рассматривала косвенные доказательства использования профилактических доз антикоагулянтов по сравнению с отсутствием антикоагуляции у пациентов в критическом состоянии с COVID-19.Существуют модели оценки риска для оценки тромботического риска у пациентов в критическом состоянии, но ни одна из них не была специально проверена на пациентах с COVID-19. ^8,9 Однако тяжелобольные пациенты с COVID-19 подвержены более высокому риску венозной тромбоэмболии из-за наличия острого инфекционного заболевания, органной недостаточности и могут считаться страдающими гиперкоагуляцией (учитывая высокую частоту клинически очевидного тромбоза. ). Многие тяжелобольные пациенты также имеют дополнительные факторы риска тромбоза, включая пожилой возраст и неподвижность.По этой причине все тяжелобольные пациенты считаются пациентами с высоким риском тромбоза даже после плановой профилактической антикоагуляции; Фармакологическая профилактика венозной тромбоэмболии считается стандартом лечения, если нет явных противопоказаний к кровотечению. ^10,11 По этой причине профилактическая доза антикоагуляции, вероятно, будет восприниматься клиницистами и пациентами как выполнимая и приемлемая по сравнению с отсутствием антикоагуляции. Частота серьезных кровотечений у пациентов в критическом состоянии, получающих профилактическую дозу антикоагулянтов, составляет примерно 5%; это сопоставимо с результатами мультиплатформенного исследования. ¹²

Пациенты средней степени тяжести

Терапевтическая доза низкомолекулярного или нефракционированного гепарина может рассматриваться как профилактическая антикоагулянтная доза у пациентов средней степени тяжести, у которых риск кровотечения низкий. Все остальные пациенты должны получать антикоагулянтные дозы в профилактических дозах, если у них нет отдельного показания для применения антикоагулянтов в терапевтических дозах. Антикоагулянтная терапия в терапевтических дозах может снизить потребность в опоре для органов (включая потребность в высокопроизводительном назальном кислороде) и, по-видимому, снижает тромботические явления у пациентов средней степени тяжести по сравнению с антикоагулянтной терапией более низкой интенсивности.Его преимущества для выживаемости неясны, и он может увеличить частоту кровотечений. Учитывая небольшое абсолютное снижение риска для важных для пациента исходов и известный вред, в настоящее время нельзя дать строгую рекомендацию по терапевтической дозе антикоагуляции для пациентов с умеренными заболеваниями.

Существуют модели оценки риска для оценки риска кровотечения у госпитализированных пациентов, но ни одна из них не была специально проверена на пациентах с COVID-19. ¹³ Кумулятивная частота серьезных внутрибольничных кровотечений в течение 14 дней после госпитализации у пациентов с острыми заболеваниями, госпитализированных по медицинским показаниям, составляет приблизительно 1. 9 / л, МНО более 2, исходный уровень АЧТВ более 50 секунд, гемоглобин менее 80 г / л, острый или подострый бактериальный эндокардит или одновременное использование двойной антитромбоцитарной терапии.

Меньшинство (⅓) членов группы по разработке рекомендаций проголосовало против использования терапевтических доз антикоагулянтов по сравнению с профилактическими дозами антикоагуляции у пациентов средней степени тяжести с низким риском кровотечения. Большинство (⅔) членов комиссии проголосовали за условную рекомендацию по терапевтической дозе антикоагуляции по сравнению с профилактической дозой антикоагуляции у пациентов средней степени тяжести с низким риском кровотечения. Конечная рекомендация комиссии основана на предполагаемой важности для пациентов как смертности, так и дней без поддержки органов (в частности, избегания интубации и возможного перевода в другое учреждение, если требуется более высокий уровень помощи).Эти результаты имели небольшое абсолютное преимущество, и группа отметила, что исследование RAPID показало, что, хотя терапевтическая доза антикоагуляции может снизить общую смертность, это преимущество не было подтверждено при метаанализе данных из исследования RAPID и мультиплатформенного исследования. . Они также отметили, что определение дней без поддержки органов как в мультиплатформенном исследовании, так и в исследовании RAPID включало отказ от респираторной поддержки с помощью назальной канюли с высоким потоком, что для многих пациентов было менее важным.Окончательная рекомендация комиссии также основана на предполагаемой важности выживаемости для выписки из больницы для пациентов, результат, который показал минимальную абсолютную пользу в мультиплатформенном исследовании.

Следует отметить, что имеющиеся данные об антикоагулянтной терапии отражают пациентов, которые в основном не получали другие препараты для лечения COVID-19, основанные на доказательствах, такие как тоцилизумаб и ремдесивир. Группа предположила, что при улучшенной, основанной на доказательствах терапии небольшие абсолютные преимущества антикоагуляции могут быть менее выраженными, в то время как риск кровотечений останется прежним.Группа также отмечает, что преимущества терапевтической антикоагуляции, возможно, были ослаблены в мультиплатформенном исследовании, а вред профилактической антикоагуляции, возможно, был завышен, поскольку 26,5% (227/855) пациентов в группе обычного лечения получали тромбопрофилактику с промежуточной дозой.

Панель специально не рассматривала косвенные доказательства использования профилактических доз антикоагулянтов по сравнению с отсутствием антикоагуляции у пациентов с COVID-19 средней степени тяжести. Существуют модели оценки риска для оценки тромботического риска у госпитализированных пациентов, но ни одна из них не была специально проверена на пациентах с COVID-19. ^8,9 Пациенты с COVID-19 подвержены более высокому риску венозной тромбоэмболии из-за наличия острого инфекционного заболевания и могут считаться имеющими состояние гиперкоагуляции (учитывая высокую частоту клинически очевидных тромбозов у ​​них). Многие пациенты средней степени тяжести также имеют дополнительные факторы риска тромбоза, включая возраст, неподвижность и дыхательную недостаточность. По этой причине профилактическая доза антикоагуляции, вероятно, будет восприниматься клиницистами и пациентами как выполнимая и приемлемая по сравнению с отсутствием антикоагуляции.

Тяжелобольные

В настоящее время недостаточно данных, чтобы дать рекомендации относительно антикоагулянтов для пациентов с легкими заболеваниями.

Методы, использованные в данном научном обзоре

Мы провели поиск в PubMed, Google Scholar, COVID-19 Rapid Evidence Reviews, Специальная коллекция COVID-19 Института Джоанны Бриггс, LitCovid в PubMed, Оксфордская служба доказательств COVID-19, Глобальная литература Всемирной организации здравоохранения по коронавирусной болезни и др. Ресурсы по COVID-19, перечисленные Международной сетью рекомендаций и Форумом здоровья Макмастера.Кроме того, мы получили отчеты со ссылками на соответствующие статьи через Google Scholar и просмотрели ссылки на указанные статьи для дополнительных исследований. Поиск последний раз обновлялся 20 августа 2021 г.

Для терапевтических рекомендаций мы использовали следующие определения степени тяжести:

В тяжелом состоянии

Пациенты, которым требуется поддержка вентиляции и / или кровообращения, включая интенсивный поток кислорода в носу, неинвазивную вентиляцию легких, инвазивную механическую вентиляцию легких или ЭКМО.Эти пациенты обычно проходят лечение в условиях интенсивной терапии.

Умеренно больной

Пациенты, впервые нуждающиеся в дополнительном кислороде с низким потоком. Эти пациенты обычно находятся в больничных палатах.

Легко болен

Пациенты, которым не требуется новый или дополнительный кислород по сравнению с их исходным состоянием, внутривенное введение жидкости или другая физиологическая поддержка. Эти пациенты обычно лечатся в амбулаторных / амбулаторных условиях.

1. Гупта А., Мадхаван М.В., Сегал К. и др. Внелегочные проявления COVID-19. Нат Мед . 2020; 26 (7): 1017-1032. https://doi.org/10.1038/s41591-020-0968-3

2. Нопп С., Мойк Ф., Джилма Б., Пабингер И., Ай С. Риск венозной тромбоэмболии у пациентов с COVID-19: систематический обзор и метаанализ. Res Pract Thromb Haemost . 2020; 4 (7): 1178-1191. https://doi.org/10.1002/rth3.12439

3. Потеруча Т.Дж., Либби П., Голдхабер С.З.Больше, чем антикоагулянт: обладают ли гепарины прямым противовоспалительным действием? Тромб Хемост . 2017; 117 (03): 437-444. https://doi.org/10.1160/Th26-08-0620

4. Гиппенстил Дж. А., Ла Ривьер В. Б., Кольбер Дж. Ф., Лангуэ-Астрие С. Дж., Шмидт Е. П.. Гепарин как лекарство от COVID-19: текущие данные и будущие возможности. Am J Physiol-Lung Cell Mol Physiol . 2020; 319 (2). https://doi.org/10.1152/ajplung.00199.2020

5. Следователи ATTACC, ACTIV-4a и REMAP-CAP.Лечебная антикоагуляция гепарином у тяжелобольных с Covid-19. N Engl J Med . 2021; (0). https://doi.org/10.1056/NEJMoa2103417

6. Следователи ATTACC, ACTIV-4a и REMAP-CAP. Терапевтическая антикоагуляция гепарином у некритических пациентов с Covid-19. N Engl J Med . Опубликовано онлайн 4 августа 2021 г. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2105911

7. Sholzberg M, Tang GH, Rahhal H, et al. Гепарин для пациентов с Covid-19 средней тяжести.Опубликовано онлайн 9 июля 2021 г .: 2021.07.08.21259351. https://doi.org/10.1101/2021.07.08.21259351

8. Барбар С., Новента Ф, Россетто В. и др. Модель оценки риска для выявления госпитализированных медицинских пациентов с риском венозной тромбоэмболии: оценка прогноза Падуи. J Thromb Haemost . 2010; 8 (11): 2450-2457. https://doi.org/10.1111/j.1538-7836.2010.04044.x

9. Нендаз М., Спирк Д., Кучер Н. и др. Многоцентровая проверка Женевской оценки риска для госпитализированных пациентов с риском венозной тромбоэмболии.Явная оценка риска тромбоэмболии и профилактики для медицинских ПАЦИЕНТОВ в Швейцарии (ESTIMATE). Тромб Хемост . 2014; 112 (03): 531-538. https://doi.org/10.1160/Th23-05-0427

10. Альхазани В., Лим В., Яешке Р.З., Мурад М.Х., Кейд Дж., Кук Д. Тромбопрофилактика гепарином у медико-хирургических пациентов в критическом состоянии: систематический обзор и метаанализ рандомизированных исследований. Crit Care Med . 2013; 41 (9): 2088-2098. https://doi.org/10.1097/CCM.0b013e31828cf104

11.Кук Д., Кроутер М., Мид М. и др. Тромбоз глубоких вен у медико-хирургических больных в критическом состоянии: распространенность, частота и факторы риска. Crit Care Med . 2005; 33 (7): 1565-1571. https://doi.org/10.1097/01.CCM.0000171207.95319.B2

12. Исследователи PROTECT Канадской группы клинических испытаний интенсивной терапии и Группы клинических испытаний Австралийского и новозеландского общества интенсивной терапии. Дальтепарин по сравнению с нефракционированным гепарином у тяжелобольных. N Engl J Med .Опубликовано в Интернете 7 апреля 2011 г. https://doi.org/10.1056/NEJMoa1014475

13. Decousus H, Tapson VF, Bergmann J-F и др. Факторы, связанные с риском кровотечения у пациентов при госпитализации: данные исследователей IMPROVE. СУНДУК . 2011; 139 (1): 69-79. https://doi.org/10.1378/chest.09-3081

14. ВДОХНОВЕНИЕ Исследователи, Садегипур П., Таласаз А.Х. и др. Влияние профилактической антикоагуляции промежуточной и стандартной дозой на тромботические события, лечение экстракорпоральной мембранной оксигенацией или смертность среди пациентов с COVID-19, госпитализированных в отделение интенсивной терапии: рандомизированное клиническое исследование INSPIRATION. JAMA . Опубликовано онлайн 18 марта 2021 г. https://doi.org/10.1001/jama.2021.4152

15. Zambrano LD. Обновление: Характеристики женщин репродуктивного возраста с лабораторно подтвержденной инфекцией SARS-CoV-2 в зависимости от статуса беременности — США, 22 января — 3 октября 2020 г. MMWR Morb Mortal Wkly Rep . 2020; 69. https://doi.org/10.15585/mmwr.mm6944e3

16. Американский колледж акушеров и гинекологов. Практический бюллетень ACOG No.196: Тромбоэмболия при беременности. Акушерский гинекол . 2018; 132 (1). https://doi.org/10.1097/AOG.0000000000002706

Вклад авторов: SC написал первый проект научного обзора. Все авторы внесли свой вклад в концепцию научного обзора, критически отредактировали его с точки зрения важного интеллектуального содержания и одобрили окончательную версию.

Авторы хотели бы поблагодарить всех членов Рабочей группы по клиническим рекомендациям по лекарственным и биологическим средствам за их вклад в этот научный обзор.Список участников указан здесь: https://covid19-sciencetable.ca/about/.

Руководство по клинической практике лекарственных и биопрепаратов Онтарио COVID и соответствующие научные справки в настоящее время доступны на https://antimicrobialstewardship.com и https://covid19-sciencetable.ca/sciencebrief/.

Выражение признательности: Авторы хотели бы отметить важный вклад Комитета по клиническим практическим рекомендациям по противомикробным и иммуномодулирующим препаратам Онтарио COVID-19 на протяжении всей пандемии COVID-19.В их число входят: Карим Али, доктор медицины, Niagara Health System; Амир Амири, партнер-пациент; Ниша Андани, доктор медицинских наук, Центр медицинских наук Саннибрук; Салли Бин, специалист по этике, Центр медицинских наук Саннибрук; Зайн Чагла, доктор медицинских наук, Hamilton Health Sciences; Билл Чиккотелли, доктор медицины, больница Гранд-Ривер; Павани Дас, доктор медицины, больница общего профиля в Северном Йорке; Линда Дрессер, фармацевт, Университетская сеть здравоохранения; Самир Эльсайед, доктор медицины, LHSC Victoria Hospital; Уэйн Голд, доктор медицинских наук, Университетская сеть здравоохранения; Кевин Гоф, доктор медицины, больница Святого Михаила, Unity Health Toronto; Крис Грэм, доктор медицины, Trillium Health Partners; Ребекка Гринберг, специалист по этике, Sinai Health; Шахид Хусейн, доктор медицины, Университетская сеть здравоохранения; Нил Ирфан, бакалавр фармацевтических наук, Hamilton Health Sciences; Сьюзан Джон, доктор медицины, Сеть здравоохранения Скарборо; Руперт Каул, доктор медицины, Университетская сеть здравоохранения; Элизабет Люнг, PharmD MSCI, St.Больница Майкла, Unity Health Toronto; Брайан Миннема, доктор медицины, больница Св. Иосифа, Unity Health Toronto; Джея Надараджа, доктор медицины, магистр медицины, больница Маркхэма Стоуффвилля; Кэролайн Нотт, доктор медицины, больница Оттавы; Лесли Палмей, бакалавр, бакалавр наук, магистр наук, Центр медицинских наук Саннибрук; Александра Персичино, бакалавр наук, Региональный центр медицинских наук Тандер-Бей; Сумит Райбардхан, магистр здравоохранения, больница общего профиля Северного Йорка; Кэтрин Тимберлейк, фармацевт, больница для больных детей; Лилиана Вольникова, партнер-пациент; Анупма Вадхва, доктор медицинских наук, Госпиталь для больных детей; Эван Уилсон, доктор медицинских наук, Центр медицинских наук Кингстона; Питер Ву, доктор медицинских наук, Университетская сеть здравоохранения; Иван Ин, доктор медицины, Mackenzie Health.

Ссылка : Карлин С., Моррис А.М., Абдуррахман З. и др. Антикоагулянтная терапия гепарином для госпитализированных пациентов с COVID-19. Science Briefs of the Ontario COVID-19 Science Advisory Table . 2021; 2 (41). https://doi.org/10.47326/ocsat.2021.02.41.1.0

Принадлежность авторов: Сведения о принадлежности членов Научной консультативной таблицы по COVID-19 Онтарио можно найти по адресу https://covid19-sciencetable.ca/.

Заявления о заинтересованности: Заявления о заинтересованности членов Научного консультативного совета по COVID-19 в Онтарио, его рабочих групп или партнеров можно найти по адресу https: // covid19-sciencetable.ca /. Заявления об интересах внешних авторов можно найти в разделе «Дополнительные ресурсы».

Авторские права: Научно-консультативный стол по COVID-19, 2021 г., Онтарио. Это документ с открытым доступом, распространяемый в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Взгляды и выводы, выраженные в этом научном обзоре, принадлежат авторам и не обязательно отражают взгляды всех членов Научного консультативного стола Онтарио по COVID-19, его рабочих групп или его партнеров.

Лечение и профилактика дифтерии | Смитсоновский институт

Чтобы пропустить текст и перейти непосредственно к объектам, НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ

Дифтерия вызывается бактериями. Однако в первую очередь симптомы вызывают токсины, вырабатываемые бактериями, а не сами бактерии. То же касается столбняка и коклюша. В настоящее время все три этих заболевания можно лечить с помощью одной комбинированной вакцины. Коллекции музея содержат предметы, свидетельствующие об уникальной разработке вакцины против дифтерии.

В 2017 году дифтерия неизвестна многим американцам. Тем не менее, до появления антитоксина против дифтерии и вакцин эта болезнь была постоянным источником ужаса. Болезнь была особенно опасна для маленьких детей и была известна как «бич детства».

Бактерии, вызывающие дифтерию, проникают в слизистую оболочку дыхательной системы, где затем производят токсины. Поскольку токсины убивают ткани дыхательной системы, мертвая ткань накапливается и образует псевдомембрану — толстый серый слой в горле и носу, который чрезвычайно затрудняет дыхание и глотание.Токсины также могут повредить почки, сердце и нервы. Таким образом, болезнь одновременно отравляет и удушает своих жертв, давая ей другое имя: «ангел-душитель».

Дифтерийные пастилки Спенсера, ок. 1890. Производитель продукта утверждал, что испарения, производимые пастилками, могут предотвращать и лечить дифтерию, уничтожая «все заразные, гнилостные и болезнетворные микробы».

Даже сегодня болезнь представляет собой серьезную угрозу. CDC сообщает, что около 50% жертв, не получающих лечения, умирают от болезни.Из тех, кто все же проходит лечение, 10% все еще умирают.

До начала 20 века возможности лечения были ограничены. Чтобы попытаться спасти пациента от удушья псевдомембраной, врачи провели процедуры трахеотомии или интубации. Во время трахеотомии разрез кожи шеи и трахеи сделан; в разрез вставлялась трубка, и пациент дышал через трубку. Для процедуры интубации разрез не требовался, вместо этого врачи пытались сохранить дыхательные пути открытыми, вставляя небольшую трубку в гортань.Эти процедуры часто были безуспешными.

Набор для интубации, продаваемый Haussmann, McComb & Dunn, 122 Randolph St., Чикаго, 1886-1891. В комплект входит кляп для рта, чтобы пациент оставался открытым. Одна из позолоченных интубационных трубок О’Двайера должна была быть вставлена, чтобы дыхательные пути пациента оставались открытыми. Инструмент для введения использовался для вставки трубки, а инструмент для извлечения — для ее удаления.

В 1890 году Шибасабуро Китасато и Эмиль фон Беринг в Германии открыли эффективное средство от дифтерии — антитоксин.Фармацевтические компании и агентства общественного здравоохранения всерьез приступили к разработке новой сывороточной терапии.

Департамент здравоохранения Нью-Йорка, в частности, занимался крупномасштабным производством антитоксина. Лошадям давали постепенно увеличивающиеся дозы токсинов дифтерии, и в их организме вырабатывались антитоксины (антитела) для нейтрализации этих токсинов. Лошади были слабо затронуты токсинами, но их тела были способны вырабатывать большое количество антитоксиновой сыворотки. У лошадей была взята кровь, из крови была собрана и обработана антитоксиновая сыворотка.При введении пациенту с дифтерией лошадиные антитела нейтрализовали токсины, отравляющие пациента. В лабораториях Департамента был конюшня с лошадьми, производящими сыворотку, которые они снабжали Нью-Йорком и другими районами страны антитоксином от дифтерии.

Журнал регистрации животных, 1897 год. Сотрудники лаборатории Департамента здравоохранения и психической гигиены города Нью-Йорка использовали эту книгу для записи описаний и статистических данных по каждой лошади, которую они использовали для производства антитоксина дифтерии.

Anti-Diphtheritic Serum No. 3, 1898. В 1898 году в музее были получены от Parke, Davis & Co. некоторые из первых коммерческих антитоксинов, произведенных в Америке.

Памятная медаль, Ненана — Ном: За героическую службу, Компания Х. К. Малфорда, 1925 г. Копия медалей, врученных Компанией Х. К. Малфорда водителям собачьих упряжек, которые привезли антитоксин против дифтерии в Ном, Аляска. Ведущий ездовой пес Балто стал национальной знаменитостью и совершил поездку по стране.

Вспышка дифтерии в 1925 году в Номе, Аляска, привлекла внимание всей страны к потребности страны в антитоксине против дифтерии. Когда город засыпал снегом, упряжка на собачьих упряжках помчалась за 674 мили от Ненаны до Нома за пять дней и остановила эпидемию. Событие ежегодно отмечается гонками на собачьих упряжках Iditarod Trail.

Сыворотка от дифтерии спасала жизнь, но не предотвращала заражение дифтерией. В 1914 году Уильям Х. Парк из Департамента здравоохранения Нью-Йорка изобрел первую вакцину против дифтерии.Основываясь на более ранней работе Беринга, Парк точно смешал дифтерийный антитоксин с дифтерийным токсином. Полученная смесь содержала достаточно токсинов, чтобы побудить организм вырабатывать собственные защитные антитела, но также и достаточно антитоксина для защиты организма, пока он развивал эту защиту.

Смесь дифтерийного токсина и антитоксина — средство для профилактики дифтерии, от Parke, Davis & Co., Ок. 1940.

Кампании вакцинации были начаты для иммунизации школьников против дифтерии.Однако для эффективной вакцинации большой популяции от дифтерии требовался тест, чтобы определить, какие люди уже имели иммунитет к дифтерии, а какие нет. К счастью, в 1913 году Бела Шик разработал именно такой тест. Крошечная доза дифтерийного токсина была введена в кожу одного предплечья, а доза инактивированного токсина была введена в другую руку, чтобы служить контролем. Если у человека нет иммунитета (нет антител), вокруг места инъекции появятся покраснение и припухлость.Никакой значительной реакции не произошло бы, если бы человек был невосприимчив к дифтерии в результате предшествующего контакта с этой болезнью.

Токсин дифтерии для теста Шика и контроля теста Шика (нагретый токсин), Eli Lilly & Company, приблизительно 1952 год.

В 1923 году два исследователя, Александр Томас Гленни и Гастон Рамон, работая по отдельности, разработали тот же метод. для инактивации токсина дифтерии. Инактивированный токсин, известный как анатоксин, не отравил организм, но заставил его вырабатывать антитела.Однако эта новая токсоидная вакцина не создавала такого же высокого уровня иммунитета к дифтерии, которого достигала смесь антитоксин-токсин. Три года спустя Гленни разработал метод повышения иммунитета, вырабатываемого токсоидной вакциной: он использовал адъювант — вещество, которое усиливает иммунный ответ организма на вакцину. В течение следующего десятилетия токсоидная вакцина постепенно заменила смесь антитоксина и токсина. Анатоксиновая вакцина стала наиболее эффективным и общепринятым методом профилактики дифтерии и используется до сих пор.

Дифтерийный анатоксин (анатоксин-рамон) Bio.